羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对陕西省关中某奶山羊养殖场呼吸道症状引发死亡的羔羊进行病原检测。无菌采集死亡羔羊肺脏组织接种50 mL/L绵羊血琼脂平板,分别置于恒温培养箱与厌氧培养箱中36℃±1℃培养24 h,厌氧培养平板无菌生长,恒温培养血平板上可见大量溶血的灰白色、半透明的圆形菌落,挑取单菌落纯化培养后对分离株进行染色镜检、生化鉴定、16S rRNA的PCR扩增和测序及遗传进化分析、血清型分型、药敏试验和小鼠致病性试验。结果显示,纯化后细菌在血琼脂平板上为圆形露珠样菌落;革兰氏染色镜检为阴性球杆菌;16S rRNA测序结果为溶血性曼氏杆菌,进一步分型为血清2型;分离株对头孢噻呋钠、多西环素等药物敏感,对氨苄西林、庆大霉素中度敏感,对青霉素、替米考星等药物耐药;感染小鼠于24 h内死亡,剖检可见胸腔黏连和化脓性肺炎,由死亡小鼠肺脏中可再次分离到溶血性曼氏杆菌。表明造成这次羔羊死亡的病原菌为溶血性曼氏杆菌,结果对羊溶血性曼氏杆菌的病原检测和临床防治提供了参考。     

某奶牛场奶牛子宫内膜炎致病菌的分离鉴定

采集10头已确诊临床型奶牛子宫内膜炎患牛的子宫内容物,通过需氧和厌氧培养,根据细菌形态学及细菌生化特性进行分离鉴定。结果分离鉴定出3种27株细菌,分别为溶血性链球菌、非溶血性链球菌和大肠埃希菌。链球菌感染率为100%,溶血性链球菌感染率为70%,非溶血性链球菌感染率为30%。链球菌中,缺陷乏养球菌、毗邻乏养球菌和粪肠球菌所占比例较大。10份样品均分离到细菌,感染率为100%,其中绝大部分为多菌种混合感染。     

36株气单胞菌外毒素溶血性和致病性的测定

溶血试验和动物试验检测３６株气单胞菌外毒素的溶血性和致病性。结果显示其中３０株细菌产生的外毒素有溶血性。溶血价在菌株间差异较大。毒素的溶血介与对实验动物的致死率有明显相关性,溶血价在１：１６以上的外毒素对小鼠的致死率均为１００％,溶血价在１：８以下的餐毒素对小鼠的致死率在０￣１００％。此外,两株浊和气单力培养物无菌上清液无溶血性,但对小鼠的致死率达６６．６％,可能与细菌产生了胞外蛋白酶有关。     

绵羊链球菌病及防治

从新疆南山某牧场患绵羊链球菌病的羊中分离１株β溶血性绵羊链球菌细菌在马丁血８清肉汤培养基中,细菌抹片呈革兰氏阳性、排列呈长链状。对兔有致病性。     

南江黄羊不明原因疾病的病因调查研究

为查明近几年南平市黄羊不明原因疾病的病因,寻找有效的预防、治疗方法,尽快控制该病的流行。在该病流行季节用无菌方法采集发病后期病羊脏器组织接种绵羊血平板培养基进行细菌分离培养和组织病理检查;采集发病后期病羊颈静脉血,制成血片染色,在显微镜下检查焦虫;采集病羊血清检测钩端螺旋体抗体。结果从病羊组织中培养出溶血性巴斯德氏菌;病羊多个脏器都发生病理变化,死于败血症、急性肝坏死;未检出钩端螺旋体和焦虫。经药敏试验测得该分离菌对头孢类、喹诺酮类敏感。最后诊断该可疑疫病的主要病原为溶血性巴斯德氏菌。     

一例羊皮下脓肿病原的分离鉴定及药敏试验

为确定某羊场一例羊皮下脓肿病的病原，将病料样本接种于TSA固体培养基进行病原分离，然后对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验和生物信息学分析。结果分离到1株革兰氏阳性球菌和1株革兰氏阴性短杆菌，经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析，鉴定该分离菌株为金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌；2株细菌对头孢曲松、链霉素、四环素、多西环素、左氧氟沙星等多种药物敏感。     

狐源屎肠球菌的分离鉴定及药敏试验

为研究病死狐的发病原因,从死亡狐狸肺脏中分离出1株细菌,命名为分离株11001。然后对分离菌株进行形态学鉴定、16S rRNA鉴定、特异PCR检测、药敏试验、毒力基因检测以及致病性试验。结果表明,分离株培养可见灰色干燥小菌落,革兰氏阳性球状菌,16S rRNA鉴定为屎肠球菌,PCR扩增条带为112 bp,与屎肠球菌片段大小一致;毒力基因检测显示该分离株携带屎肠球菌的致病基因,对氯霉素及万古霉素表现出一定的敏感性。致病性试验显示,接种分离株小鼠死亡。证实该株狐源分离株为屎肠球菌,且具有致病性,可能是引起狐狸死亡的主要原因。     

不同海产品中副溶性弧菌的监测

对大通县几个农贸市场采集的32份海产品样品,应用常规细菌分离法进行副溶血性弧菌的检测,经细菌分离、增菌培养、形态观察、染色镜检、三塘铁、生化特性和嗜盐性试验测定,检出的4份阳性菌是副溶血性弧菌,阳性率为12.5%,同时通过小白鼠致病性试验证明4份阳性菌都有致死效应。     

一起藏绵羊溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的实验室诊断

为查明2021年四川省甘孜州某藏绵羊养殖场呼吸道疾病的发病病因,本研究采用PCR方法对送检的5份深部鼻腔棉拭子进行了“山羊副流感病毒3型、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛冠状病毒、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体、丝状支原体簇成员”等常见呼吸道病原的检测。结果显示：多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌为阳性,其他病原为阴性;通过细菌分离培养成功获得5株溶血性曼氏杆菌和5株多杀性巴氏杆菌;分型结果显示5株溶血性曼氏杆菌为A2型,5株多杀性巴氏杆菌为D型。结合临床症状,确诊该场藏绵羊的呼吸道疾病是由A2型溶血性曼氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌混合感染所致。     

猪源马链球菌兽疫亚种分离鉴定

为确诊广东省江门市某规模化猪场保育仔猪发生脑膜炎死亡的病因,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、溶血性观察、生化鉴定、小鼠毒力试验和药敏试验、16S rRNA及M蛋白(SzP)基因序列分析进行鉴定。结果:从发病猪脑顶叶分离到1株致病菌,命名为SEZ20180618,分离菌在鲜血平板上生长出微隆起、圆滑湿润的小菌落,呈β溶血,革兰染色阳性、呈链状排列的球菌;16S rRNA基因序列分析显示,分离菌与马链球菌兽疫亚种处于同一分支,同源性在97%以上;SzP氨基酸序列与马链球菌兽疫亚种CT株、Cxy012株、SH00166株等参考菌株的相应序列同源性为100%。分离菌株SEZ20180618对BALB/c小鼠具有较强的毒力,对BALB/c小鼠的半数致死量为1.54×10~6 CFU;分离菌对阿莫西林、青霉素、庆大霉素等14种临床常用抗菌药物均敏感,对阿米卡星和复方新诺明2种药物中度敏感。     

广西猪流产胎儿溶血葡萄球菌的分离鉴定及其16S rDNA基因系统进化分析

为了查清引起母猪流产的原因,从送检流产胎儿的内脏组织中分离培养细菌,对分离菌株进行革兰氏染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rDNA基因序列测定、同源性分析及系统进化树构建。结果表明,分离菌株为革兰氏阳性球菌,其生长特性、菌落特征、生化试验鉴定结果基本符合《常见细菌系统鉴定手册》中溶血葡萄球菌的生化特性;但在血琼脂培养基上并未出现溶血现象。药敏试验结果表明,分离菌株仅对新生霉素、利福平和米诺环素敏感,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物严重耐药。分离菌株16SrDNA基因与12株不同来源的溶血葡萄球菌同源性在99.8%～99.9%之间,与溶血葡萄球菌MER TA39菌株(KT719446.1)遗传进化距离最相近。小鼠致病性试验表明,分离菌株能导致小鼠出现行动迟缓、扎堆和被毛燥乱等临床症状,并能从小鼠体内分离出相同形态特征和菌体特征的菌株。表明从猪流产胎儿体内分离到的菌株是存在多重耐药性的γ-溶血葡萄球菌。     

一株致病性粪肠球菌的分离与鉴定

从1羽发病雏鸡中分离到1株溶血性革兰氏阳性球菌。初步分离鉴定后经攻毒试验能够造成小白鼠和雏鸡死亡,具有致病性。药敏试验表明,该菌对多种药物均表现耐药性,仅对庆大霉素、青霉素、氧氟沙星敏感。通过BLAST软件分析该菌株的16S rRNA序列,确定该致病性细菌为粪肠球菌。     

舟山沿海贝类产品中副溶血性弧菌的检测与毒力基因分析

为了解舟山沿海贝类产品中副溶血性弧菌污染情况,我们于2008年3个不同季节,从不同的农贸市场采集贝类标本,采用实时荧光定量PCR检测方法和常规培养方法,对舟山沿海贝类产品中的副溶血性弧菌进行了检测,同时对分离到的菌株进行血清学分型和毒力基因检测。结果60份贝类产品中,采用常规的分离培养方法,阳性率为83.33%,而采用实时荧光定量PCR检测方法,全部检出副溶血性弧菌。对分离到的50株副溶血性弧菌进行耐热溶血素(tdh)基因检测,结果4株tdh阳性。监测结果表明舟山贝类海产品中携带副溶血性弧菌情况比较严重,应引起足够的重视。     

一大型规模猪场附红细胞体和溶血性葡萄球菌混合感染的诊治

2020年8月底，江苏省某猪场断尾、阉割仔猪出现大量急性死亡，病情持续2个月左右。为确诊引起死亡的原因，11月中旬，对送检的4只发病仔猪进行了剖检和实验室诊断。根据流行史、临床症状、剖检病变，以及心血涂片和脏器触片检查结果进行初步诊断，结合细菌和分子生物学检测结果进行确诊。结果显示：剖检病变多呈黄染、败血性变化，脏器触片检查观察到大量球形、圆形蓝紫色细菌；经16S rRNA序列比对，病变组织中分离、纯化的细菌被鉴定为溶血性葡萄球菌；心血涂片检查发现大量红细胞变形，呈星芒状、锯齿状和半月状等不规则形状，符合附红细胞体特征，且经PCR扩增出特异性条带。最终确诊，引起该规模猪场仔猪死亡的病因为附红细胞体与溶血性葡萄球菌混合感染。根据诊断结果针对性给药，5 d后该猪场疫情得到有效控制。本病例的诊断结合了现代分子生物学方法和经典检测方法，这对于混合感染的诊断有着重要作用。     

牦牛隐性乳房炎的调查及致病菌的分离鉴定

为调查阿坝州红原县牦牛隐性乳房炎的发病情况,无菌采取68份无临床乳房炎牦牛奶样,采用体细胞计数、细菌分离培养、革兰染色与PCR相结合的方法分离鉴定细菌种属,并统计分析体细胞数与细菌分离情况的相关性。结果显示,牦牛奶样体细胞数从4 000个/mL～240 000个/mL不等;各种细菌阳性奶样数分别为金黄色葡萄球菌1份,溶血性葡萄球菌30份,非溶血性葡萄球17份,大肠埃希菌2份,乳酸乳球菌18份和藤黄微球菌2份;未分离到无乳、停乳、乳房链球菌。结果表明,分离到溶血性葡萄球菌的牦牛奶样体细胞平均数显著高于未分离到溶血性葡萄球菌的牦牛奶样体细胞的平均数(P0.05),当牦牛奶中体细胞数大于90 000个/mL时,溶血性葡萄球菌的阳性率大于80%(10/12)。研究结果提示溶血性葡萄球菌是引起牦牛隐性乳房炎的病原菌,为牦牛隐性乳房炎的防控提供了依据。     

昆明某猪场猪皮脓病的病原学诊断

昆明某猪场猪出现以关节及皮肤脓肿、发育迟缓为特征的疾病。为查明病因,本试验采集自各病猪的关节渗出液、脓汁,取病料组织划线于血琼脂平板培养,对形成的溶血性菌落采用高盐培养、革兰染色、触酶试验、凝固酶试验和药敏试验,并使用细菌16S rRNA基因通用引物扩增分离株DNA片段,琼脂糖凝胶电泳胶回收产物,经过TA克隆后测序分析。结果发现,溶血性菌株为革兰阳性的球菌,触酶试验和凝固酶试验均呈阳性,PCR扩增出1 476bp的单一条带,其基因序列与金黄色葡萄球菌DNA同源性达99%。试验结果表明,引起该猪场皮脓病的主要原因是金黄色葡萄球菌感染。     

市售仔虾中副溶血性弧菌的检测

应用常规细菌分离法对西宁市某几个农贸市场采集的70份仔虾样品进行了副溶血性弧菌的检测,经细菌形态观察、嗜盐性试验、细胞色素氧化酶试验和生化特性测定,结果鉴定为副溶血性弧菌。检出阳性菌株4株,阳性率为5.7%（4/70）,同时通过致病性试验证明4株分离菌对小白鼠有致死效应。     

一株黑叶猴源鸟肠球菌的分离鉴定及耐药分析

黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测。结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16S r RNA的PCR鉴定,该分离株为鸟肠球菌,将其命名为GZ1811;16S rRNA基因的同源性分析及进化树结果显示,GZ1811株与GenBank中鸟肠球菌的一致性为100%;小鼠致病性试验结果显示,小鼠出现临床症状,甚至死亡,解剖可见其肺脏有散在出血点;药敏试验结果显示,分离株对四环素等药物耐药。耐药基因PCR检测结果显示分离菌株的四环素类耐药基因tetM呈阳性,表明耐药表型和耐药基因型一致。本实验为黑叶猴鸟肠球菌病的诊断和防治提供具有科学价值的参考依据。     

2株山羊溶血性曼氏杆菌鉴定与分型

为了研究感染羊引起肺炎的溶血性曼氏杆菌的分子特征,分别从2只山羊肺部分离细菌,在血琼脂平板上分离纯化后,经培养、革兰染色镜检、生化试验、16S rDNA序列鉴定,结合临床症状鉴定这2株细菌为溶血性曼氏杆菌,分别命名为NH1、NH2。采用PCR方法,对2株溶血性曼氏杆菌进行血清型1型、2型和6型的鉴定,结果2株细菌均为血清型2型。采用多位点序列分型法对2株溶血性曼氏杆菌的7个管家基因扩增并测序,结果等位基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf的序号分别为1、1、3、1、1、1和4, 2株分离菌序列型一致,均是ST46。通过纸片扩散试验检测细菌对抗菌药物的敏感性,MH1对链霉素耐药,对多西环素和妥布霉素中介,对其他13种药物均敏感;MH2对链霉素中介,对其他15种药物均敏感。     

猪蓝耳病与葡萄球菌病混合感染的诊断

为确诊某养猪场死亡病例的病因,采集病死猪内脏组织进行细菌分离鉴定和猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪蓝耳病病毒PCR检测。结果:(1)送检猪肝脏样本分离培养出呈金黄色的菌落,染色镜检可见菌体呈葡萄串状排列的革兰氏阳性球菌,经生化试验鉴定为金黄色葡萄球菌;(2)送检猪组织样本检出猪蓝耳病病毒特异性DNA片段,未检出猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒特异性DNA片段。综合诊断为猪蓝耳病病毒与金黄色葡萄球菌混合感染。