分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，应用杂交瘤技术获得了分泌抗ＲＨＤＶ单抗杂交瘤细胞１７株，其中有３株杂交瘤细胞分泌单抗的ＥＬＩＳＡ效价为１：４０９６００，１：４０９６；５株单抗具有血凝抑制活性。兔抗ＲＨＤＶ高兔血清对１７株ＭｃＡｂ的ＥＬＩＳＡ抑株为ＩｇＧ２ｂ。各株ＭｃＡｂ与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应，也无沉淀反应特性。     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的蓝舌病病毒（ＢＴＶ）１１型ＶＰ７免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,动用淋巴细胞杂交瘤技术,借助间接ＥＬＩＳＡ筛选,获得了３株分泌抗ＢＴＶ１１ ＶＰ７的群特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株,命名为Ｃ１２Ｄ９、Ｂ４Ｆ３、Ｅ１Ａ７。这３株杂交瘤细胞株连续传代３个月再经液氮冻存６个月后复苏培养,仍能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。３株ＭｃＡｂ均具有ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性,其中Ｃ１２Ｄ９株上清液的ＥＬＩＳ     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

抗牛病毒性腹泻/粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）,通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ＥＬＩＳＡ效价为１∶３×１０５,蛋白含量为３．９６ｇ／Ｌ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ进行筛选,共检出３８个阳性孔,阳性率为２８．８％。对其中１５个阳性值较高的孔进行３次再克隆,阳性率达１００％,最后获得１５株稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单抗（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶１０３～１∶１０６和１∶１２８～１∶５１２。经鉴定,１５株ＭｃＡｂ的分子类型均为ＩｇＧ,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为９０～１１０,平均９５。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对ＰＥＤＶ具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。     

禽病原性大肠杆菌I型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测

从禽病原性大肠杆菌分离株ＴＫ３（Ｏ１）提取Ｉ型菌毛免疫ＢＡＩＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得４株能稳定分泌针对Ｉ型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为ａＢ６、ｂＧ５、ｃＦ３和ｃＧ３。单克隆阻断甘露糖敏血凝试验,免疫胶体金和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验证明,单抗是Ｉ型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的ＥＬＩＳＡ效价为分别为１０＾－２～１０＾－３和１０＾－５～１０＾－６;腹水的平     

抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体（ＭＯ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株．以有限稀释法克隆１～２次，得到６株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株．选择抗体分泌较高的１４Ａ６、７Ａ２７、Ｂ３８进行了较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９４～９６．抗体属性是：１株为ＩｇＧ２ａ、２株为ＩｇＧ１．用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ作符异性分析、该ＭｃＡｂ只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应，而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应．将杂交瘤细胞注射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水．其抗体效价提高１００倍．杂交瘤细胞在液氮中保存１～２年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体ＭｃＡｂ。