归芎益母散治疗奶牛血瘀型胎衣不下的扩大临床试验研究

在实验性临床研究基础上,进一步验证归芎益母散推荐有效剂量400 g/头治疗奶牛血瘀型胎衣不下的临床疗效。将纳入研究的193头血瘀型奶牛随机分为2组,其中药物对照组96头和归芎益母散组97头,以滞留胎衣排出为主要疗效评价指标,以受试奶牛产褥期子宫炎继发感染率和产后180 d内繁育性能为次要疗效评价指标,综合评价归芎益母散的临床效果。与阳性药物对照组比较,归芎益母散组中受试奶牛的首次给药72 h内滞留胎衣排出率提高(89.7%vs. 72.9%,P0.01),一次给药滞留胎衣排出率提高(70.7%vs. 50.0%,P=0.013),而给药次数减少(1.7±0.9 vs. 2.0±1.4,P0.05);产褥期子宫炎感染率降低(15.5%vs.24.0%,P0.01),同时可提高受试奶牛的繁育性能,包括产后首次配种时间提前(66.6±19.1 d vs. 78.7±25.6 d,P0.01),首次配种怀孕率提高(70.6%vs. 26.4%,P0.01),配种次数降低(1.8±1.3 vs.2.6±1.3,P0.01),产后180 d内总怀孕率提高(90.6%vs. 71.9%,P0.01),同时空怀时间缩短(87.3±42.7 d vs. 120.9±47.3 d,P0.01)。试验期间未发现药物相关不良反应。以归芎益母散推荐有效剂量(400 g/头)治疗奶牛血瘀型胎衣不下,可有效促进滞留胎衣排出,降低产褥期子宫炎的发生风险,并能有效改善患牛的繁育性能,临床疗效确切,安全性好。     

归芎益母散对奶牛血瘀型胎衣不下的治疗作用

为了探讨归芎益母散治疗奶牛血瘀型胎衣不下的作用,将40头血瘀型胎衣不下奶牛,随机分为4组,每组10头,分别为归芎益母散高、中、低剂量组(分别为800、400、200 g/头),以及药物对照组(250 g/头,益母生化散),经口灌服给药,每天1次,用药1 d～3 d。另选10头健康奶牛作为空白对照组。结果表明,与药物对照组(治愈率为70%)比较,高、中、低剂量组治愈率为90%、90%、50%(P>0.05),给药后第0天,与空白对照组比较,患病奶牛ET-1、TXB2显著升高(P<0.01,P<0.05),NO、6-keto-PGF_1ɑ显著降低(P<0.01),ET-1/NO、TXB_2/6-keto-PGF_1ɑ显著增大(P<0.01)。用药后第7、14、21天,与药物对照组相比,高、中剂量组ET-1、TXB_2水平降低,NO、6-keto-PGF_1ɑ水平升高,ET-1/NO、TXB_2/6-keto-PGF_1ɑ减小。说明归芎益母散能够通过对抗内皮功能紊乱和血小板功能紊乱,缓解患牛血瘀状态,从而改善子宫血液循环及微循环障碍,调节子宫节律性收缩,促进子宫内滞留胎衣排出,临床推荐使用剂量为400 g/头,经口灌服,每天1次,用药1 d～3 d。     

归芎益母散对奶牛的靶动物安全性试验

选择20头健康奶牛,随机分为4组,每组5头。各组以0倍剂量(空白对照组)、1倍推荐剂量(400g/头,Ⅰ组)、3倍推荐剂量(1 200g/头,Ⅱ组)、5倍推荐剂量(2 000g/头,Ⅲ组)的归芎益母散经口灌服给药,每天1次,连用3d。试验期间,监测分析受试奶牛的临床症状以及给药后0,4,7,14d的产奶量变化和血液学指标。结果显示:与对照组比较,不同剂量的归芎益母散对受试奶牛的健康状况、日均产奶量和血液学生理指标均无不良影响(P0.05);在用药后4d,Ⅲ组奶牛的AST、BUN水平显著升高(P0.05),ALT、TG和CRE水平极显著升高(P0.01);在用药后7d,Ⅲ组奶牛的ALT、AST、BUN和CRE水平显著升高(P0.05),TG水平极显著升高(P0.01);用药后14d,与对照组相比,Ⅲ组奶牛血液生化指标差异均不显著(P0.05)。结果表明:归芎益母散至少以3倍推荐剂量口服给药对靶动物奶牛是安全的。     

中兽医指导下抓主证识病机——中药复方“本草-产安”防治奶牛胎衣不下的临床效果评估

为了考查中药治疗奶牛胎产病的机理,对复方"本草-产安"治疗奶牛胎衣不下的临床效果进行评估,以中兽医理论为指导,参照草药随机对照临床试验的报告CONSORT申明细则,将纳入标准的妊娠奶牛在相同饲养管理条件下饲喂直至分娩,胎衣不下的奶牛纳入受试对象,累积病例随机分为3组,空白对照组给予生理盐水灌注子宫,土霉素组给予盐酸土霉素灌注子宫,中药复方组给予"本草-产安"灌服,对3组受试奶牛的胎衣排出率、子宫炎发生率、产后繁殖性能等临床指标进行分析比较。结果表明:72 h滞留胎衣排出率中药复方组极显著高于空白对照组(P0.01),土霉素组显著高于空白对照组(P0.05);21 d产褥期子宫炎发病率中药复方组极显著低于空白对照组(P0.01),土霉素组显著低于空白对照组(P0.05);产后首次配种时间、配种次数和空怀时间中药复方组显著或极显著优于土霉素组和空白对照组(P0.05或P0.01);首次配种空怀率和产后180 d内空怀率中药复方组极显著低于土霉素组和空白对照组(P0.01)。说明中药复方"本草-产安"对奶牛胎衣不下有明显的治疗效果,对防治产后疾病以及提高产后生产性能具有可靠的临床应用价值。     

产褥期子宫炎对奶牛抗氧化能力、部分细胞因子、结合珠蛋白的影响

通过检测顺产后患产褥期子宫炎奶牛抗氧化能力、细胞因子变化和结合珠蛋白变化情况,为后期产褥期子宫炎治疗保健研究提供参考。选用20头产后健康荷斯坦奶牛为对照组(N组),产褥期子宫炎5例(PM),产后前10d检测体温;分别在产后3、7、14、21d经颈静脉采血,用试剂盒检测抗氧化能力、部分细胞因子和结合珠蛋白。结果显示:PM组体温在4~10d之间高于N组,其中第5、8天差异显著;PM组CAT、T-AOC、GSH-Px分别在3、7、7d显著高于N组,2组SOD、MDA差异不显著;N组IL-6、TNF-α分别在21、14d显著高于PM组。结果表明:产褥期子宫炎奶牛CAT、T-AOC、GSH-Px等抗氧化指标升高,细胞因子IL-6、TNF-α降低,进行药物对奶牛产褥期子宫炎的治疗保健效果评价试验时可参考上述变化显著的指标。     

牛病毒性腹泻病毒感染对牛外周血来源树突状细胞表型及其分泌Th1/Th2细胞因子的影响

旨在探究BVDV感染对牛外周血来源的树突状细胞成熟及Th1和Th2型细胞因子分泌水平的影响,进一步揭示BVDV感染对机体免疫机能的影响机制。从牛外周血分离单核细胞,诱导培养为树突状细胞后接种BVDV共培养,采用显微镜观察细胞的形态,流式细胞术分析细胞表面标志分子,半定量RT-PCR法检测Th1型细胞因子IL-12p40和Th2型细胞因子IL-10的mRNA转录水平。结果显示,获得形态及表型典型的树突状细胞,诱导纯度为93.81%;BVDV接种组树突状细胞表面的MHCⅡ类分子、CD40分子、CD80分子均明显低于未接种组,差异极显著(P0.01);BVDV接种组的IL-12p40 mRNA转录水平低于未接种组,差异显著(P0.05);而IL-10mRNA转录水平高于未接种组,差异显著(P0.05)。结果说明BVDV感染影响树突状细胞的成熟及功能,并能通过高效表达Th2型细胞因子IL-10、降低Th1型细胞因子IL-12p40而影响Th1/Th2的平衡。     

UBC13对支气管哮喘模型小鼠Th2、Th17型细胞极化的影响

试验旨在探究UBC13蛋白对支气管哮喘小鼠体内Th2、Th17细胞极化的影响。18只BALB/c小鼠随机均分为3组:PBS组、哮喘模型(OVA)组和UBC13蛋白(UBC13)组,OVA组和UBC13组采用卵清蛋白(OVA)和脂多糖(LPS)进行致敏和雾化建立哮喘模型,其中UBC13组于每次雾化前0.5 h腹腔注射100μg UBC13蛋白。末次雾化激发24 h后处死小鼠,采集样品,通过HE染色观察肺脏切片病理学变化、PAS染色观察气道黏液的分泌,ELISA法检测血清IgE浓度和肺支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5和IL-17A的水平,实时荧光定量PCR法检测肺脏Th2型相关因子IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γmRNA和Th17型细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-23 mRNA的相对表达量。结果显示,试验成功建立了哮喘模型,与PBS组相比,OVA组IgE浓度极显著上升(P0.01),肺脏病理切片炎性细胞浸润和中性黏液分泌现象明显,肺脏中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IL-17A mRNA相对表达量均极显著升高(P0.01),IL-5和IL-23 mRNA相对表达量显著升高(P0.05),IFN-γmRNA相对表达量极显著下降(P0.01),BALF中IL-4、IL-5和IL-17A的水平极显著上升(P0.01);与OVA组相比,UBC13组IgE浓度显著降低(P0.05),病理切片炎性细胞浸润现象减轻、黏液分泌减少,肺脏IL-1β、IL-4、IL-17A、IL-13和IL-23 mRNA相对表达量均显著下降(P0.05),IFN-γmRNA相对表达量显著升高(P0.05);IL-6 mRNA相对表达量极显著下降(P0.01),BALF中IL-5的水平极显著下降(P0.01),IL-4的水平显著下降(P0.05),IL-17A的水平无显著差异(P0.05)。由此可见,UBC13蛋白能下调Th2和Th17型细胞因子的表达量,影响哮喘模型Th2和Th17细胞的极化。     

肿节风有效成分迷迭香酸对哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子水平的影响

为了探讨肿节风有效成分迷迭香酸对小鼠哮喘模型Th1/Th2细胞因子的调节作用,试验将50只雌性Balb/c小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、迷迭香酸单药组、OVA哮喘模型组、迷迭香酸治疗组、地塞米松治疗组,采用ELISA方法对支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL-13)和γ干扰素(IFN-γ)水平进行了研究。结果表明:与正常对照组比较,OVA哮喘模型组小鼠BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平极显著升高(P0.01),IFN-γ水平极显著降低(P0.01),IL-4/IFN-γ比例极显著升高(P0.01);与OVA哮喘模型组比较,迷迭香酸治疗组和地塞米松治疗组显著抑制了IL-4、IL-5和IL-13水平(P0.05),显著降低了IL-4/IFN-γ比值(P0.05)。说明肿节风有效成分迷迭香酸具有抑制哮喘Th2细胞因子和调节免疫平衡的作用。     

胎衣不下奶牛胎儿胎盘中IL-2含量的测定

通过对胎盘组织中IL-2的含量检测,探讨奶牛发生胎衣不下的免疫学机制。将20头奶牛分为健康对照组和胎衣不下组,采集健康奶牛和胎衣不下奶牛的胎儿胎盘,制备胎盘组织匀浆液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中的IL-2的含量。结果表明,胎衣不下组奶牛胎盘组织中IL-2的含量极显著高于健康组(P0.01),说明胎盘组织中IL-2含量与奶牛发生胎衣不下有密切关系。     

Th1/Th2型细胞因子的动态变化对山羊妊娠的影响

为了研究Th1/Th2型细胞因子的动态变化对山羊妊娠的影响,探讨其生理学意义,试验通过EUSA方法对山羊妊娠早期及流产前后外周血液中Th1(TNF-α、IL-2)与Th2(IL-10)型细胞因子的含量进行了检测.结果表明:妊娠早期外周血液中TNF-α和IL-2含量先升高后降低,IL-10含量持续上升;流产后TNF-α和IL-2含量高于流产前含量(P＜0.01或P＜0.05),IL-10则低于流产前含量(P＜0.05或P＜0.01).说明山羊正常妊娠时Th1/Th2型细胞因子动态平衡应当是以Th2型免疫及其相关因子占优势,平衡失调则导致妊娠失败.     

Th1/Th2 polarization by viral and helminth infection in birds

Mammals developed an immune system able to functionally polarize into so-called type 1 or type 2 immune pathways, to resolve infections with intracellular and extracellular pathogens, respectively. In the well-studied avian immune system of the chicken, however, no evidence for polarized immunity could be found, as yet. To investigate whether these two major arms of mammalian immunity, regulated by a T helper (Th)1/Th2 cytokine balance, evolved similarly in birds, chickens were exposed to a prevalent intracellular (viral) or extracellular (helminth) infection. By using semi-quantitative RT-PCR analysis we provide evidence that polarization of Th1/Th2 type immunity extends beyond mammalian species, and, therefore, has been evolutionary conserved for more than 300 million years, when the lineages of mammalian and avian vertebrates are assumed to have segregated.     

Th1/Th2 balance in canine peripheral blood lymphocytes--a flow cytometric study

The canine immune system undergoes continuous remodeling with advancing age. We measured the Th1/Th2 balance in peripheral blood lymphocytes (PBLs) obtained from 23 Beagles ranging in age from 0.5 to 11.8 years by flow cytometric analysis using intracellular cytokine staining. The percentage of CD4 cells producing interferon-gamma (Th1) increased with age. The percentage of CD4 cells producing interleukin-4 (Th2) increased but much less so. In conclusion, we demonstrated that the Th1/Th2 balance in canine peripheral blood could be measured by this flow cytometry technique and the Th1/Th2 balance inclined to dominance of the Th1 subpopulation in PBLs as the dog matured.     

鸡免疫器官中Th1和Th2型细胞因子mRNA转录水平的比较

为了研究鸡免疫器官中细胞因子的基础转录水平,本试验采用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测56日龄鸡免疫器官中Th1类细胞因子及Th2类细胞因子的m RNA相对表达量并进行比较。结果显示,4种细胞因子在盲肠扁桃体中的表达水平均高于腔上囊。脾脏中细胞因子表达水平总体上较同为外周免疫器官的盲肠扁桃体低。胸腺、脾脏与腔上囊中IFN-γ与IL-4的表达呈负相关性。研究表明,盲肠扁桃体作为可直接参与免疫反应的外周免疫器官,其免疫活性可能较中枢免疫器官腔上囊更高。IFN-γ与IL-4作为最具代表性的Th1与Th2类细胞因子,其表达表现为相互抑制。     

妊娠期激素对Th1和Th2细胞因子的调控

妊娠是一个复杂的生理过程,受到神经、免疫和内分泌的共同调节。作为半自体抗原的胎儿不被母体排斥是子宫局部免疫水平调节的结果。其中激素对辅助性淋巴细胞(Th)发生、分化的调节作用愈来愈受到重视。辅助T淋巴细胞能分化为不同的亚型(Th1和Th2),孕酮可促进Th2型细胞因子(IL-4,IL-5)的产生,有利于妊娠的正常发生;松弛肽促进Th1型细胞因子(IFN-γ)的产生,对妊娠有害。在母胎界面存在激素-细胞因子网络,淋巴细胞产生的细胞因子还能够影响其他细胞因子的产生。由Th2样细胞产生的,对胚泡着床具有非常重要作用的白血病抑制因子(LIF),其表达受Th1细胞诱导因子的下调,如IL-12,IFN-α,IFN-γ,受IL-4和孕酮(诱导T淋巴细胞向Th2细胞分化)的上调。激素通过调控淋巴细胞分泌的细胞因子来调控免疫系统,保持一个动态的平衡,有利于维持妊娠。     

坏死细胞对脓毒症小鼠体内Th1/Th2细胞失衡的影响

将34只C57BL/6小鼠随机分成4组:正常对照组(PBS组,n=5)、假手术对照组(Sham组,n=5)、脓毒症组(CLP组,n=12)以及坏死细胞处理组(Nec组,n=12)。PBS组为正常小鼠,腹腔注射200μL的PBS 1次,Sham组小鼠手术分离盲肠末端后,不进行结扎穿孔;CLP组小鼠用盲肠结扎穿孔法(Cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症模型;Nec组小鼠预先腹腔注射2×107个坏死细胞,第0天再行盲肠结扎穿孔。所有小鼠于制备CLP模型后2周处死,流式细胞仪检测外周血、脾脏和胸腺中CD4+IFN-γ+Th1细胞以及CD4+IL-4+Th2细胞比例。结果显示,CLP组小鼠外周血Th1/Th2比例显著高于Sham组及PBS组(P0.05),同时脾脏中Th1/Th2比例则低于Sham组(P0.01)。Nec组小鼠外周血Th1/CD4+T细胞比例及Th1/Th2比例显著低于CLP组(P0.05),但脾脏中Th1/Th2比例则显著高于CLP组(P0.01)。结果表明,预先输注坏死细胞可以逆转脓毒症小鼠体内Th1/Th2比例失衡。     

Characterization of cytokines associated with Th17 cells in the eyes of horses with recurrent uveitis

Objective Equine recurrent uveitis (ERU) is a spontaneous disease that is the most common cause of blindness in horses, affecting up to 15% of the horse population. Th17 cells are a major cell population driving the pathogenesis in several mouse models of autoimmune inflammation, including experimental autoimmune uveitis. The purpose of this study is to investigate the role a Th17 cell‐mediated response plays in the pathogenesis of ERU. Procedure Banked, Davidson’s‐fixed equine globes histopathologically diagnosed with ERU (n = 7) were compared immunohistochemically with healthy control globes (n = 7). Immunohistochemical staining was performed using a pan‐Leptospira antibody and antibodies against IL‐6, IL‐17, and IL‐23. Additionally, immunostaining was performed for T‐cell (CD3) and B‐cell (CD79α) markers. Specificity of immunoreactivity was confirmed by western blot analysis. Results Immunohistochemical staining was positive for IL‐6, IL‐17, and IL‐23 within the cytoplasm of nonpigmented ciliary epithelial cells and mononuclear inflammatory cells infiltrating the iris, and ciliary body of ERU horses (n = 7) but negative in controls (n = 7). ERU‐affected eyes were CD3 positive (n = 7) and CD79α negative (n = 7). Staining for Leptospira was negative in all ERU and control globes. Conclusions Strong immunoreactivity for IL‐6, IL‐17, and IL‐23, in conjunction with the fact that T lymphocytes are the predominating inflammatory cells present in ERU, suggests that IL‐17‐secreting helper T‐cells play a role in the pathogenesis of ERU. These findings suggest that horses with ERU may serve as a naturally occurring animal model for autoimmune uveitis.