应用HRP—SPA间接免疫酶染色检测弓形虫病血清抗体

以弓形虫直接涂片,应用HRP—SPA间接免疫酶染色,检测兔实验性弓形虫病血清抗体,检出率达100％。本法操作简便,不需要复杂的仪器设备,便于普及推广。     

血清抗体监测在猪疫病防控中的应用分析

血清抗体监测能够对动物疫病的防治提供强有力的参考依据和方法,将其进行大范围的推广可以得到很好的疫病防控效果。本文主要是对猪疫病的血清抗体监测进行一定的分析,为相关的工作者提供一定的参考。     

猪瘟病毒阳性血清的猪瘟抗体检测与分析

为掌握猪瘟病毒阳性血清的猪瘟抗体水平分布情况,应用美国IDEXX公司的猪瘟病毒抗体检测试剂盒对江苏省农业科学院动物疫病诊断检测中心临床门诊近期收集的经PCR检测为猪瘟病毒阳性的26份血清进行猪瘟抗体水平的检测,以期为猪场猪瘟的有效防控提供科学数据参考。结果显示:猪瘟抗体阳性率为26.9%,阴性率为57.7%,可疑率为15.4%,抗体阻断率平均值为28.0%,且78.6%的猪瘟抗体阴性血清阻断率小于10%,即不同猪瘟抗体水平的血清均可检出猪瘟病毒,但猪瘟抗体阻断率小于10%的血清所占比例最大,达42.3%。因此,猪场在日常的猪瘟抗体检测中,如果发现猪瘟抗体阻断率小于10%的猪只所占比例越大,则预示着猪群中猪瘟带毒的比例越高。     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

母猪繁殖障碍性疾病血清流行病学调查

重庆某规模化猪场仅进行了猪瘟的常规免疫,母猪发生流产、死胎等现象严重。采集的154份血清样品其中母猪血清样45份,仔猪血清样109份）用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验检测猪温抗体水平,结果母猪血清猪瘟抗体阳性率为82.22%,仔猪血清抗体阳性率为0;用乳胶凝集试验检测伪狂犬病、细小病毒病抗体,母猪血清抗体阳性率分别为20％、6.67%,仔猪血清抗体阳性率分别为5.5%、4.59%;用间接血球凝集试验检测衣原体病、弓形体病抗体,母猪血清抗体阳性率分别为13.33%、0,仔猪血清抗体阳性率分别为10％、0;用试管凝集由氏杆菌病为阴性。     

兽医实验室中影响血清正常析出的原因及分析

血清学诊断技术是建立在体外抗原抗体特异性反应的基础上的检测技术,而这种特异性反应的抗体主要来自血清。血清是除去纤维蛋白原的血浆,血液凝集时,凝血块周围析出的液体即为血清。在兽医实验室中进行畜禽血清学检测时,实验者使用良好品质的血清,有助于实验操作准确地完成,从而保证检测数据的准确性和可靠性。     

禽霍乱免疫母鸡血清抗体和蛋黄抗体消长规律及其相互关系的研究

通过对禽霍乱菌苗免疫产蛋母鸡的血清和蛋黄的抗体定时检测后发现，免疫母鸡的血清抗体和蛋黄抗体的升降趋势基本一致（ｒ＝０．９４），但后者较前者迟后３～６ｄ；血清抗体和蛋黄抗体的滴度分别在加强免疫后的１～３ｄ和３～６ｄ都有不同程度下降，加强免疫前的滴度越高，免疫后的滴度下降幅度越大；蛋黄抗体水平普遍比血清抗体水平低，两者间的差异极显著（Ｐ＜０．０１），这可能是与禽多杀性巴氏杆菌本身的主要抗原成分（ＴＩ抗原）在鸡体内主要产金ＩｇＭ有关。     

蛋鸡血清抗体与卵黄抗体效价对比试验

笔者通过试验对免疫后的蛋鸡血清抗体和卵黄抗体进行测定比较,探讨应用卵黄代替血清开展蛋鸡免疫抗体的监测技术。试验结果表明,卵黄抗体检测完全可以取代血清检测,方法简便实用。     

血清抗体监测在猪疫病防控中的应用

血清抗体检测是一种能帮助控制动物疫情的有力工具,现如今这种检测方法已经被大面积推广。本文主要分析了在猪疫病的防控中,血清抗体检测技术的合理应用以及具体分析。     

西藏牦牛病毒性腹泻血清抗体检测

为了解牛病毒性腹泻在西藏牦牛群中的血清抗体分布情况,2014-2016年期间先后从西藏不同地区采集牦牛血清920份,采用ELISA法进行血清抗体检测。结果表明,西藏牦牛病毒性腹泻血清抗体阳性率平均达到48.70%,其中林芝市为84.24%,那曲地区61.41%,山南地区48.91%,拉萨市44.02%,阿里地区23.91%,日喀则市21.74%,昌都地区13.04%,说明西藏各地区牦牛群中牛病毒性腹泻病的血清抗体阳性现象均有分布,应引起重视。     

间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立

应用1型鸭疫里默氏杆菌(云南株)超声粉碎物作为包被抗原,建立检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的间接ELISA方法。用倍比稀释法确定HRP标记羊抗鸭二抗最佳稀释倍数为1∶3500,并用棋盘测定法确定抗原的最佳包被浓度为2.7mg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶300,阴性血清临界值为0.381;阻断试验结果表明,1型鸭疫里默氏杆菌与其抗血清阻断阳性,与鸭大肠杆菌O78、O132菌株和FJ4型鸭疫里默氏杆菌阻断阴性(无交叉反应)。重复性试验结果表明,该ELISA方法批内变异系数≤0.246,批间变易系数≤0.889。结果表明,该ELISA方法特异性强,重复性好,可用于1型鸭疫里默氏杆菌(云南株)血清抗体的检测。     

Detection of anticoagulant rodenticides (4-hydroxycoumarins) by thin-layer chromatography and reversed-phase high-performance liquid chromatography with fluorescence detection

The detection of 4-hydroxycoumarin rodenticides in poisoned domestic animals requires a highly sensitive method as tissue and serum levels of anticoagulants may be very low owing to rapid elimination, metabolism or post-mortem degradation. Thin-layer chromatography (TLC) and reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) with fluorescence detection were used to identify the anticoagulants in spiked tissues and in suspicious samples. The analysis of ten suspicious samples highlighted the limitations of both methods. Only the three samples of baits were found positive by TLC whereas one of the five anticoagulants was detected in eight samples by RP-HPLC with fluorescence detection. Therefore, RP-HPLC with fluorescence detection proved to be the more sensitive method for detecting low levels of 4-hydroxycoumarins in blood serum, liver and ingesta, whereas TLC is usually sufficient for analysing baits.Abbreviations RP-HPLC reversed-phase high-performance liquid chromatography - TLC thin-layer chromatography     

己烯雌酚人工抗原的合成及其抗体制备

以己烯雌酚 (DES)、琥珀酸酐和牛血清白蛋白 (BSA)等为主要原料 ,采用混合酸酐反应 ,首先合成己烯雌酚半琥珀酸酯 (DES- HS) ,经质谱分析鉴定后 ,再将 DES- HS结合到 BSA上 ,并用 SDS- PAGE对 DES- HS- BSA进行测定。以DES- HS- BSA免疫家兔 6次 ,用琼脂双扩散试验测定抗体。试验结果表明 ,高分辨质谱测得合成的 DES- HS分子量为36 8;BSA- HS- DES的 SDS- PAGE图谱经相关软件分析表明 ,单个 BSA上结合有 32个 DES- HS;琼脂扩散试验结果证实 ,免疫兔血清中含有抗 DES的抗体。本试验为下一步研制 DES残留免疫检测试剂盒及抗 DES单抗奠定了基础     

应用琼脂免疫扩散试验检测猪伪狂犬病抗体的研究

建立了ＡＧＩＤ用于猪伪狂犬病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ,Ｐｒ）的诊断。对９８份被俭血清的ＡＧＩＤ结果与ＳＮ结果比较,当ＳＮ滴度大于１：８时两者的阳性检出符合率为１００％,ＳＮ滴度小于或等于１：８时,两者的阳性检出符合率为８７．５％,ＡＧＩＤ和ＳＮ总的阳性符合率为９４．４％,结果表明,ＡＧＩＤ对Ｐｒ可进行特异性诊断,流行病学调查和免疫动态监测。     

TTMV间接ELISA检测方法的建立

以TTMV重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了检测人TTMV血清抗体的间接ELISA方法,结果显示：抗原最佳包被浓度为1．63μg／mL,37℃孵育1h后4℃过夜;血清稀释度为1：320;酶标二抗孵育时间为37℃60min;ELISA酶标板的临界值为0．211。运用该方法对上海市和辽宁省共计280份血清样品进行检测,阳性检出率分别为34．68％和39．74％。检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性与重复性均较好,为进一步完善TTMV临床诊断方法打下了基础。     

3种方法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清的比较

本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法纯化得到的抗体纯度较蛋白G亲和层析法低一些,抗体活性不变,可通过多次盐析来提高抗体纯度,多作为蛋白G亲和层析法纯化前的初步纯化;辛酸-硫酸铵法纯化得到的抗体纯度不及前两种方法,回收率较高,抗体活性亦无改变,纯化时对pH的精确性和辛酸的浓度要求较高,多用于样品的粗提和单抗的纯化。     

An improved ferritin assay for canine sera

An improved serum ferritin assay for canine serum has been developed. It uses two monoclonal antibodies in a sandwich arrangement. Serum ferritin can be determined on undiluted canine sera with this assay. The recovery of ferritin added to canine serum ranged from 98 to 106%, the within-assay coefficient of variability was 3.3 to 4.5%, and the assay-to-assay variability was 9.8 to 10.2%. Serum ferritin from 61 apparently healthy dogs had a geometric mean of 252 ng/ml, with a range of 80 ng/ml to 800 ng/ml.     

牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。     

猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。