鸡基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合鸡全血DNA提取的方法,满足鸡育种中基因检测对DNA的要求,试验研究了酚-氯仿、试剂盒和优化盐析法提取鸡全血DNA。优化盐析法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,优化盐析法所得DNA的纯度OD_(260)/OD_(280)达1.855±0.036,所提DNA质量较好,利用DNA样本为模板进行PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿、试剂盒的方法相比,优化盐析法节约了时间和成本,所需仪器简单,是一种较好的提取鸡全血DNA的方法,适合生产中大批量鸡血液基因组DNA提取。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

哺乳动物血液基因组DNA提取方法的比较研究

<正>随着现代分子生物学技术的迅速发展,用于提取高纯度DNA的试剂盒已经商品化生产,但是价格较高,在实验室普及使用尚有难度。目前,各地实验室常用的提取哺乳动物血液基因组DNA的方法有CTAB法、传统DNA提取方法、酚-氯仿法及试剂盒法,这些方法都是经过大量试验证明其可行性,但并不是所有方法都能提取到纯度较高的血液基因组     

绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究

本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。     

三种山羊全血基因组DNA提取方法的比较

采用碘化钾法、酚／氯仿和试剂盒提取法直接从山羊全血中提取基因组DNA,并以碘化钾提取基因组DNA为模板,进行山羊生长激素（GH）基因片段的扩增,扩增效果良好。结果表明：碘化钾法提取基因组DNA快速、简便、经济,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得借鉴。     

水牛全血基因组抽提方法优化

[目的]通过比较三种提取水牛全血基因组DNA的方法,获得一种安全、高效、快速的DNA提取方法,为水牛基因功能的研究奠定基础。[方法]收集43头水牛抗凝血样,每份血样随机分为等量3份,每份血样2mL,分别使用试剂盒改良法、试剂盒说明书法及酚仿抽提法提取全血基因组DNA。比较分析三种方法提取的同一头牛三份血样DNA的含量、OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳和基因扩增结果。[结果]三种方法提取DNA的含量由高到低依次为试剂盒改良法、酚仿抽提法、试剂盒说明书法,各组间差异显著(1376.72±127.54VS 1121.32±81.64VS 326.18±21.17,P0.05)。三种方法提取DNA的OD-260/280值依次增加,试剂盒改良法与试剂盒说明书法OD260/280值差异不显著(1.85±0.0017 VS1.86±0.0021,P0.05),与酚仿抽提法OD260/280值有显著差异(1.85±0.0017VS 1.88±0.0029,1.86±0.0021VS 1.88±0.0029,P0.05)。三种方法提取DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,试剂盒改良法和试剂盒说明书法DNA条带清晰、光密度高,酚仿抽提法条带模糊有拖带现象。三种方法所提取的基因组PCR扩增stat5基因获得较清晰准确的条带,扩增效果良好。[结论]试剂盒改良法用于水牛全血基因组的提取比试剂盒说明书法和酚氯仿法更安全、高效、便捷。     

山羊粪便总DNA提取方法的比较

本试验比较了从山羊粪便中提取总DNA的四种方法的优缺点,旨在为后续实验提供合适的提取方法。笔者首先采用PBS缓冲液过夜处理粪便标本,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB抽提法、天根试剂盒法和OMEGA试剂盒法提取样品总DNA。结果显示：酚-氯仿抽提法提取的DNA完整性不好,且纯度低;CTAB法提取的DNA浓度和纯度都较高,但完整性不好;试剂盒法提取方便,操作简单,时间短,但提取的浓度较低,其中天根试剂盒法提取的DNA纯度高,完整性好。综合考虑,天根试剂盒法是提取山羊粪便总DNA的最佳方法。     

从白羽王鸽的血液中提取基因组DNA方法的比较研究

禽类血液中的蛋白质含量较高,用传统方法提取其血液中的基因组DNA比较繁琐、纯度不高,而且提取的产物中有大量蛋白质残留。本研究采用改良的CTAB法从白羽王鸽全血中提取全基因组DNA,并以传统的酚-氯仿抽提的方法和TAKARA公司基因组提取试剂盒法作对照。结果表明：qCTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到2．00,浓度达到了144．67ng/μL,完全可以满足PCR扩增限制酶切等实验的要求。     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

少量动物粪便细菌总DNA提取方法的研究

本研究首先采用棉签直接插入肛门法采集仔猪粪便样品,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB法和试剂盒法等3种方法提取样品中细菌总DNA。结果表明:UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒更适宜于提取少量动物粪便细菌总DNA及后续的分子生物学试验。     

两种动物组织DNA提取方法的比较

本试验以猪耳组织为试验样本,采用酚-氯仿抽提方法[1]和DNA提取试剂盒方法进行DNA提取的对比试验,并通过核酸蛋白定量仪测量了DNA浓度和纯度,并进行了PCR扩增实验。试验表明,两种提取方法都可以进行PCR扩增试验,但采用试剂盒提取方法提取DNA可以直接进行PCR扩增,而酚-氯仿提取法需放置一段时间后效果好,并且采用试剂盒提取的DNA纯度高、速度快、节省耗材、结果稳定、重复性强,适合大量DNA提取试验。     

实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较

对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法酚/氯仿法DNA/RNA同提取法。提取效率为酚/氯仿法DNA/RNA同提取法试剂盒提取法。表明各提取方法效果差异显著(P0.01),为实验室核酸提取提供了参考。     

乳房炎3种病原菌DNA提取方法比较研究

旨在比较3种DNA提取方法对山羊乳中致乳房炎主要病原菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠埃希氏菌加入羊乳中,并分别用硅胶膜试剂盒、酚/氯仿法和CTAB/NaCl法等3种方法提取总DNA,比较所获得DNA的浓度、纯度、所需时间和经济成本及对各病原特异性PCR检测的影响。结果显示,各方法均能成功地提取羊乳中致乳房炎的3种病原菌DNA;硅胶膜试剂盒和CTAB/NaCl法提取山羊乳中金黄色葡萄球菌和无乳链球菌DNA的效果相同且明显优于酚/氯仿法;3种方法提取山羊乳中大肠埃希氏菌的效果相同。CTAB/NaCl法具有提取效果好、耗时较短、成本低和方便的优点,是从羊乳中提取病原DNA的良好方法。研究结果为临床上山羊乳房炎病原菌的分子检测和流行病学调查提供了方法学上的参考。     

6种核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率比较

为比较不同类型核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率,选取6种核酸提取试剂盒(磁珠法、柱式法各3种),分别对布鲁氏菌灭活菌液和16份临床组织样品进行核酸提取,使用荧光定量PCR方法评估提取效率。结果显示:6种试剂盒在提取10~2和10~4稀释度的布鲁氏菌灭活菌液核酸时,磁珠法的提取产物荧光定量PCR的Ct值整体低于柱式法,批内变异系数小于5%;提取临床组织样品时,2种柱式法细菌提取试剂盒能够提取全部样品的核酸,2种磁珠法细菌提取试剂盒提取了14份核酸,剩下的1种磁珠法和1种柱式法病毒提取试剂盒分别提取了12份和3份核酸。结果表明:6种试剂盒均能有效提取布鲁氏菌灭活菌液,其中磁珠法提取效率略高于柱式法;柱式法细菌DNA对临床组织样品的提取效率略高于磁珠法细菌DNA,但磁珠法和柱式法的病毒DNA提取试剂盒均不适用于临床组织样品的布鲁氏菌核酸提取。在实际操作中,应根据实验室条件、样品数量和任务紧迫性等因素,选取应用合适的试剂盒。本研究为布鲁氏菌核酸提取方法的选择提供了参考。     

一种禽类血液基因组DNA高效提取通用方法的建立

为了建立一种适合禽类血液的廉价、高效、通用的基因组DNA提取方法,试验采用鸡、鸭、鹅、鸽、火鸡、麻雀6种禽类血液为材料,提取的禽类血液DNA经微量分光光度计分析、基因组DNA凝胶成像分析以及PCR扩增效果检测。结果表明:提取的6种禽类血液DNA质量较好(OD260/OD280值范围为1.80~1.84,OD260/OD230值范围为2.21~2.30),基因组DNA电泳主条带和PCR扩增产物条带清晰、整齐、无拖带。说明本方法能够完全适用于大批量禽类血液基因组DNA的提取,且DNA纯度较好,满足后续相关分子生物学试验要求。     

番鸭全血基因组DNA的提取与克隆

以柠檬酸葡萄糖溶液(ACD)抗凝的番鸭全血为材料,采用酚/氯仿抽提法和试剂盒法提取基因组DNA,并对基因组DNA进行PCR扩增、克隆并测序。结果表明,提取的基因组DNA纯度高,用琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA,主带清晰、无拖尾现象,无污染;通过PCR扩增有特异性条带出现,测序结果显示番鸭基因组DNA片段大小为868bp,与预期结果大小一致。     

东北林蛙基因组DNA不同提取方法的比较

为了研究不同方法提取东北林蛙基因组DNA的纯度差异,试验以东北林蛙为研究对象,采用高盐浓度抽提法、苯酚/氯仿抽提法、十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)、十二烷基磺酸钠法(SDS法)提取基因组DNA,进行PCR验证。结果表明:4种提取方法均能获得完整的基因组DNA,可以用于PCR扩增。高盐浓度抽提法提取的DNA纯度和制得率最高,成本低,安全系数高,操作简单,能够满足提取大量DNA的需求;其他3种方法需使用有毒、有害的有机试剂且时间较长。     

不同提取方法对食蟹猴粪便中结肠小袋虫PCR检测的影响

比较不同抽提方法对结肠小袋虫DNA提取效率的影响,从而获得一种高效、稳定的提取粪便样品总DNA的方法,继而为后续试验提供基础材料。采用3种商品化基因组DNA提取试剂盒和经典酚-氯仿法,分别对食蟹猴粪便样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同抽提方法对DNA扩增效果的影响。4种提取方法均能扩增出目的条带,粪便抽提试剂盒的PCR扩增效果最好,测定DNA含量达到42.05 ng/μL。同时利用粪便抽提试剂盒对广西地区采集的68份食蟹猴粪便样品进行DNA提取,经PCR检测其阳性率为17.65%(12/68)。4种提取方法中以粪便抽提试剂盒对粪便样品DNA提取后经PCR扩增效果最好,可为临床粪便样品DNA提取PCR检测提供参考。     

小鼠基因组DNA提取方法比较研究

脱氧核糖核酸(DNA)作为大部分有机体和病毒的遗传物质,与生物的遗传与变异息息相关。很多研究都是基于核酸分析的基础开展的,对核酸的纯度要求很高。本研究采用4种常用方法提取小鼠基因组DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明,酚/氯仿抽提法获得的DNA纯度较好,无RNA污染,但有少许蛋白质未剔除;试剂盒法提取到的DNA纯度高、核酸浓度大且无污染,但片段较小,可进行常规的PCR等核酸水平研究。     

六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较

为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒（LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254）,比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果.结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894（OD260/OD280）、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优.因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）病原鉴定的首选试剂盒.