木聚糖酶酶活测定的几点体会

本文总结了在木聚糖酶(制剂)酶活实际测定过程中底物种类、底物配制方式和酶液稀释倍数对测定结果的影响.     

不同底物及NaOH的添加对木聚糖酶酶活测定的影响

本试验采用DNS法对测定木聚糖酶酶活的底物性质进行研究。结果表明：以小麦木聚糖为底物时的木聚糖酶酶活最高,其次是燕麦木聚糖,再其次是山毛榉木聚糖,以桦木木聚糖为底物时的酶活最低;在底物配制过程中一般加入NaOH时测得的酶活低于不添加NaOH时的酶活,但以小麦木聚糖为底物时加入NaOH时测得的酶活高于不添加NaOH时的酶活。     

饲用木聚糖酶、β-葡聚糖酶活力测定方法的调研

对国内外有代表性的十几家饲用制剂科研单位和生产企业的半纤维素酶酶活测定方法进行了调研。结果为绝大多数单位都使用还原糖法，测定条件的pH值在定，国内大多数单位选用国产底物。β-葡聚糖及木聚糖底物的浓度一般在0.5-1.0%(W/V)。缓冲液选用醋酸钠缓冲液、磷酸氢二钠缓冲液或柠檬酸缓冲液，而且浓度差别较大。由结果可知：国外和国内对半纤维素酶酶活测定方法的条件都未统一，酶活测定方法的统一存在一定的难度。     

角蛋白酶酶活测定条件的研究

以提高羽毛粉做底物测定角蛋白酶酶活方法的准确性,试验研究了酶的制备方式、测定波长、试剂添加顺序、底物粒度大小、反应体系振荡频率、底物浓度、酶促反应温度、时间和pH值等因素对酶活的影响。结果表明:传统测定方法中使用的底物量并不符合酶促反应动力学中底物要饱和的要求,试剂添加顺序和底物粒度对酶活测定结果也有很大影响;羽毛粉测定角蛋白酶活性的最佳方法为:40 W超声波处理30 s的发酵液直接离心制取粗酶液,以45 mg过40目筛的羽毛粉做底物,按缓冲液(pH值8.8)、底物、酶的顺序加入试剂,于45℃水浴中反应,每隔15 min振荡一次,反应1 h后加入2 ml10%的终止剂TCA,于波长280 nm处进行测定。优化后条件下测得的角蛋白酶活性较优化前提高了约2.1倍。     

木聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对木聚糖酶的一些性质进行了研究。结果表明:该酶的最适反应pH为6.0,在pH5～10之间保温不同时间后可保持较高的活性;最适反应温度50℃,液态下低于60℃热稳定性较好。在50℃、pH6.0下,以燕麦木聚糖为底物时,该木聚糖酶的米氏常数Km=6.49mg/mL,最大反应速度Vmax=21.05μg/(mL·min)。用不同底物测定酶活,以燕麦木聚糖为底物的酶活最高。酶在动物胃中活性较低,而在肠道中活性较高。     

饲用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究

木聚糖是一种广泛存在于植物中的半纤维素,它是由β-1,4糖苷键连接而成的木糖聚合物。为了掌握常用饲用酶制剂中木聚糖酶的酶学性质,对某商品复合酶制剂中所含的木聚糖酶进行了热稳定性、最适pH值、最适反应温度、底物征对性、不同金属离子对其酶活的影响、反应进程曲线及其Km值等的测定,以其对常用的木聚糖酶的酶活测定、保存及应用有一定的指导意义。1材料与方法1.1实验仪器精密pH计:±0.01pH;电子天平:d=1mg;紫外分光光度计UV-1601;恒温水浴锅;蠕动泵;紫外检测器;分布收集器;Φ2.6cm×100cm色谱柱。1.2实验材料某商品酶制剂。1.3酶活…     

饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响分析

为找出混合过程中引起固态木聚糖酶酶活测定结果差异的原因,试验研究了主要饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响。结果表明:酶稀释溶液中加入固态植物原料、液态原料均对木聚糖酶测定值无显著影响,混入预混料会引起酶活测定值的明显下降;液态原料与固态木聚糖酶混合会影响到固态酶的稀释溶解,从而引起酶活测定值的显著下降。     

用酶联吸附法测定木聚糖酶活力的研究

酶联吸附法(ELSA)检测纤维酶活力是一种利用未降解的酶底物间接测定酶活力的新方法。笔者对该方法的反应条件进行了系统的研究,并对其进行了一定的改进,从而提高了其灵敏度。结果表明:木聚糖酶的反应温度为30℃、时间为20min、pH值为5.4;碱性磷酸酶的显色反应温度为35℃。但为了使木聚糖酶的反应温度接近动物肠道温度,建议在该方法中选用40℃。酶联吸附法检测酶活具有灵敏度高(能够测到样品中含有0.0001μmol/min·g的酶活)、操作简单(1个人在1个工作日内可处理200～300个样品)、成本低等优点。     

底物浓度对饲用木聚糖酶酶活测定的影晌

针对运用终点法以DNS还原糖法测定木聚糖酶活力过程中,底物浓度对测定结果的影响进行了试验分析,并结合实际和理论意义进行综合考虑,提出了在测定过程中对试验结果影响较小的适宜底物浓度,提高准确性和可重复性.     

饲用中性蛋白酶酶活测定的影响因子的研究

本文介绍了福林酚法测定中性蛋白酶的原理、步骤,并重点研究了福林法测定中性蛋白酶在实际应用中的一些问题。研究表明,无论何种来源的固体蛋白酶都可以用0.3mol/L氯化钠作为浸提剂,浸提时间为30min;酶促反应的时间为5min,显色反应为20min;酶液合适的稀释倍数为最后测定酶活时OD值不超过0.5;不同厂家生产的酪素底物对测定结果有影响,底物浓度应保持在1%;酶促反应的温度和pH分别为40℃和7.0。