圆眼燕鱼哈维弧菌的分离鉴定及药敏试验

从患病圆眼燕鱼(Platax orbicularis)体内分离到一批形态一致的优势菌株,通过细菌鉴定并检测其药物敏感性,以期为圆眼燕鱼的疾病防治提供参考。对分离菌株进行形态观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列分析,结果显示该菌株与弧菌表型特征一致,16SrRNA与GenBank中哈维弧菌(Vibrio harveyi)的同源性高达99%,在系统进化树中与哈维弧菌(KU245727)聚为一分支,结合该菌的生理生化特征和基因序列分析,鉴定该优势菌株为哈维弧菌。药敏试验结果显示,该分离菌对头孢噻肟、强力霉素、恩诺沙星、萘啶酸、卡那霉素、妥布霉素、氯霉素、复方新诺明等14种药物敏感,对阿莫西林、青霉素G、乙酰螺旋霉素、杆菌肽、多黏菌素B、利福平、红霉素和磺胺异恶唑等8种药物表现为耐药。采用PCR方法检测该菌株携带TEM、Sul2、ANT(3′′)-1耐药基因。研究结果可为哈维弧菌的鉴定及圆眼燕鱼的疾病诊治提供参考。     

半滑舌鳎源创伤弧菌分离鉴定与药敏试验

为查明引起河北省昌黎县某海水养殖场半滑舌鳎患病及死亡的病原菌,本研究从半滑舌鳎肝、脾、腮、肠道分离纯化得到1株优势菌株,对其进行了理化鉴定和16S rDNA序列分析、致病性试验、毒力基因检测和中西药的药敏试验。结果显示,分离菌为创伤弧菌(V.vulnificus),序列比对显示与创伤弧菌同源性为100%,菌株命名为V.vulnificus QHD-1。动物回归试验证明该菌是半滑舌鳎的病原菌。小鼠半数致死量(LD_(50))为2.4×10~6 CFU/mL,携带毒力基因溶细胞素(vvhA)、细胞毒素(rtxA)、铁载体(viuB)、荚膜多糖(wza)等。西药药敏试验结果显示,分离菌株V.vulnificus QHD-1对氟苯尼考等7种药物敏感,对氧氟沙星等5种药物中敏;对头孢拉定、土霉素等6种药物耐药;中药药敏试验结果表明,苏木、诃子、乌梅、五倍子抑抑菌效果较好;最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均为1.9～7.8 g/L;中药联合抑菌试验结果表明,黄芩和黄柏组合、五倍子和黄芩组合、乌梅和五倍子组合、艾叶和荆芥组合、板蓝根和黄芩组合对创伤弧菌表现协同作用。研究结果证明V.vulnificus QHD-1对鱼和小鼠具有较强的致病性,具有一定的公共卫生危害性;同时药敏试验结果为该地区鱼病的防治提供了依据。     

生物素-亲和素斑点酶联免疫吸附试验快速检测鱼源副溶血性弧菌的研究

本研究建立了快速检测鱼源副溶血性弧菌的BA-Dot-ELISA方法.用该法可检出每毫升接种10个菌,增菌18h的培养物.该法敏感性为10~4个/mL,比Dot-ELISA敏感10～100倍.不与溶藻性弧菌、亲水气单胞菌等13种杂菌发生交叉反应.增菌前杂菌多于副溶血性弧菌10~6时,对检测结果有影响.可在22～24h报告结果,比常规培养法快4～6d以该法对带鱼、小黄花鱼、马面鱼、鲤鱼等311份样本进行检测,检出率分别为47.0%、41.7%、14.8%和11.8%,与常规培养法相差不显著(P>0.05).生化试验复检结果表明,检出的阳性可凝菌株均为副溶血性弧菌.该法适用于在短时间内对大批样本的检测.     

黄颡鱼源拟态弧菌的分离鉴定

采用病理剖检、分离培养、染色镜检、生化试验和16S rRNA基因序列分析等方法对分离菌株进行鉴定,结果显示该分离菌的培养特性、菌落形特征、生理生化特征均与拟态弧菌相同;药敏试验结果表明,该分离菌对链霉素、罗红霉素、丁胺卡那、氧氟沙星高度敏感,对多黏菌素敏感,对青霉素、氟苯尼考、头孢曲松、强力霉素耐药;16S rRNA基因序列同源性分析结果显示,该分离菌与弧菌科弧菌属的同源性为92.8%～99.9%,其中与中国分离的2株拟态弧菌的同源性最高(99.9%)。遗传进化树结果表明,分离株与霍乱弧菌、易北河弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌等自成一个分支,其中在这分支下与中国分离的拟态弧菌SCCF04(KC503059.1)、拟态弧菌XQ(KJ604709.1)单独另成一个小分支。从黄颡鱼中分离出1株拟态弧菌,并将命名为201811,试验结果可为黄颡鱼拟态弧菌病的防控提供参考。     

半滑舌鳎弧菌病病原的分离鉴定

从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,生化特性与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)较为接近,以hsp60基因为遗传标记构建的系统发育树将菌株150803与溶藻弧菌聚为一支,置信度为99%,采用特异性引物扩增溶藻弧菌dnaJ基因得到预期144 bp的基因片段。综合以上结果判定引起此次半滑舌鳎发病的病原为溶藻弧菌。对22种抗菌药物的敏感性试验表明,菌株150803对恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、菌必治敏感,对氟苯尼考、呋喃唑酮、苯唑青霉素等具有抗性。     

蟹源致病性拟态弧菌的编码鉴定及其特性分析

从病蟹体内分离到 1株致病菌 (H4株菌 ) ,经细菌编码鉴定法确定为拟态弧菌 (Vibrio mimicus)。对 H4株菌及其胞外产物的生物学特性检测结果显示 :(1) H4株菌对弧菌抑制剂 O/ 12 9、多粘菌素敏感 ,能在无盐胨水中生长 ,拉丝试验阳性 ,氧化酶阳性 ,VP阳性 ,发酵葡萄糖产酸不产气。这些生物学性状符合《伯杰氏细菌鉴定手册》中对拟态弧菌的描述 ,证实了编码鉴定结果的正确性 ;(2 ) H4株菌能粘附人及多种动物红细胞 ,使红细胞发生凝集 ,且该凝集现象不能被 D-甘露糖所抑制 ,推测红细胞膜上存在的血凝素受体不含有甘露糖结构 ;(3) H4株菌的胞外产物具有致死性、溶血性和蛋白酶活性 ,表明胞外产物中至少存在溶血素和胞外蛋白酶 2种致病因子     

养殖河豚鱼弧菌病原菌的鉴定和生物学特性分析

从鳍基部、躯干部以及腹面出现斑点状出血的患病河豚鱼病灶处分离出11株优势菌(M1～M11),以体壁肌肉注射方式进行感染实验,证实菌株M2、M3～M6和M10为养殖河豚鱼鳍基部、躯干部以及腹面出现斑点状出血的病原菌,经形态学观察、生理生化特性分析和实时PCR检测,鉴定结果均为河弧菌。对15种药物的敏感性试验证实该菌株对氯霉素、环丙沙星和诺氟沙星较为敏感。     

水环境中噬菌蛭弧菌的分离鉴定

噬菌蛭弧菌为一类杆形、弧形或螺旋形的革兰阴性菌,可以寄生并裂解其他细菌。本试验以禽源大肠杆菌、沙门菌以及环境水体中分离的1株大肠杆菌为宿主菌,采用双层琼脂培养法成功地从环境水体中分离到3株噬菌蛭弧菌,分别命名为BDD、BDE、BDH。电镜观察证明菌体大小约0.33μm×0.78μm,单个弧形,一端有一根长鞭毛。基因序列分析表明,分离株与已发表的噬菌蛭弧菌属其他菌株16S rRNA基因序列的同源范围分别为96.0%~99.9%。通过对不同细菌的裂解试验证明,3个分离株对大肠杆菌、沙门菌、摩根摩根氏菌、变形杆菌和阴沟肠杆菌等均具有裂解作用,但对铜绿假单胞菌、鸭疫里默氏菌和金黄色葡萄球菌不敏感。     

中国对虾育苗场弧菌病的诊断与防制

从患病虾苗分离出病原菌，根据其病原菌形态、培养特性和生化特性，初步鉴定为副溶血弧菌。药敏实验结果表明，该菌对红霉素、四环素等抗菌药敏感，对土霉素、新霉素、复方新诺明、先锋霉素等抗菌药不敏感，对强力消毒灵和漂白粉等消毒剂敏感。     

半滑舌鳎皮肤溃疡病的病原分离鉴定与药物敏感性分析

半滑舌鳎皮肤溃疡病是在半滑舌鳎养殖过程中经常出现的疾病。为确定该疾病的病原和筛选出有效地治疗药物,本研究从患皮肤溃疡病的半滑舌鳎病灶中分离到1株细菌。细菌形态观察、生化特性鉴定等试验结果表明,该菌为革兰阴性,呈弧形,单鞭毛;能产生接触酶、精氨酸双水解酶和氧化酶,V-P反应阳性,不产生吲哚,不能分解山梨醇和甘露醇;不能在42℃环境下生长。16s rRNA基因序列和系统发育树分析发现,该菌株序列与创伤弧菌同源性为100%。因此,证明该菌为创伤弧菌。同时,动物回归试验证明该菌有较强致病能力。药敏试验结果显示,该菌对痢特灵、氧氟沙星、氨曲南等敏感,对左氧氟沙星、卡那霉素、新霉素等耐药。     

中国圈养野生动物疫苗使用调查

2005年对中国动物园协会单位中的18家动物园饲养野生动物疫苗免疫情况进行调查。受调查动物园在野生动物疫苗使用和动物种类方面具有一定的代表性。调查结果显示动物园动物现共使用18类36种疫苗,预防31种疫病。其中哺乳动物使用14类24种疫苗,预防24种疫病;禽类使用4类12种疫苗,预防7种疫病。使用范围最广的有禽流感、犬瘟热疫苗等、新城疫疫苗、猫瘟热疫苗等。共有24目58科动物接种疫苗,其中食肉动物类1目8科,食草动物类3目9科,杂食动物类2目3科,禽类18目38科。研究结果提示应加强动物园之间疫病信息交流、防疫资源的利用、疫病监测和研究,加大对动物园动物疫病的研究投入,逐步建立动物园动物统一的防疫规程。     

Comparison of in vitro and in situ methods in evaluation of forage digestibility in ruminants

The objective of this study was to compare the application of different in vitro and in situ methods in empirical and mechanistic predictions of in vivo OM digestibility (OMD) and their associations to near-infrared reflectance spectroscopy spectra for a variety of forages. Apparent in vivo OMD of silages made from alfalfa (n = 2), corn (n = 9), corn stover (n = 2), grass (n = 11), whole crops of wheat and barley (n = 8) and red clover (n = 7), and fresh alfalfa (n = 1), grass hays (n = 5), and wheat straws (n = 5) had previously been determined in sheep. Concentrations of indigestible NDF (iNDF) in all forage samples were determined by a 288-h ruminal in situ incubation. Gas production of isolated forage NDF was measured by in vitro incubations for 72 h. In vitro pepsin-cellulase OM solubility (OMS) of the forages was determined by a 2-step gravimetric digestion method. Samples were also subjected to a 2-step determination of in vitro OMD based on buffered rumen fluid and pepsin. Further, rumen fluid digestible OM was determined from a single 96-h incubation at 38°C. Digestibility of OM from the in situ and the in vitro incubations was calculated according to published empirical equations, which were either forage specific or general (1 equation for all forages) within method. Indigestible NDF was also used in a mechanistic model to predict OMD. Predictions of OMD were evaluated by residual analysis using the GLM procedure in SAS. In vitro OMS in a general prediction equation of OMD did not display a significant forage-type effect on the residuals (observed - predicted OMD; P = 0.10). Predictions of OMD within forage types were consistent between iNDF and the 2-step in vitro method based on rumen fluid. Root mean square error of OMD was least (0.032) when the prediction was based on a general forage equation of OMS. However, regenerating a simple regression for iNDF by omitting alfalfa and wheat straw reduced the root mean square error of OMD to 0.025. Indigestible NDF in a general forage equation predicted OMD without any bias (P ≥ 0.16), and root mean square error of prediction was smallest among all methods when alfalfa and wheat straw samples were excluded. Our study suggests that compared with the in vitro laboratory methods, iNDF used in forage-specific equations will improve overall predictions of forage in vivo OMD. The in vitro and in situ methods performed equally well in calibrations of iNDF or OMD by near-infrared reflectance spectroscopy.     

Metabolism of carbohydrate in alimentary tract of reindeer in winter

The study was conducted on six reindeers in December. It was established that concentration of reducing sugars in the chyme of jejunum increases substantially (6 times in comparison with abomasum), whereas concentration cellulose, on the contrary, decreases (4.5 times). The maximal increase of monosaccharides in the small intestine testifies to formation of metabolic fund of sugars in this part of the alimentary tract due to high degree of polysaccharides hydrolysis of exogenous, as well as endogenous, microbial formation. Obtained data assume that the need of the reindeer for glucose is provided for not only by gluconeogenesis as it was considered before, but also by absorption of monosaccharides from the alimentary tract.     

细胞因子在禽传染病防治中的应用

细胞因子是一类小分子多肽,通过自分泌和旁分泌传递细胞应答.细胞因子间复杂的相互作用控制着为保护机体免受病原体侵害而发生的炎症反应和特异性免疫应答,它是启动和维持机体防御功能的调节器,最终决定传递性应答反应类型和作用机制,作为效应分子暂时的、局部的来控制反应的发生范围和持续时间.文章介绍了细胞因子在禽传染病防治中的应用.     

中国野生动物驯养与繁殖法律制度的缺陷与完善

野生动物驯养繁殖在世界野生动物资源保护中具有重要作用，有关野生动物驯养繁殖的法律制度也成为各国野生动物资源保护立法的主要内容。本文针对目前中国野生动物驯养繁殖的立法现状与存在问题，提出完善中国野生动物驯养繁殖的国内法对策，以推进中国野生动物资源保护立法的发展。     

湖南山羊附红细胞体病的感染调查

对湖南省2个规模化山羊养殖场进行附红细胞体病的感染调查,结果表明:山羊附红细胞体总感染率为51.4%,其中A场感染率为53.4%,B场感染率为0。将镜检阳性山羊血液人工感染小白鼠,10d后小白鼠体内出现附红细胞体。     

昆明小鼠卵母细胞体外成熟培养条件优化

对不同的培养液（M199、mDPBS、TYH）和培养液添加物对小鼠C级卵母细胞体外发育和成熟的影响进行了研究。结果表明,mDPBS培养液的培养效果（GVBD：19．8％,PBI：12．3％）好于（P〈0．05）M199培养液（GVBD：13．3％,PBI：8．9％）和TYH培养液（GVBD：12．3％,PBI：7．4％）;mDPBS中添加丙酮酸钠和FCS（GVBD：100％,PBI：86．3％）明显优于（P〈0.01）单纯添加丙酮酸钠（GVBD：42．9％,PBI：23．8％）,也明显优于（P〈0．01）添加丙酮酸钠＋BSA（GVBD：63．2％,PBI：53．8％）;就A、B和C级3种卵母细胞相比,C级卵母细胞的成熟发育最佳,GVBD的发生率为100．0％,PBI的排出率为86．2％。     

精原干细胞体外培养研究进展

精原干细胞（SSCs）是指位于睾丸生精小管基膜上既能自我更新维持自身群体数量恒定,又能定向分化形成精母细胞,最终形成精子的一类原始干细胞。其体外培养以及近年来兴起的移植、基因转染的深入研究,为探讨精子的发生机制、重建不育个体的精子发生、生产转基因动物提供了新的途径。文章综述了精原干细胞体外培养的研究现状,并对其体外的纯化、鉴定,以及未来的应用进行了介绍,旨在为精原干细胞的研究提供借鉴。     

PACS法在鸡基因差异表达中的应用

利用PACS(preferential amplification of cod ing sequence)法鉴别鸡中的差异表达基因。结果表明,该方法具有操作简单、假阳性率低、能选择性扩增mRNA编码区等优点,可作为禽类基因差异表达研究中的首选方法。     

大庆市羊东毕吸虫病流行病学调查

对大庆市羊东毕吸虫病的流行病学进行了调查研究。结果表明，大庆有3种东毕吸虫，即程氏东毕吸虫（O.cheni)、土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica)和土耳斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanican var.thuberculata)；中间宿主螺类有1种，即卵萝卜螺；东毕吸虫病在大庆分布很广，所调查的4区2县均有发生，羊东毕吸虫平均感染率分别为50．33％，平均死亡率为21．12％，大庆羊急性病例发病时间为8月上旬至10月下旬，慢性病例为11月上旬至翌年2月中旬。