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相似文献
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1.
本文根据禽痘病毒(FPV)基因组中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)常见整合区域的序列设计合成一对引物,对国外一株FPV疫苗进行了PCR扩增,结果扩增出一条1478bp的片段,经过测序和序列分析表明该片段为REV和FPV的整合序列,FPV序列中整合了大小为193bp的REV长末端重复序列,进一步比较显示该序列与国外REV毒株APC566、713和SNV的同源性分别为:99.6%、98.0%和87.3%,与我国REV分离株HA9901的同源性只有83.6%。同时该REV整合序列与国外已经测定的FPV毒株AJ581527、AY255633、AF198100、AF006064和AF246698比较时发现,这些毒株中含有的REV序列不仅完全一致,而且REV序列的插入位点也完全相同。这说明国外FPV疫苗中不仅含有REV整合序列,而且已经存在多年了。  相似文献   

2.
我国鸡痘病毒野毒重组株的流行初探   总被引:1,自引:1,他引:0  
从山东、河南等省不同的鸡痘发病地区分离和鉴定了20株鸡痘病毒野毒株,并分别根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)和鸡痘病毒(FPV)的基因组设计合成了1对上游源自REV基因组和下游源自FPV基因组的引物。随机从20株FPV野毒株中挑选7株接种鸡胚成纤维细胞,提取细胞DNA作为模板,利用这对引物进行PCR反应,结果均扩增到了779bp大小的目的片段。将其中1个片段测序发现此片段为REV和FPV的整合序列,其中REV序列426个碱基,FPV序列为304个碱基。结果表明,我国FPV野毒中已整合入REV的基因序列,而且这种整合株所占比例相当高,已成为主要的流行毒株。  相似文献   

3.
为了解山东地区鸡痘病毒(FPV)野毒流行株整合禽网状内皮组织增生病病毒(REV)前病毒的情况,同时比较FPV分离株和弱毒疫苗株整合REV前病毒序列的差异,本研究对山东不同地区的14个FPV分离株和国内外不同厂家的5个FPV疫苗株进行了REV前病毒整合区基因PCR扩增、核苷酸序列测定及基因分析.结果表明14个FPV分离株均整合了几乎全长的REV前病毒序列,这些序列与美国分离的FPV整合株AF246698的整合序列同源性最高,与REV标准株同源性较低;疫苗株均仅整合部分或完整的REV-LTR序列,但国产与进口疫苗株的整合序列不同,国产疫苗整合的LTR片段相对较小.研究表明所分离的山东FPV分离株均整合全长REV序列,疫苗株仅整合REV-LTR序列.然而FPV整合病毒株的致病特性、整合疫苗的安全性及对整合FPV野毒的免疫保护作用有待于进一步研究.  相似文献   

4.
以分离保存的整合禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)基因的鸡痘病毒(FPV)野毒株接种CEF细胞,间接免疫荧光试验检测REV,结果未检测到游离REV病毒粒子;以该毒株人工感染7日龄SPF雏鸡,同时设阴性对照,常规免疫新城瘦弱毒苗(ND)。接毒后每周采血动态检测NDV抗体、REV抗体、REV病毒血症;同时对试验鸡免疫器官指数、组织学变化动态观察,并对免疫器官的细胞凋亡动态检测。结果表明,整合REV基因的FPV感染后2周可引起鸡REV病毒血症,并产生REV抗体;导致中枢免疫器官发育分化不良,尤其对胸腺的影响最为明显,攻毒2周后,试验组与对照组相比,胸腺指数明显下降(P〈o.05);免疫器官主要表现实质细胞数量少,正常结构发育不良,间质结缔组织增生而发生纤维化;细胞凋亡检测证实免疫器官的淋巴细胞和巨噬细胞均有明显的凋亡现象,细胞凋亡是引起免疫器官萎缩的主要原因。对新城疫疫苗免疫反应呈显著的抑制作用,攻毒3周后,试验组血清新城疫病毒抗体滴度显著低于对照组(P〈0.05),其抗体滴度峰值低,维持时间短,下降速度快。本试验证实FPV整合REV前病毒基因组会明显改变FPV的致病性,表现某些REV的致病特征,使感染鸡REV抗体转为阳性并出现病毒血症,进一步证实REV可以通过基因组整合于FPV而进行传播的推测。  相似文献   

5.
某寿光鸡群发生肿瘤病例,从瘦小的鸡中随机抽取10只鸡接种鸡胚成纤维细胞进行针对禽白血病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生病毒(REV)和鸡马立克氏病毒(MDV)等三种肿瘤病毒的分离和鉴定,结果显示ALV和REV均为阴性,但分离到3株REV(SD1301、SD1302和SD1303)。对3株REV的env基因进行了扩增、克隆和序列分析,结果显示3株REV之间的env基因核酸同源性为100%,与国内参考毒株比较显示,3株REV分离自中国黑龙江的HLJR0901缘关系最近。本研究显示了地方品系鸡中REV感染的存在,表明要加强对我国地方品系中REV的检测和净化。  相似文献   

6.
提取鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)内蒙古分离株(C-98株)总RNA,参考GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)S1133株S1基因序列设计了2对引物,应用RT—PCR技术扩增了病毒S1基因,将S1基因cDNA克隆到pGEM—T Easy载体后测序。将测定序列拼接后与参考毒株ARV-176、ARV-138、ARV-S1133、MDRV—YJL的S1基因序列进行了比较。结果显示,AVAV C-98分离株的S1基因与强毒株ARV-176株的同源性最高,达99.9%;与MDRV—YJL的同源性为99.3%,与弱毒疫苗株ARV—S1133的同源性也达97.9%;与ARV-138株的同源性最低,为81.2%。表明,AVAVC-98株与参考毒株的差异较小,与疫苗株ARV-S1133有很高的同源性。  相似文献   

7.
猪瘟野毒E2基因同源性比较   总被引:1,自引:0,他引:1  
以人工感染发病猪的脾为材料提取总RNA,根据已报道的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套组聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对流行于我国甘肃省、陕西省、宁夏和广西自治区的5株野毒株的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了5株野毒之间及其与猪瘟兔化弱毒株(C-ST株)E2基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性。结果发现,5株野毒与C-ST株核苷酸序列的同源性为81.7%-83.1%,氨基酸同源性为87.3%-88.6%,表明它们之间存在较大的差异;但5株野毒之间核苷酸序列的同源性高达98.8%-99.3%,氨基酸同源性为96.6%-99.2%,表明它们之间的差异较小。  相似文献   

8.
4株猪瘟流行野毒株病毒结构蛋白E2基因的核苷酸序列分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
应用RT-PCR和nPCR扩增由4株甘肃省近期(1997-1998)猪瘟流行野毒株的E2基因,将其克隆到pGEM-TEasy载体上,经转化、筛选、鉴定后,测定核苷核序列,4株流行毒株的E2基因核苷酸序列同源性为89.2%-99.7%,相应的氨基酸序列同源性为93.8%-99.0%,这4株流行毒株;与C-株(疫苗种毒)E2基因的核苷酸序列同源性为82.2%-84.3%,相应的氨基酸序列的同源性为87.9%-90.2%,表明近期猪猪瘟流行毒株与C-株的gp55蛋白之间存在一定的差异。  相似文献   

9.
欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)FJ0602和FJ0603株的ORF4~7基因进行了分段克隆、序列测定及同源性比较。结果显示,FJ0602和FJ0603株与LV核苷酸同源性为95.2%和95.3%,与VR2332核苷酸同源性为67.1%和66.9%,证实FJ0602和FJ0603株均为欧洲型PRRSV;与欧洲型弱毒疫苗株AmervacPRRSV有高度同源性,达到98.6%以上,提示分离毒PRRSVFJ0602和FJ0603株可能由疫苗株演化而来。FJ0602和FJ0603之间的核苷酸同源性为99.6%,表明这2毒株亲缘关系很近,很可能来源于同一毒株。  相似文献   

10.
为分析髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒(ALV-J)地方分离毒株的分子特征及开展该病毒的反向遗传操作研究,本试验从四川某肉种鸡场髓细胞瘤病变病鸡的组织中分离到1株髓细胞瘤型ALV-J,命名为SCGS-1.序列测定表明其前病毒cDNA全序列长7 499 bp,与其他ALV-J代表毒株序列相似性均为95%~99%.在所有基因中,其env基因和LTR序列与其他毒株相应序列同源性相对较低,env基因同源性为93.0%~99.5%,LTR基因同源性为92%~95%,pol基因同源性为97%~99%,gag基因同源性为94%~97%.根据该毒株序列和质粒pUC19的序列,将SCGS-1株前病毒cDNA全序列分3段克隆入pUC19中,构建含SCGS-1前病毒cDNA的重组载体并命名为pUC-SCGS.试验结果为研究ALV-J的进化规律和开展反向遗传操作打下基础.  相似文献   

11.
应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒   总被引:1,自引:0,他引:1  
用丹麦产NUNC一次性细胞培养瓶,199培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,24h单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,4d后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形  相似文献   

12.
鸡胚中人工感染网状内皮增殖病病毒的检测   总被引:3,自引:0,他引:3  
为了模仿禽网状内皮增生病毒(REV)垂直感染鸡胚,在1和3日龄的发育SPF鸡胚人工接种不同剂量的REV,并继续孵化至12日龄.在将发育鸡胚制成成纤维细胞单层后,再用抗REV单克隆抗体11B118作间接荧光抗体反应检测REV.结果表明,从所有人工感染REV的鸡胚12日龄制备的成纤维细胞中均能在培养48h检测出REV.该方法可用于检测生产弱毒疫苗的SPF鸡胚及其相应细胞有无REV的污染.  相似文献   

13.
从表现腺胃炎的病鸡中分离到1株网状内皮增生症病毒   总被引:16,自引:1,他引:15  
从表现传染性腺胃炎的病鸡中分离到 1 株病毒。该病毒呈球形,真径 80~100 nm ,有囊膜。将病料接种于鸡胚成纤维细胞,分别用单克隆抗体免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验,证明该病毒为网状内皮组织增生症病毒。用细胞培养物接种于 1 日龄健康鸡,复制出与临床完全相同的症状。  相似文献   

14.
HVT国内株的分离鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
用来自国内某火鸡饲养场的健康火鸡血白细胞 ,接种于鸡胚成纤维细胞 ,分离到一株火鸡疱疹病毒的野毒—SY8_2。电镜下可观察到分离株SY8_2的鸡胚成纤维细胞培养物中存在典型的火鸡疱疹病毒粒子 ;分离株SY8_2的细胞培养物经卵黄囊途径接种 4日龄鸡胚 ,14天后在绒毛尿囊膜上形成痘斑 ;用分离物SY8_2细胞培养物接种 1日龄SPF雏鸡 ,感染雏鸡可产生病毒血症 ,并能从感染雏鸡的血液白细胞中重新分离到病毒 ;经 2个月的临床观察人工感染鸡无不良反应 ,剖检无任何病理解剖学变化 ;用HVT特异性单克隆抗体L78(3型 )做间接免疫荧光染色试验证实分离株SY8_2为MD血清 3型病毒—HVT。  相似文献   

15.
本试验使用3~6月龄健康易感牛9头(牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原、抗体均阴性),共分3组,每组3头犊牛。第1组首免肌肉注射IBRV-LNM弱毒疫苗株种毒,接种1周后,每头牛接种BVDV-SM弱毒疫苗株;第2组只接种BVDV-SM弱毒疫苗株种毒,接种时间同第1组;第3组为对照组,接种MDBK细胞培养液。接种BVDV-SM疫苗毒后每周采血至疫苗毒接种后28 d,测定接种后BVDV抗体效价,并采用BVDV-JL检验用强毒进行攻毒试验。结果表明,第1组与第2组试验动物血清中牛病毒性腹泻病毒抗体水平无明显差异,能够抵抗BVDV-JL强毒攻击达到免疫保护的效果,说明牛传染性鼻气管炎病毒IBRV-LNM弱毒疫苗株接种后在牛体内对牛病毒性腹泻病毒BVDV-SM疫苗毒不产生免疫干扰作用。  相似文献   

16.
商品代肉鸡J亚群禽白血病的病理及病毒分离鉴定   总被引:13,自引:1,他引:12  
通过对山东某肉鸡养殖场发病的商品肉鸡组织病理学检查和将病料接种鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,我们在国内首次从商品代肉鸡中分离到了 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)。从组织切片中可以看到肝脏、脾脏等器官的髓细胞瘤细胞 ,呈散在或成簇 ,髓细胞瘤细胞的细胞质内显现嗜酸性颗粒。用抗 AL V- J囊膜糖蛋白的单克隆抗体进行的 IFA中 ,病料接种 CEF后进行的 IFA呈现强阳性  相似文献   

17.
Tonsils of 10 calves were inoculated with Pasteurella haemolytica (PH) and the degree of colonization was followed by collecting sequential tonsil. wash specimens. Tonsils were colonized for at least 3 weeks after instillation of PH into the tonsillar sinus. Calves with colonized tonsils responded with serum and nasal secretion antibody responses to PH and to leukotoxin. Pasteurella haemolytica was detected in nasal mucus specimens of 2 calves during the week after inoculation of the tonsils, but all other specimens were culture-negative. Infectious bovine rhinotracheitis virus-induced respiratory tract disease 25 days later did not elicit a population increase of PH in the tonsils, and did not elicit shedding of PH in nasal mucus.  相似文献   

18.
选择未接种禽流感-新城疫疫苗的黄腹角雉所产蛋,经孵化后,于10日龄选黄腹角雉15只,随机分成A、B、C 3组,每组5只,以点眼接种量的10、15、20羽份,直接口腔滴入禽流感-新城疫重组二联活疫苗rl-H5株口服免疫。分别于接种前1 d和3次接种后15 d经翅静脉采血,通过测定其禽流感和新城疫血凝抑制试验(HI)抗体滴度。结果表明,第2次接种20羽份剂量抗体效价达到峰值,新城疫和禽流感HI抗体均值分别为7.5 log2和5.5 log2。  相似文献   

19.
Transmission of Lawsonia intracellularis from experimentally inoculated pigs to naive swine was demonstrated in this study. The study was conducted using conventional pigs divided into three groups as follows: principles inoculated with L. intracellularis, sentinels, and controls. The pigs were inoculated and paired on 13 and 9 days post-inoculation with a sentinel pig for 7 days. Fecal samples and serum samples were collected throughout the study for polymerase chain reaction (PCR) and antibody testing by indirect fluorescent antibody techniques. After co-mingling, the inoculated group was necropsied; sentinel and control pigs were necropsied 7-14 days later. The intestinal tracts were evaluated grossly and microscopically for lesions. PCR was performed on intestinal mucosal scrapings and feces. Warthin-Starry and fluorescent antibody staining procedures were conducted to confirm colonization with L. intracellularis. Gross and microscopic lesions typical of porcine proliferative enteropathy (PPE) were observed in both the inoculated and sentinel groups. Transmission was demonstrated from inoculated principle pigs to sentinel pigs. PCR results detected cyclical shedding of L. intracellularis in the feces. Seroconversion occurred in pigs that were exposed to L. intracellularis. From this study, it was demonstrated that transmission of L. intracellularis can occur easily in an environment with experimentally infected pigs and that PCR can be a useful tool to monitor fecal shedding of the organism.  相似文献   

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