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相似文献
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1.
为验证在有机物存在下格利特(20%戊二醛溶液)消毒剂杀灭禽流感病毒的能力,试验模拟空栏鸡舍和周围环境消毒实际情况,在鸡粪中混入H9亚型禽流感病毒,以接种鸡胚尿囊液中H9亚型禽流感病毒血凝价<2 log2判为感染阴性,以样品经消毒剂作用后检测不到病毒含量(即0EID50)为病毒完全杀灭(100%杀灭病毒),研究格利特消毒剂杀灭禽流感病毒的效果,结果显示:1∶400以下稀释的格利特消毒剂4℃或25℃作用20 min,均能100%杀灭混入鸡粪中的H9N2禽流感病毒;1∶200稀释的格利特消毒剂25℃作用20 min,能100%杀灭存在于鸡粪和清洁剂中的H9N2禽流感病毒.1∶1600以下稀释的格利特消毒剂25℃作用20 min,均能100%杀灭无鸡粪保护的H9N2禽流感病毒.  相似文献   

2.
采用悬浮杀灭试验,考察戊二醛苯扎溴铵溶液对H9N2亚型禽流感病毒的灭活效果。将戊二醛苯扎溴铵溶液通过不同稀释倍数(1 250、2 500、5 000、10 000、20 000)、在不同作用时间(5、10 min)观察其对H9N2亚型禽流感病毒的灭活效果。结果显示,戊二醛苯扎溴铵溶液在10000倍稀释,与H9N2亚型禽流感病毒作用5 min或10 min,灭活率达99.90%以上;在20 000倍稀释,作用5 min或10 min,灭活率均小于99.90%。表明戊二醛苯扎溴铵溶液在10 000倍稀释与H9N2亚型禽流感病毒(20±1)℃水浴作用5 min,即可对H9N2亚型禽流感病毒达到很好的灭活效果。  相似文献   

3.
为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚上最佳培养工艺,试验采用H9N2亚型禽流感病毒分离株以不同稀释倍数接种不同鸡胚(SPF及普通鸡胚)、不同日龄鸡胚及不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备出的鸡胚尿囊液的产量及病毒效价。结果表明:H9N2亚型禽流感病毒接种无禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~(4 )~1×10~5倍,接种带有禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~3~1×10~4倍,最佳接种日龄为10日龄,最佳培养时间为96~120 h。说明采用优化的鸡胚培养方法生产H9N2亚型禽流感病毒可以得到高质量、高产量的病毒液。  相似文献   

4.
为了观察“二氧化氯泡腾片”对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、禽流感H9亚型病毒及鸡新城疫病毒的杀菌及杀病毒效果,采用悬液定量杀菌试验和通过固定病毒稀释消毒液法进行实验室观察。结果:二氧化氯5mg/L作用5min即可对大肠杆菌临床分离株产生t00%的杀菌效果。二氧化氯5mg/L作用10min或二氧化氯10mg/L作用5min均能对金黄色葡萄球菌临床分离株产生100%的杀菌效果。2mg/L二氧化氯就能对10砸ID50新城疫病毒有100%的杀灭作用,而1mg/L不能全部杀灭新城疫病毒。禽流感病毒H9亚型对二氧化氯比新城疫病毒敏感,1mg/L二氧化氯即可对10^3EID50禽流感病毒H9有较好的杀灭作用。结论:“二氧化氯泡腾片”是一种方便、高效的消毒剂,在较低的浓度条件下,就能对家禽主要病原微生物有杀灭效果。  相似文献   

5.
研究了一种复方戊二醛消毒剂对鸡禽流感病毒(AIV H9N2株)的杀灭效果及稳定性.将该消毒剂1:500稀释度的溶液在20℃条件下与等量2×105 EID50AIV(H9N2株)病毒液作用,10 min内可完全杀灭AIV(H9N2株)病毒;该消毒剂1:500稀释度的溶液在室温下放置2 d,仍能保持原有的消毒效果.  相似文献   

6.
《中国兽医学报》2015,(12):1948-1953
比较鸭源H5N5亚型禽流感病毒(A/Duck/Changchun/01/2010)和鸭源H5N1亚型禽流感病毒(A/Duck/Liaoning/N/2011)对BALB/c鼠的致病性。以106EID50/50μL剂量鼻腔感染6周龄BALB/c鼠,攻毒后3,5,7,10,14 d取小鼠的肺、脑和肝脏,处理后接种10日龄SPF鸡胚做病毒回收试验,取死亡鸡胚的尿囊液进行RT-PCR检测;分别取接种病毒后5 d小鼠的脑、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏进行病理组织学检测。结果显示,小鼠接种H5N5和H5N1亚型禽流感病毒后,均无明显的临床症状,肝脏中分别于接种后3,5 d分离到病毒,肺脏中于接种后5 d分离到病毒,脾脏、肾脏和粪便中均未分离到病毒。病理组织学检测发现,病毒对小鼠的脏器组织产生了不同程度的病理损伤,以肺脏、脑和肝脏较为明显,且H5N1亚型禽流感病毒引起小鼠脑和肝脏的病理损伤比H5N5亚型更严重。这表明2株鸭源禽流感病毒对小鼠均有一定的致病性,且H5N1亚型强于H5N5亚型。  相似文献   

7.
禽流感是由正粘病毒科中的H5亚型禽流感病毒(AIV)引起的一种烈性传染病,一旦爆发会给养禽业带来毁灭性的危害.近年来,由于国内外时有从活禽市场检出H5亚型禽流感病毒或发生禽流感等情况,故加强对禽流感的防制工作极为重要.本试验采用长沙拜特生物科技研究所生产的拜特灭毒威对H5亚型禽流感病毒进行灭毒试验.结果表明,拜特灭毒威在1∶4000至1∶15000或1∶4000至1∶20000的浓度范围内与AIV作用5min或10min,对AIV的杀灭率可达99.9%以上;稀释度在1∶8000以下作用5min或1∶10000以下作用10min,杀灭率均为100%.  相似文献   

8.
李想  崔焕忠  李乾学 《中国兽医学报》2023,(10):2025-2029+2049
基于表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering, SERS)和适配体捕获相结合技术,建立1种H5N1亚型禽流感病毒快速检测方法。本实验室筛选得到2条针对H5N1亚型禽流感病毒具有良好的特异性和灵敏度的适配体,与磁珠偶联建立针对H5N1亚型禽流感病毒捕获试剂,通过对捕获体系进行原位还原生成纳米银颗粒增强拉曼信号,建立了原位、快速、无损的H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术。结果表明:H5N1亚型禽流感病毒在1 058 cm-1处有特异性拉曼峰谱,该方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性。该方法的最低检测限达到原病毒液稀释的1010倍。利用本方法可在10 min内快速检测出待测样本中是否有H5N1亚型禽流感病毒的存在,能够在大体积、低浓度样品中快速检测出目标病原,满足H5N1亚型禽流感病毒临场快检的需求。  相似文献   

9.
针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于sYBRGreenI检测模式的荧光定量RT—PCR(real—timeRT—PCR,RRT—PCR),最低检测限为2.1×10^2拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)℃,对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增,对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其它家禽常见病原RNA无扩增,可重复性好,批内变异系数及批间变异系数分别为2.99%和5.12%;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需5h。  相似文献   

10.
为了验证荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒的可行性,应用建立的荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感抗原、H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原评估检测方法的特异性,检测不同稀释度的H7N9亚型禽流感抗原,并用建立的方法检测采自三鸟批发市场100份泄殖腔、喉拭子。结果是建立的荧光RT-PCR方法,H7体系能检测出1:10-10抗原稀释度,N9体系能检测1:10-9抗原稀释度,对H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原无交叉反应;检出100份泄殖腔、喉拭子结果均为阴性。结果表明,荧光RT-PCR方法H7N9亚型禽流感病毒具有快速、灵敏、特异的特点,适合对禽类的大规模监测。  相似文献   

11.
为建立H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,通过对杂交瘤细胞的IPMA筛选和连续克隆化筛选鉴定抗H9N2亚型AIV中和性单克隆抗体;以胶体金标记HA单克隆抗体,配对HA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG为检测线和质控线,制备H9N2亚型AIV快速检测试纸条,测定其特异性和敏感性。结果显示,获得了11株稳定分泌抗H9N2亚型AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞,其单克隆抗体腹水IPMA效价在1.28×10-4至2.56×10-5之间。单克隆抗体3A2、5H6、6B8、7E10和9G12血凝抑制试验(HI)显示血凝抑制活性,其(HI)效价在6log2~9log2之间。单克隆抗体3A2、6B8和9G12在病毒中和试验中对H9N2亚型AIV有显著病毒中和活性,中和效价分别1∶6 400、1∶25 600和1∶25 600。Western blotting结果提示,该中和单克隆抗体识别HA蛋白线性抗原表位。利用配对单克隆抗体3A2和9G12研制的H9N2亚型AIV检测试纸条检测H9N2亚型AIV尿囊液的效价为9log2,灵敏度与经典血凝试验(HA)相当,与其他亚型AIV (H1、H3、H5、H7),以及新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒等相关病毒均无交叉反应。本研究制备了具有病毒中和活性的抗H9N2亚型AIV单克隆抗体,并初步研制了H9N2亚型AIV检测试纸条,为H9N2亚型AIV新型疫苗研制和快速检测奠定良好的研究基础。  相似文献   

12.
为模拟哺乳动物感染H5亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)的发病进程,本研究采用对哺乳动物高度致病的H5N1亚型HPAIV株A/bar-headed goose/Qinghai/3/05 (BHG/3/05),以低剂量鼻腔接种小鼠,观察发病、存活、病毒复制及组织病理损伤情况.结果显示,100.4 EID50即能够100%感染小鼠,但发病表现缓慢,死亡延迟至8d以后,存活达60%;体内病毒复制可持续10 d以上,感染后前3d病毒的增殖限于呼吸道,随后扩散至脑、脾、肾等其他器官;组织病理学观察肺脏早期表现出渗出性炎症,第10d发展为典型的间质性肺炎.本研究结果为探讨人禽流感的病理发生机制提供了具有价值的模型.  相似文献   

13.
为了解禽流感病毒(AIV)的变异情况,本研究对我国禽流感监测期间分离鉴定的两株鹅源AIVA/Goose/Guangdong/362/2009(H6N2)(GD/362/09)与A/Goose/Guangdong/244/2010(H6N2)(GD/244/10)进行全基因序列的测定和分析,并进行其对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点的序列为339PQIETR↓GLFG348,表明两株病毒均为低致病力AIV。HA和NA的核苷酸同源性分别为84.5%和98.9%,另外,序列分析结果显示,GD/244/10的PA、M基因分别与高致病性AIV(HPAIV)A/aquatic bird/Korea/w74/2005(H5N2)和A/duck/Hong Kong/140/1998(H5N1)的同源性最高,表明其内部基因来源复杂,可能与H5 HPAIV发生重组或有共同的来源。病毒对动物的致病性试验结果显示:两株病毒均不能在鸡体内有效复制,在小鼠的肺脏能够有效复制,但在小鼠的鼻甲内只能检测到GD/244/10。  相似文献   

14.
目的以H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的血凝素(HA)抗原表位重组表达蛋白为抗原,探索H5亚型AIV单克隆抗体制备的简便有效途径。方法利用H5亚型AIV的HA抗原表位原核表达重组蛋白为抗原,4次免疫8~10周龄雌性BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特性及初步应用价值进行测试。结果得到一株能稳定分泌针对H5亚型AIVHA抗原表位的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体ELISA效价达1:5×104,为具有IgK轻链的IgM亚类。该单克隆抗体能特异性地与H5亚型AIV产生肉眼可见的WesternBlot免疫印迹反应,与其它供试的禽病抗原无反应。H5N1亚型AIV阳性血清能有效阻断辣根过氧化酶标记的单克隆抗体与HA抗原表位重组蛋白的结合。结论本研究探索出一条利用H5亚型AIV的HA抗原表位重组表达蛋白为抗原的单克隆抗体制备的简便、高效途径,所制备的单克隆抗体稳定性好、效价高、特异性强,在H5亚型禽流感病毒及其血清学检测中有较高的应用价值。  相似文献   

15.
Detecting avian influenza virus (AIV) and Newcastle disease virus (NDV) at low concentrations from tracheal and cloacal swabs of avian influenza- and Newcastle disease-infected poultry was carried out using a highly sensitive immunological-polymerase chain reaction (immuno-PCR) method. Magnetic gold particles were pre-coated with a capture antibody, either a monoclonal anti-AIV/H5 or monoclonal anti-NDV/F and viruses serially diluted ten-fold from 10(2) to 10(-5)EID(50)/ml. A biotinylated detection antibody bound to the viral antigen was then linked via a streptavidin bridge to biotinylated reporter DNA. After extensive washing, reporter DNA was released by denaturation, transferred to PCR tubes, amplified, electrophoresed and visualized. An optimized immuno-PCR method was able to detect as little as 10(-4)EID(50)/ml AIV and NDV. To further evaluate the specificity and the clinical application of this IPCR assay for AIV H5N1 and NDV, the tracheal swab specimens, taken from chickens which were infected with H5N1/AIV, H9N2/AIV, H7N2/AIV, NDV, IBDV, IBV/H(120), were detected by IPCR. Our data demonstrated that this monoclonal antibody-based immuno-PCR method provides a platform capable of rapid screening of clinical samples for trace levels of AIV H5 and NDV in one step.  相似文献   

16.
In order to develop a rapid and simultaneous assay for H7N9 subtype avian influenza virus (AIV), three pairs of specific primers were designed according to the conserved sequences of the hemagglutinin (HA) gene of H7 subtype AIV, the neuramidinase (NA) gene of N9 subtype AIV, and the matix (M) gene of all subtypes AIV. The reaction conditions were optimized, and the specificity and sensitivity of this method were evaluated to develop a triplex PCR assay. It was shown that H7N9 subtype AIV could be amplified into three specific bands by this triplex PCR, the lengths of these bands were 330 (H7 AIV), 207 (N9 AIV) and 632 bp (all AIV), respectively. Samples containing H7 or N9 subtype AIV could be amplified into two specific bands, which were 330 and 632, 207 and 632 bp, respectively. Samples containing other subtypes AIV could be amplified into a 632 bp specific band. No specific band was amplified from other avian pathogenic virus. Sensitivity test results showed that as low as 103 copies/μL H7N9 subtype AIV could be detected. This triplex PCR could simultaneously diagnose H7N9 subtype AIV, single H7 subtype AIV, single N9 subtype AIV and other subtype AIV in one tube. This assay was a rapid, specific and sensitive method for the detection of H7N9 subtype AIV. It could be applied in rapid diagnosis for clinical samples, and also provided a technical support to prevent and control H7N9 subtype AIV.  相似文献   

17.
为了获得H9亚型禽流感病毒(AIV)流行毒株并掌握流行毒株的分子特征和致病性,采用病毒分离、血凝性试验、鸡胚半数感染量(EID50)测定、HA基因序列分析、致病性试验、交叉保护性试验等对3份临床疑似H9亚型AIV感染病料进行了研究。结果:3份临床病料样品可引起10日龄SPF鸡胚规律性死亡,3株分离毒株对1%鸡红细胞的凝集效价分别10log2、11log2和10log2;对SPF鸡胚的EID50分别为10-8.83/mL、10-9.50/mL和10-9.0/mL;与2018年上海分离毒株亲缘关系较近,进化树处于同一分支;对SPF雏鸡的发病率分别为80%、100%和90%;均未引起SPF雏鸡死亡;彼此之间具有100%的交叉保护率,商品化禽流感(H9亚型)灭活疫苗对3株分离毒株的保护率分别为100%、90%和100%。本试验成功分离鉴定到了3株低致病性H9亚型AIV流行毒株,并证实当前商品化疫苗对H9亚型AIV流行毒株仍具有较好的保护效果。  相似文献   

18.
H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异株致病性及抗原特性   总被引:1,自引:0,他引:1  
为确定近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV) HA蛋白S145N点突变对病毒毒力变化和抗原性变异的影响,笔者对从全国不同地区分离的12株H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株和HP疫苗参考株进行了半数鸡胚感染量(EID50)、半数鸡胚致死量(ELD50)、平均鸡胚致死时间(MDT)、雏鸡脑内致病指数(ICPI)、鸡静脉致病指数(IVPI)和8周龄SPF鸡感染排毒试验,并与抗H9N2亚型AIV HP参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性进行测定.结果发现,H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株毒力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长.单抗2A4和F6不能抑制H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞.研究结果表明,H9N2亚型AIV呈现变异趋势,有毒力增强和抗原性变异毒株出现.S145为H9N2亚型AIV HA蛋白的1个抗原位点,是血凝抑制抗体结合的位点,但有该位点漂变导致抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用.这提示该病的防控面临着新的挑战.  相似文献   

19.
虽然H3、H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)是低致病性禽流感病毒,但其具有跨宿主感染哺乳动物的能力,对社会公共卫生安全具有重大的潜在危害,因而对这些亚型病毒的监测极其重要。通过比对GenBank上H3、H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了分别针对H3 AIV和H9 AIV的特异性探针。特异性试验和标准曲线试验的结果显示,这两个探针仅分别特异性识别H3、H9亚型AIV,且具有较好的扩增效率。通过重组质粒pMD19-T-H3HA和pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板,进行敏感性实验。结果表明,本研究所建立的荧光定量PCR方法能检测到100个DNA拷贝数H3 AIV和10个DNA拷贝数的H9 AIV,比传统PCR方法敏感性分别提高了100倍和1000倍。此外,本方法还能检测到10 EID50的H3亚型AIV或H9亚型AIV,比传统PCR方法检测敏感性均提高了1000倍。批间和批内试验的变异系数均小于3%,表明本研究建立的方法具有较好的重复性。此外,与传统PCR方法相比,用H3、H9亚型AIV双重荧光定量PCR方法检测人工感染动物的肺组织时,针对H3 AIV的敏感性提高了10~100倍,针对H9 AIV的敏感性提高了100倍。综上所述,本研究所建立的H3、H9亚型禽流感病毒双重荧光定量PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对H3、H9亚型禽流感病毒监测具有重要的应用价值。  相似文献   

20.
It was found for the first time at the end of 2013 in China that avian influenza A virus subtype H10N8 could infect human beings and result in death. No such a case has been reported in other parts of the world. Similarly to H7N9, H10N8 AIV is less pathogenic in poultry. However, when an H10N8 virus infects a human being, the virus can become highly pathogenic. A person infected with an H10N8 AIV deteriorated quickly and the mortality rate is high, and H10N8 infection poses a great threat to human health. At present there are no effective means to prevent and control H10N8 AIV infection. It is currently not clear how an H10N8 AIV is transmitted to humans. There are great concerns in public whether an H10N8 AIV will cause another outbreak in humans. This article will briefly describe the characteristics of H10N8 subtype viruses and the current research on these viruses.  相似文献   

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