超高效液相色谱-串联质谱法检测饲料中黄曲霉毒素B_1的比较研究

利用免疫亲和柱的方法对饲料中黄曲霉毒素B_1进行检测。饲料样品经70%甲醇水提取后,用水稀释,过黄曲霉毒素B_1免疫亲和柱、甲醇洗脱、去离子水稀释洗脱溶液,在超高效液相色谱串联质谱仪上进行检测。结果表明:黄曲霉毒素B_1,在2~20μg/kg上呈良好的线性关系,R~20.999;饲料黄曲霉毒素B_1添加浓度在2~20μg/kg上,回收率范围为83.50%~92.40%,RSD值小于2.0%,并用所建方法同标准NY/T 2071—2011的方法进行样品处理对比分析,从而为饲料中黄曲霉毒素B_1检测方法提供更多的选择。     

饲料中黄曲霉毒素检测及其对牛奶品质的影响

黄曲霉毒素是一种霉菌产生的毒素，易存在各类饲料和食品中。本研究采用免疫亲和柱-荧光光度法对牛奶中的黄曲霉毒素M1进行测定，而饲料中的黄曲霉毒素B1采用酶联免疫法检测，研究结果发现：本实验中的黄曲霉毒素M1的荧光光度计的最佳光谱发射波长为450 nm，分析阴性牛奶产品的黄曲霉毒素M1含量，确定数据的精确性，牛奶回收率为76.67%～93.33%，变异系数为0.45%～2.8%，满足我国制定的检测标准，该方法操作简单、快速和安全。奶牛饲料中青绿饲料、粗饲料、能量饲料和蛋白饲料样品的黄曲霉毒素B1的测定率为100%，奶牛饲料中被检测的青绿饲料、粗饲料、能量饲料和蛋白质饲料阳性样品中黄曲霉毒素B1的含量分别为11.45、4.25、5.24和7.58 μg/kg，均小于20μg/kg（国家卫生部门制定标准），属于轻度污染|不同类型牛奶样品中阳性最高值为0.201 μg/kg，阳性最低值为0.004 μg/kg，平均值最大为0.084 μg/kg，严重超过我国卫生部门制定的标准。 [关键词]饲料|黄曲霉毒素|牛奶品质     

免疫亲和柱荧光光度法和高效液相色谱法测定饲料中黄曲霉毒素

利用免疫亲和柱荧光光度法和高效液相色谱法测定饲料中黄曲霉毒素。免疫亲和柱—荧光光度法测定饲料中的黄曲霉毒素的测定范围0～50μg/kg;线性相关系数0.99;检测灵敏度1μg/kg;变异系数<18%;回收率82%～120%;分析时间20min,不需要剧毒的黄曲霉毒素标准品。免疫亲和柱-高效液相色谱法测定可以分别定量地检测饲料中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,在黄曲霉毒素B1为0～50μg/kg测定范围内其线性相关系数0.91;检测灵敏度1μg/kg;变异系数<10%;回收率81%～110%。     

蒙牛奶被查出强致癌物

2011年年12月24日,在国家质检总局公布的液体乳产品质量的抽查结果中,发现蒙牛、长富纯2种产品黄曲霉毒素M1项目不符合标准的规定,其中蒙牛乳业(眉山)有限公司的纯牛奶,黄曲霉毒素M1值为1.2μg/kg,福建长富乳品有限公司的长富纯牛奶(精品奶)黄曲霉毒素M1值为0.9μg/kg——标准值为≤0.5μg/kg,国内外相同。     

稳定同位素稀释-UPLC-MS/MS法测定饲料中4种黄曲霉毒素

建立饲料中4种黄曲霉毒素的稳定同位素稀释-超高液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)的检测方法。饲料样品加入同位素内标后,经乙腈-水(8416,v/v)超声提取后,用多功能净化柱净化。净化液经C18色谱柱分离,甲醇-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,超高液相色谱串联质谱法多反应离子监测(MRM)方式检测,基质匹配内标法定量。结果表明,4种黄曲霉毒素的相关系数均大于0.999 0。方法的检出限为0.015～0.025μg/kg,空白饲料样品中3个不同浓度的添加回收率为76.19%～102.29%,RSD在1.91%～10.12%之间。该方法样品前处理简单快速、稳定同位素稀释校正了前处理过程的损失和基质效应,适合饲料中4种黄曲霉毒素的同时快速测定。     

免疫亲和-光化学柱后衍生高效液相色谱荧光法测定花生粕中黄曲霉毒素的研究

研究建立了光化学柱后衍生-高效液相色谱(HPLC)-荧光检测器测定花生粕中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的方法。甲醇/水提取样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,Afla-P黄曲霉毒素免疫亲和柱净化,经高效液相色谱分离后,由光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定。结果表明:在优化条件下,黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检出限分别为1.0、0.3、1.0μg/kg和0.3μg/kg,回收率为67.0%～117%,相对标准偏差(RSD)低于18.2%。该方法简便快速、灵敏度高、重现性好,满足饲料用花生粕中黄曲霉毒素检测的需要。     

浓缩饲料中霉菌总数及霉菌毒素含量变化的研究

采用模拟饲料标准及高温、高湿贮存条件的方法,比较其霉菌总数、主要产毒菌的种类、黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A含量的变化情况。将饲料在设定条件下存放8周,利用国标检测方法每周检测一次,结果表明:肥育猪用浓缩料在相对湿度<67%、温度(22±2)℃的标准贮存条件下,两个月内霉菌总数及毒素含量变化较小,饲料在相对湿度为(80±2)%、温度为(30±2)℃的高温、高湿条件下存放14d,霉菌总数为7.7×105cfu/g,超过国家饲料卫生标准1×105cfu/g,主要产毒菌种类有黄曲霉、寄生曲霉、绿青霉;饲料存放35d,黄曲霉毒素B1含量为20.8μg/kg,超过浓缩料毒素限量标准20μg/kg;存放56d,赭曲霉毒素含量为52.1μg/kg,未超过标准限量100μg/kg;且赭曲霉增长速度比黄曲霉增长速度快。     

认识并远离黄曲霉毒素

1993年,WHO癌症研究机构划定黄曲霉毒素为I类致癌物。2011年12月24日,国家质监总局公布蒙牛乳业(眉山)有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%,国标限值0.5μg/kg,实测值1.2μg/kg。12月27日在植物油产品中,广东省有3个产品的部分批次抽检因黄曲霉     

河南省牧场生鲜乳中黄曲霉毒素M_1本底含量的研究分析

为了全面掌握河南省牧场生鲜乳中黄曲霉毒素M_1含量总体状况,选取河南省具有代表性的45家牧场,用液相色谱串联质谱法对牧场生鲜乳大罐样中黄曲霉毒素M_1残留进行测定,确定其大致范围。结果表明:被检测的45家牧场生鲜乳中黄曲霉毒素M1含量大致范围为0~0.124μg/kg,平均值为0.039μg/kg,多数牧场生鲜乳黄曲霉毒素M_1含量集中在0.02~0.06μg/kg。由于目前国家标准规定生鲜乳中黄曲霉毒素M1最大残留量为0.5μg/kg,本试验数据说明河南省牧场生鲜乳中黄曲霉毒素M1含量均符合国家规定,但个别牧场生鲜乳中黄曲霉素M_1含量稍高。本研究可为河南省生鲜乳中黄曲霉毒素M_1含量的安全性研究提供基础数据,为牧场生鲜乳生产环节及时调整防护措施提供参考,同时也为消费者提供相关信息。     

黄曲霉毒素解毒酶对岭南黄肉仔鸡日粮中黄曲霉毒素B1解毒效果的研究

本文通过测定岭南黄肉仔鸡生长性能和血清指标及对肝脏组织切片的观察,旨在探讨黄曲霉毒素解毒酶对黄曲霉毒素B1(AFB1)的解毒作用.选用1日龄健康岭南黄肉仔鸡420羽,随机分为7个处理,每个处理4个重复,每个重复15羽,雄鸡10羽,雌鸡5羽.7个处理分别为基础日粮组、基础日粮+100 μg/kg AFBi组、基础日粮+100μg/kg AFB1+0.1%解毒酶组、基础日粮+100 μg/kg AFB1+0.2%解毒酶组、基础日粮+100μg/kg AFB1+0.3%解毒酶组、基础日粮+100μg/kg AFB1+0.4%解毒酶组、基础日粮+100μg/kg AFB1+0.5%解毒酶组,试验期42 d.结果表明:1)基础日粮中加入100μg/kg AFBi,肉仔鸡的平均日采食量、平均日增重和平均末重有所下降(P>0.05);血清中总蛋白(P<0.05),白蛋白(P>0.05)和球蛋白(P<0.05)含量下降,谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性升高(P<0.05);肝脏组织病理切片观察到肝细胞广泛性坏死,胆管异常增生;2)在100μg/kg AFB1日粮中加入黄曲霉毒素解毒酶,能一定程度的改善肉仔鸡的平均日采食量、平均日增重和平均末重(P>0.05),0.2%、0.4%和0.5%的水平能显著降低毒素在肝脏和血液中的残留(P<0.05),减弱毒素对肝脏的损伤,一定程度地改善血清学指标.由此可知,黄曲霉毒素解毒酶能有效保护肉仔鸡肝脏,减轻或基本消除AFB1对肉仔鸡组织器官的不良影响,一定程度的提高肉仔鸡的平均日采食量和日增重.     

超高效液相色谱串联飞行时间质谱法检测黑水虻产品中黄曲霉毒素B1

本研究建立了黑水虻产品中黄曲霉毒素B1(AFB1)的超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱测定方法,对黑水虻幼虫粉中AFB1的提取、超高效液相色谱串联质谱检测条件进行了优化。使用甲醇-水溶液(8:2,体积比),添加7%氯化钠对黑水虻幼虫粉中AFB1进行提取,免疫亲和柱净化,甲醇-乙酸铵(10 mmol/L)水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测,7.0 min出峰。结果表明:AFB1在1~20μg/kg浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.999,幼虫粉回收率为83.1%~118.3%,相对标准偏差(RSD)为6%~10%;虫粪回收率为76.6%~114.1%,相对标准偏差(RSD)为0~3%;检出限(LOD,S/N≥3)为0.01μg/kg,定量限(LOQ,S/N≥10)为0.05μg/kg。该方法操作简单、结果准确,可以用于黑水虻幼虫粉和虫粪产品中AFB1的检测。     

高效液相色谱法测定乳品与饲料中阿维菌素类药物残留

建立乳品与饲料中阿维菌素类药物(埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素)残留液相色谱的测定方法。乙腈为提取剂,tC18固相萃取小柱净化,三氟乙酸酐和N-甲基咪唑柱前衍生,C18柱分离,甲醇-乙腈的混合溶剂与水梯度洗脱,液相色谱仪荧光检测器检测,外标法定量。每1 000 g乳粉(或每1 000 mL液态乳)中阿维菌素添加量为1.5 μg时,回收率大于95％。本方法液态乳、酸乳、乳粉的定量限为2μg/kg,饲料的定量限为10 μg/kg。该方法具有结果准确、操作简便、重复性好等优点,可用于乳品和饲料中阿维菌素类药物残留的检测。     

鸡组织中磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶残留的HPLC-MS/MS测定

建立了同时测定鸡组织中残留的磺胺对甲氧嘧啶(SMD)和二甲氧苄啶(DVD)了的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)。样品经乙腈提取,取部分提取液用正己烷脱脂后于氮气吹干,残渣用流动相溶解并定容后上机检测,外标法定量。采用C18色谱柱,流动相为乙腈和1mL/L甲酸水溶液。选择1个母离子和2个子离子进行反应监测,对磺胺对甲氧嘧啶和二甲氧苄啶残留进行定性,选择信号最强的子离子进行定量。结果显示,SMD和DVD分别在1ng/mL~200ng/mL和0.5ng/mL~100ng/mL范围内呈良好线性关系,相关系数R20.992。通过空白样品添加回收试验,所有基质中SMD和DVD的定量限分别为10μg/kg和5μg/kg,SMD和DVD分别在50、100、200μg/kg和25、50、100μg/kg 3个添加水平下的回收率为71.7%~115.0%,相对标准偏差为1.8%~13.2%,该方法定量限低,灵敏度高,重现性好,符合相关研究的要求。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测猪尿中20种β-受体激动剂残留

建立了猪尿中吡布特罗、西马特罗、特步他林等20种β-受体激动剂残留检测的超高效液相色谱一串联质谱方法。猪尿样品经酶解后,调节pH值至碱性,用叔丁醇和叔丁基甲醚（6＋4,V／V）萃取,MCX柱净化,以0．1％甲酸乙腈溶液和0．1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。同位素内标法和外标法定量。20种β-受体激动剂在系列浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数1．2均大于0．99;20种药物在猪尿中的检测限为0．25μg/L,定量限为0．5μg／L。从0．5、1和5μg／L三个添加浓度检测结果可以看出,20种药物的回收率为75．7％～110．7％,批内批间相对杯准偏差均小于20％。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

高效液相色谱法测定饲料中黄曲霉毒素含量的研究

旨在建立检测饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的高效液相色谱分析方法。样品用甲醇溶液提取,利用免疫亲和柱净化,以C18反相色谱柱分离,光化学衍生器衍生后应用荧光检测器检测。结果表明:4种黄曲霉毒素在0.5~20ng/mL范围内呈现良好的线性关系,回收率为71.6%~89.0%。采用该方法检测5种饲料样品中的黄曲霉毒素总量,检出率范围在74.0%~86.7%,检出值的范围为0.5~4.3μg/kg。建立的方法精密度高、重复性好,为监测饲料中黄曲霉毒素含量水平提供了有效的分析方法。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中巴喹普林残留

建立了猪肉中巴喹普林药物残留的超高效液相色谱一串联质谱测定方法,样品用乙酸乙酯提取,吹干后用60％乙腈水（0．1％甲酸）溶解,供液相色谱一串联质谱法分析,内标法定量。结果表明：巴喹普林标准溶液在100～800μg／L范围内呈现良好线性,r2均大于0．998;方法检出限为5μg／kg,定量限为10μg／kg;巴喹普林在10～80μg／kg添加范围内的平均回收率为90．8％-108％,批内、批间RSD均小于6．9％。该方法简便快捷、灵敏度高、定性准确,能满足食品安全检测右吴浩妾田．的霉求．     

猪鸡组织中左旋咪唑残留的HPLC检测方法研究

建立了猪、鸡组织中左旋咪唑残留检测的高效液相色谱法。组织试样在碱性条件下先用乙酸乙酯提取,然后用0.1 mol/L盐酸反萃取,萃取的样液用混合型阳离子固相萃取小柱净化,采用C18(5μm,250 mm×4.6 mm i.d.)色谱柱,用高效液相色谱仪(带紫外检测器)在220 nm波长处测定,外标法定量。在此条件下,左旋咪唑的保留时间为12～14 min。左旋咪唑浓度在10～1 000μg/L时,与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为y=196.37x+81.599(r=0.999 9)。结果表明,左旋咪唑在在猪、鸡的肌肉、脂肪和肾脏中的检测限为2μg/kg,定量限为5μg/kg;在猪、鸡的肝脏中的检测限为2μg/kg,定量限为10μg/kg。在添加不同浓度水平测定下,平均回收率在70%～110%,批内变异系数在10%以内,批间变异系数在15%以内。     

猪排泄物中恩诺沙星和环丙沙星含量的HPLC检测方法

为了对猪排泄物中恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)和环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)进行定量检测,试验建立了测定猪粪尿中ENR和CIP含量的高效液相－荧光检测方法。将猪粪经乙腈－氨水超声提取后,加入三氯乙酸酸化,然后分别将经磷酸酸化后的猪尿和提取后的猪粪溶液经固相萃取小柱富集净化,取净化液进行HPLC分析。HPLC流动相为乙腈(A):柠檬酸/乙酸铵缓冲液(B),梯度洗脱:0~25 min,A 10%~40%;25~30 min,A 40%至10%,荧光检测器的激发波长278 nm,发射波长465 nm。结果表明,ENR和CIP 在尿中的最低检测限(LOD)<0.01 mg/L,在粪中的LOD<0.021 mg/kg,在尿中的最低检测限(LOQ)<0.03 mg/L,在粪中LOQ<0.056 mg/kg,猪尿中的ENR和CIP在0.01~1.0 mg/mL范围内线性关系良好,R²分别为0.9994和0.9992;猪粪中的ENR和CIP在0.02~2.0 mg/mL范围内线性关系良好,R²分别为0.9986和0.9981。ENR在猪粪和猪尿中的回收率分别为79.4%和88.5%,CIP在猪粪和猪尿中的回收率分别为75.8%和89.9%。该方法样品处理简单,检测结果准确可靠,且灵敏度较高,是值得推广的检测方法。     

MECC-DAD和HPLC-FLD测定牛乳中5种黄曲霉毒素的方法比较研究

建立高效胶束电动毛细管色谱耦合二极管阵列检测器（micellar electrokinetic capillary chromatographydiode array detector,MECC-DAD）检测牛乳中痕量黄曲霉毒素的新方法,采用高效液相色谱-荧光检测器（high performance liquid chromatography-fluorescence detector,HPLC-FLD）法及MECC-DAD法检测牛乳样品中5 种黄曲霉毒素的残留量,考察2 种检测技术的特异性。牛乳样品经免疫亲和柱净化后,MECC-DAD法采用未涂层熔融石英毛细管柱进行分离,以7.5 mmol/L四硼酸钠、30 mmol/L十二烷基磺酸钠及体积分数5%乙腈体积比1∶1∶1的混合液（pH 8.5）为缓冲液,检测波长为214 nm;HPLC-FLD法采用C18柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）进行分离,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,荧光检测器激发波长360 nm、发射波长440 nm。结果表明：MECC-DAD法的色谱图峰形更对称、平滑、尖锐,无拖尾现象;MECC-DAD和HPLC-FLD法的检出限分别为0.182～1.669、0.014～0.058 μg/L,MECC-DAD法的检出限虽高于HPLC-FLD法,但也能满足牛乳中黄曲霉毒素的测定要求;HPLC-FLD法的精密度稍高于MECC-DAD法;MECC-DAD法的加标回收率为80.3%～137.0%,HPLC-FLD法的加标回收率为79.6%～134.0%,二者相当;2 种方法对市售牛乳样品的定量检测结果偏差为P＝0.900＞0.05,没有显著性差异。MECC-DAD法分离快速、高效、经济,更适合牛乳样品中黄曲霉毒素残留量的检测。     

Method for Determination of Enrofloxacin and Ciprofloxacin in Pig Excreta by HPLC

A HPLC-FLD method was developed for determination of enrofloxacin (ENR) and ciprofloxacin (CIP) levels in feces and urine of pig.The pig feces was ultrasonic extracted by acetonitrile-ammonia, then added trichloroacetic acid to make the extraction acidification.The pig urine was acidulated by phosphoric acid and the extraction of feces solution were enriched and purified by solid phase extraction small column, took purification liquid for HPLC analysis.Conditions of HPLC mobile phase was acetonitrile (A):citric acid/ammonium acetate buffer (B), the procedure of gradient elution was 0 to 25 min, A:10% to 40%;25 to 30 min, A:40% to 10%.The detector of fluorescence excitation wavelength was 278 nm, emission wavelength was 465 nm, chromatographic data were measured and recorded.The results showed that the LOD of ENR and CIP were lower than 0.01 mg/L in urine and 0.021 mg/kg in feces, the LOQ of ENR and CIP were lower than 0.03 mg/L in urine and 0.056 mg/kg in feces.ENR and CIP in the concentration of 0.01 to 1.0 mg/mL levels range had good linear relationship, R² were 0.9994 and 0.9992 in pig urine, respectively;ENR and CIP in the concentration of 0.02 to 2.0 mg/mL levels range had good linear relationship, R² were 0.9986 and 0.9981 in pig feces, respectively.The recovery ratio of ENR were 79.4% and 88.5%, and the recovery ratio of CIP were 75.8% and 89.9% in pig feces and urine.After get on validation, the method was easy in sample processing and testing, the results were accurate, reliable and high sensitivity, which was a worth promoting detection method.