猪孤雌激活4-细胞胚胎玻璃化冷冻保存效果的研究

本实验旨在研究猪孤雌激活4-细胞胚胎的冷冻保存效果。胚胎采用Cryotop法进行玻璃化冷冻保存,解冻后分析其存活率、胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)水平、囊胚发育率及囊胚质量。结果表明:冷冻胚胎体外恢复2 h的存活率与新鲜胚胎无明显差异(100%vs.96.8%,P0.05),但当其培养时间达到24 h时,存活率显著下降至88.3%(P0.05)。另外,玻璃化冷冻导致胚胎内ROS水平显著升高(P0.05),GSH水平显著下降(P0.05)。与新鲜胚胎相比,冷冻胚胎获得的囊胚发育率明显降低(59.8%vs.26.4%,P0.05),但囊胚的凋亡细胞率、内细胞团数、滋养层细胞数及总细胞数均无明显差异(P0.05)。结果显示,玻璃化冷冻猪孤雌激活4-细胞胚胎导致其存活、氧化还原能力和囊胚发育下降,但仍能获得较高质量的囊胚。     

PGM-CSF对手工克隆猪生产效率的影响

为了优化猪的手工克隆技术方案,从而提高猪手工克隆效率,通过比较不同浓度(2和10 ng/m L)的猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(PGM-CSF)对孤雌胚胎和克隆胚胎的囊胚发育率及囊胚细胞数的影响,并将PGM-CSF处理过的手工克隆囊胚进行移植,比较对照组和试验组的妊娠率、产仔率及克隆整体效率。结果显示:用10 ng/m L PGM-CSF处理重构胚后,试验组胚胎细胞数统计略高于对照组((47.74±3.88)vs(43.69±3.72)),囊胚率高于对照组((39.10±0.01)%vs(36.27±0.02)%),但差异均不显著(P0.05);试验组10只受体中有5只怀孕且分娩,而对照组10只受体只有1只怀孕且分娩;试验组出生仔猪存活率略高于对照组(36.36%vs 30.00%),克隆总效率略高于对照组(0.37%vs 0.30%),但没有显著差异(P0.05)。综上所述,PGM-CSF有利于提高猪手工克隆胚胎整体发育能力,有提高猪手工克隆对受体的利用率的潜在可能性。     

精子不同处理和胰岛素不同浓度对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精的影响

探讨了分别使用新鲜、冷冻和超声波断尾精子以及在胚胎培养液中分别添加不同浓度胰岛素对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精(ICSI)胚胎早期发育的影响.结果:(1)使用冷冻解冻精子与新鲜精子相比对猪卵母细胞ICSI后的卵裂率和囊胚率均无显著影响(P＞0.05);2)精子断尾与否对猪卵母细胞ICSI后的分裂率和囊胚率没有显著影响(P＞0.05);3)在胚胎培养液中添加5 mg/L胰岛素与对照组相比可显著提高猪ICSI胚胎的囊胚发育率(18.22% vs 3.60%,P＜0.05).     

黑萨福克和杜泊羊新鲜和冷冻胚胎移植效率的研究

为提高优质肉用种用绵羊胚胎移植的效率,试验选取76只黑萨福克羊和27只杜泊羊作为供体,采用"CIDR+FSH+PMSG"法进行超数排卵处理。选取384只小尾寒羊为受体,采用"CIDR+PMSG"法进行同期发情处理,以探索供体胚胎发育阶段、胚胎冷冻处理、胚胎体外停留时间以及移植给受体时移植侧黄体数量等因素对胚胎移植妊娠率的影响。结果表明:移植新鲜囊胚的妊娠率极显著高于桑椹胚(P0.01);冷冻/解冻囊胚移植妊娠率极显著低于新鲜囊胚(P0.01),而冷冻/解冻桑椹胚移植妊娠率与新鲜桑椹胚无显著差异(P0.05);此外,移植桑椹胚时,移植侧有1个黄体的受体妊娠率极显著低于有2~3个黄体受体妊娠率(P0.01),但移植囊胚时两者间差异不显著(P0.05)。综上可知,子宫角移植桑椹胚和囊胚时,移植新鲜囊胚、移植冷冻桑椹胚效率较高;将新鲜桑椹胚移植给移植侧有2~3个黄体受体效果好于1个黄体受体。     

黑头萨福克绵羊胚胎玻璃化快速冻胚移植效果分析

本试验应用玻璃化胚胎冷冻方法进行黑头萨福克绵羊胚胎冷冻和移植,比较了受体羊卵巢上黄体数量、受体羊的体况、移植胚胎的数量对受体受胎率的影响。受体羊卵巢上有一个黄体的移植受胎率42.7%与有2~3个黄体受体羊移植受胎率44.4%无显著差异;受体的体况对受胎率有显著影响,中上等(含中等)体况水平的受体的受胎率47.2%显著高于中下等的受体的受胎率43.0%(P0.05);使用玻璃化胚胎冷冻法的冷冻解冻胚胎移植受胎率54.2%显著高于常规胚胎冷冻法的冻胚移植受胎率44.0%(P0.05);移植1枚桑葚胚(1M)的受胎率47.5%略高于移植1枚囊胚(1B)的受胎率44.3%(P0.05)。因此,受体羊黄体数、冷冻桑葚胚和囊胚对胚胎移植受胎率没有显著影响,而受体中上等(含中等)体况水平和玻璃化胚胎冷冻法冷冻解冻胚胎移植受胎率显著提高。     

黄芩苷、川芎嗪对小鼠体外培养胚胎冷冻-解冻及移植效果的研究

将中药有效成分黄芩苷(Baicalin,Bai)和川芎嗪(Ligustrazine,Lig)添加到小鼠2-细胞胚胎培养液中进行体外培养,比较其体外发育能力,并将体外发育的桑椹胚、囊胚进行2种程序常规冷冻.解冻后形态正常的桑椹胚、囊胚分别培养8～14 h、6～8 h,比较各组胚胎的冷冻-解冻发育效果及冷冻胚胎移植妊娠率和产仔率等.结果各试验组胚胎孵化率,Bai组(80.6%)、Lig组(78.3%)极显著高于对照组(51.8%)(P＜0.01).孵化胚胎细胞计数结果显示, Bai组(81.9±6.2)和Lig组(83.9±7.7)与对照组(77.4±5.6)差异极显著(P＜0.01);程序1和2的桑椹胚解冻囊胚发育率,以Bai、Lig组显著高于对照组;其囊胚解冻存活率,2个试验组均好于对照组.受体妊娠率、产仔率以及初生仔鼠、离窝仔鼠平均体重、离窝成活率等指标,各组间均无显著差异(P＞0.05),但以中药有效成分各组别均好于对照组.结果表明中药有效成分Bai和Lig能显著地提高小鼠 2-细胞胚胎体外发育能力,并有利于提高冷冻-解冻后移植胚胎的发育潜力.     

细胞松弛素B对猪孤雌胚胎和体外克隆胚胎发育能力的影响

为探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对猪孤雌胚胎和克隆胚胎发育能力的影响,本研究通过在猪体外胚胎培养基中添加不同浓度CB以及不同孵育时间的处理,筛选出CB对猪早期胚胎发育的最适浓度和最佳孵育时间,同时通过Hoechst33342染色检测猪体外囊胚孵化期的细胞数差异,进一步研究CB对孤雌胚胎和克隆胚胎发育的影响。结果显示,培养基中添加CB浓度为7.5μg/mL时孤雌胚胎和克隆胚胎的卵裂率分别为85.00%和90.23%,囊胚率为35.68%和42.58%,均显著高于其他各组(P0.05);采用7.5μg/mL CB处理电激活后的孤雌胚胎和克隆胚胎,孤雌胚胎孵育4 h组的卵裂率(83.80%)和囊胚率最高(35.39%),与其他各组差异显著(P0.05),而克隆胚胎孵育6 h组的卵裂率(83.98%)和囊胚率最高(55.62%),与其他各组差异显著(P0.05)。此外,Hoechst33342染色结果显示,未添加CB处理的孤雌胚胎在囊胚孵化期的细胞平均数为28个,CB处理组的孤雌胚胎和克隆胚胎细胞平均数分别为36和52个,处理组和未处理组细胞数差异显著(P0.05)。结果表明,猪体外孤雌胚胎用7.5μg/mL CB处理4 h可获得较高的卵裂率和囊胚率;体外克隆胚胎用7.5μg/mL CB处理6 h卵裂率及囊胚率最高,且囊胚期内细胞团细胞总数最多。CB处理有利于体外胚胎早期发育,提高克隆胚胎移植受孕率。     

影响牛胚胎移植妊娠率的因素分析

统计分析了河北省2007～2009年度胚胎移植妊娠情况。结果表明:1)胚胎级别对妊娠率有显著影响(43.02%∶36.65%,P0.01);2)胚胎不同发育阶段对妊娠率没有显著影响,但早期囊胚妊娠率为44.34%,高于其他组(P0.05);3)胚胎冷冻(59.38%∶50.00%)与胚胎取样(54.69%∶51.35%)对胚胎的妊娠率均有一定的影响,但差异均不显著(P0.05);4)春季和冬季的妊娠率为36.42%和37.74%,显著低于夏季移植妊娠率45.82%(P0.05)与秋季无显著差异(P0.05)。夏季和秋季胚胎移植妊娠率差异不显著(45.82%∶42.60%,P0.05);5)受体牛营养状况对移植妊娠率影响显著(P0.01)。     

小鼠囊胚和扩张囊胚玻璃化冷冻保存的研究

以6M甘油+6.5%PVP(V1)和8MEG+7%PVP(V2)为玻璃化溶液,采用细管法和OPS一步法对小鼠囊胚进行冷冻.结果表明:胚胎在玻璃化溶液中平衡20S显著高于平衡60S后的存活率(P＜0.05);蔗糖四步法解冻后的发育率与蔗糖三步法冷冻解冻后的发育率差异不显著(P＞0.05);用OPS三步法冷冻后(V2)的小鼠囊胚的体外发育率显著高于细管法和OPS一步法冷冻后的发育率(P＜0.01);在OPS三步法冷冻过程中,平衡时间对胚胎冷冻后的发育率有一定的影响.     

波尔山羊胚胎移植影响因素的研究

试验就胚胎的发育阶段、胚胎保存时间及移植胚胎数等因素对胚胎移植效果的影响情况进行了研究.结果表明,胚胎发育日龄对受体妊娠率没有显著影响(P＞0.05),但移植8～16细胞的胚胎的妊娠率略高于2～4细胞(58.49% vs 61.47%).人员不是影响受体妊娠率的主要因素.胚胎在体外保存0～120 min对妊娠率没有显著影响,但以在体外保存0～30 min内移植的妊娠率最高(65.61%).黄体与移植胚胎的相对位置对受体的妊娠率没有显著影响(P＞0.05),但移植双胚的受体的妊娠率较移植单胚高(61.76% vs 45.17%).同时,试验统计了经胚胎移植产生的羔羊和自然繁殖羔羊之间的差异,发现经胚胎移植产生的波尔山羊母羔的初生重极显著地高于自然繁殖的母羔(P＜0.01),但公羔间的初生重以及公、母羔间的体高、体长、胸围、死亡率和性别比例与自然繁殖羔羊差异不显著(P＞0.05).