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相似文献
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1.
猪圆环病毒2型的分离与鉴定   总被引:16,自引:1,他引:15  
利用PCR方法,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征(PMWS)的自然病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的DNA片段,并用限制性内切酶对PCR产物进行了酶切鉴定。将经PCR扩增和酶切鉴定为PCV2阳性的组织样品匀浆液接种到无PCV污染的PK15细胞中传代,经间接免疫荧光检查,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光;用接毒细胞制备超薄切片,在电镜下观察到了直径大约为17nm的圆形病毒样粒子和大量不同形态的胞浆内包涵体。由此表明分离出的病毒为猪圆环病毒2型。  相似文献   

2.
猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)Henan株的分离与全基因组序列分析   总被引:4,自引:6,他引:4  
用PCR方法从河南某猪场送检的1头疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的腹股沟淋巴结中检测到了猪Ⅱ型圆环病毒(porcine circovirus type2,PCV2)核酸。将该病料研磨、过滤除菌后接种无PCV1和PCV2污染的PK-15细胞,盲传12代后,用PCR方法仍然能够在接种细胞中检测到PCV2核酸。从接种细胞中收获病毒,经超速离心纯化后电镜负染观察.可见直径约17nm、呈二十面体对称结构的病毒粒子,表明从发病猪中分离到了PCV2,将该毒株命名为PCV2Henan株。序列分析表明:该株病毒全基因组长1767bp,包含11个读码框,与PCV1同源性为76.2%~77.3%,与其他PCV2株的同源性为95.5%~99.6%。  相似文献   

3.
猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemic wasting syndrome,PMWS)主要是由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起的猪断奶后多系统进行性消耗综合症候群。自从1991年加拿大首次报道以来,世界上许多国家都有本病的报道。2001年郎洪武等人在北京、河北一些猪场发现疑似PMWS的病猪,并从病猪分离到2株病毒,经鉴定为PCV-2型,从而确诊我国也存在PMWS。该病已成为影响养猪业发展的重要传染病之一,引起许多国家兽医工作者的高度重视。1病原猪圆环病(PCV)是一种无囊膜的单股DNA病毒。1973年Tischer首次从猪肾传代细胞中分离到PCV,并发现…  相似文献   

4.
猪圆环病毒多重PCR诊断方法的建立   总被引:8,自引:0,他引:8  
根据GenBank中20株猪圆环病毒(PCV2)核苷酸序列设计两对引物,建立的检测猪圆环病毒的多重PCR方法,其中引物P1、P2为PCV特异性,扩增938bp片段。P3、P4为PCV2特异性扩增490bp,因此本方法不仅可以扩增PCV片段,还可以同时区分PCV1和PCV2。该方法具有良好的特异性和敏感性,为猪圆环病毒的临床诊断与流行病学调查等研究奠定了基础。  相似文献   

5.
李英 《动物检疫》2012,(9):52-53
对山东省日照市某规模化猪场发现的患有断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)典型症状的病猪,采用针对猪圆环病毒2型(PCV2)开放阅读框2(ORF2)设计的特异性引物进行PCR检测,从病猪的组织样品中检测PCV2。从10头发病猪的组织样品中检测PCV2,结果有7头呈阳性结果。  相似文献   

6.
猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定   总被引:8,自引:4,他引:8  
从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,于第25代后毒价显著升高,于第35代毒价可达10^5.6TCID 50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明,分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈散在分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,病毒粒子直径约为17nm;病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成,与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用2mL的病毒细胞培养物(10^5.6TCID 50/mL)接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。  相似文献   

7.
断奶后多系统衰弱综合征是由猪环状病毒2型(PCV2)引起的,PCV2属于环状病毒属,它是一小的、无囊膜、环形、单股、负链DNA病毒。PCV2各分离株的同源性可达95%~99%,世界范围内只有一个PCV2血清型。诊断此病除依据临床症状与病理变化外,还利用中和试验、间接免疫荧光法和抗原捕捉酶免疫法检测抗体,组织化学法检测抗原,原位杂交及聚合酶链技术检测病毒DNA。注重日常管理和环境条件的控制,将此病给养猪业造成的损失减至最小。  相似文献   

8.
用PCR法扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)全长基因组。将全基因组插入到真核生物表达载体PcDNA3.1的多克隆位点中,获得单拷贝重组质粒P-PCV2和串连双拷贝重组质粒p-2PCV2,将所得质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经7次连续传代后,间接免疫荧光试验显示在细胞中含有病毒抗原。提取mRNA后经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录。免疫小鼠后,对免疫后不同天数小鼠的血清用ELISA检测,结果到免疫后35 d病毒几乎都能检测到衣壳蛋白特异性抗体,小鼠致死后在其体内也能检测到病毒DNA。结果表明,所构建的2种重组质粒均可表达并在体外组装出有感染性PCV2病毒粒子。为进行PCV2分子特性、疫苗免疫及致病机理研究打下了基础。  相似文献   

9.
为了解猪场20日龄内的仔猪发病死亡的病因,对2头病猪的肺脏、淋巴结、脑等组织进行病原学诊断。对2头病猪的组织样进行PCV2-ORF2基因、PRV-gE基因的PCR扩增。结果表明样品均能扩增出PCV2-ORF2基因、PRV-gE基因的特异性条带,这与预期的片段大小相符,说明这2头仔猪的病因为猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂病病毒野毒(PRV-gE)混合感染。这为猪场疾病的诊断和治疗提供实践与理论依据,对分析猪场接种疫苗产生免疫抗体的效果进行评估,从而不断地制定并完善免疫程序。  相似文献   

10.
摘要:本研究根据GenBank上已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的基因序列,设计了3对特异性引物,扩增PCV2、PRV、PPV,建立了同时检测PCV2、PRV、PPV的多重PCR方法。所扩增特异性产物片段大小分别为350、191、270 bp。该方法特异性强、敏感性高,可以用于猪圆环病、猪伪狂犬病、猪细小病的实验室诊断和流行病学调查。  相似文献   

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