我国进口种鸡群禽白血病及禽网状内皮组织增生症的血清学检测

为了解河北进口种鸡群禽白血病病毒(ALV)及禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的感染情况,对实验室留存的2011—2013年间来自美国、加拿大和法国的15批进口种鸡的血清样品450份,通过ELISA方法进行ALV-A、B亚群和REV的抗体检测。结果共有8批28份样品为ALV-A、B亚群抗体阳性,群体阳性率和个体阳性率分别为53.3%和6.2%;未检出REV抗体阳性样品。结果表明目前我国进口种鸡群中存在一定比例的禽白血病病毒A、B亚群抗体阳性个体。     

我国白羽肉用型鸡群中CAV、REV和REOV感染状况的血清学调查

为了解鸡传染性贫血病毒（CAV）、禽网状内皮增生病病毒（REV）和呼肠孤病毒（REOV）在我国白羽肉用型鸡中的感染状态，在2003—2004年，检测了来自5省市8个公司不同年龄鸡群血清样品中3种病毒抗体的存在状况。结果表明，在送检的75个鸡群中，对CAV、REV和REOV呈现抗体阳性的鸡群分别有64个（85．3％）、36个（48％）和74个（96％）。在总共检测的1764份血清样品中，对这3种病毒的平均抗体阳性率分别为51．4％、9．8％和75．1％。在1日龄雏鸡，对CAV和REOV的平均母源抗体阳性率可达100％和81．1％，但对REV只有7．4％。抗体阳性率随年龄变化的动态分析表明，对REV和REOV的母源抗体在出壳后2～3周内消失，而对CAV的母源抗体则可持续3～4周。对CAV和REOV的抗体从5周龄起再次出现，到20周龄时，所有送检鸡群全部阳性，平均阳性率在90％以上。有近一半送检鸡群对REV呈现抗体阳性，抗体阳性率普遍较低，即使在达到开产年龄后，仍还有很高比例鸡为抗体阴性，即对REV仍为易感鸡。研究表明，我国多数鸡群中都同时存在着这3种病毒的感染，但它们在感染的程度和动态等流行病学特点上显著不同，应根据鸡群中抗体的阳性率分别采取不同的措施。     

广西龙胜县某凤鸡养殖场禽白血病检测

为了解广西纯地方品种龙胜凤鸡中禽白血病（AL）的流行情况,采集龙胜凤鸡的肛拭子217份、蛋清样品59份和血清样品276份,采用禽白血病病毒（ALV）群特异性抗原p27和A/B、J亚群抗体检测试剂盒分别对肛拭子、蛋清样品和血清样品进行检测.结果显示,p27抗原的总阳性率为26.45％（68/276）;A/B亚群抗体的总阳性率为24.64％（10/276）;J亚群抗体的阳性率为3.62％（73/276）.结果表明,龙胜凤鸡的种群已存在ALV的感染,以A/B亚群感染为主.     

山东省鸡传染性贫血流行病学调查

本文对山东省12个地市58个鸡群传染性贫血的流行情况进行了调查，共检测了368份务清样品，蛋鸡群、肉鸡群和种鸡群的鸡传染性贫血病毒（CAV）ELISA抗体检出率分别为91．7％、77．6％和84．78％，平均抗体阳性率为83．2％，结果表明近几年山东省鸡群中CAV感染相当普遍，而且蛋鸡和种鸡CAV抗体阳性率明显高于肉鸡群。     

贵阳地区禽白血病的血清学调查

为了解和掌握禽白血病在贵阳地区发生和流行的基本情况,采用禽白血病A、B亚群抗体(ALV-A或B)和J亚群抗体(ALV-J)检测试剂盒,对贵阳市13个养鸡场中的15个肉鸡和商品蛋鸡共481份血清进行禽白血病抗体间接ELISA检测,结果 ALV抗体阳性率达到11.43%(55/481),其中9个鸡群172份血清样本A、B亚群抗体阳性率达到18.60%(32/172),13个鸡群309份血清J亚群抗体阳性率达到7.44%(23/309),结果表明该地区存在禽白血病病毒的感染。     

武平县部分鸡场禽白血病J亚群和A、B亚群抗体检测与分析

采用禽白血病抗体ELISA检测试剂盒,对武平县境内三个黄羽品种鸡采集6个场272份血清进行禽白血病A、B亚型抗体（ALV-AB）和J亚型抗体（ALV-J）检测。结果表明：武平县三个黄羽品种鸡群中存在ALV-J亚型和AB亚型自然感染现象,其中ALV-AB抗体阳性率为27.6%（75/272）,ALV-J抗体阳性率为20.6%（56/272）,同时具有ALV-AB抗体和ALV-J抗体的阳性率为11%（30/272）;不同鸡群的ALV感染有所不同,广西三黄鸡〉长汀河田鸡〉武平象洞鸡、商品鸡〉种鸡。     

山东省鸡传染性贫血流行病学调查

本文对山东省12个地市58个鸡群传染性贫血的流行情况进行了调查,共检测了368份血清样品,蛋鸡群、肉鸡群和种鸡群的鸡传染性贫血病毒(CAV)ELISA抗体检出率分别为91.7%、77.6%和84.78%,平均抗体阳性率为83.2%,结果表明近几年山东省鸡群中CAV感染相当普遍,而且蛋鸡和种鸡抗体阳性率明显高于肉鸡群。     

地方特色蛋鸡母本群禽白血病病毒感染的鉴定

研究采用ELISA、病毒分离和PCR方法对地方特色蛋鸡配套系母本鸡群的ALV抗体、抗原和核酸等进行了检测,结果显示受检种鸡群泄殖腔棉拭p27抗原阳性率为47.8％,A/B抗体阳性率为4.3％,未检测到J亚群抗体阳性个体,表明鸡群感染ALV-A/B,同时分离出两株外源性禽白血病病毒并命名为JS12JD01和JS12JD02.PCR扩增其囊膜蛋白基因并测序分析,结果显示JS12JD01株与A亚群参考株的gp85氨基酸序列同源性较高,与B、C、D、E和J亚群参考株同源性仅为32.5％～82.8％;JS12JD02分离株与B亚群参考株的gp85氨基酸序列同源性较高,而与A、C、D、E和J亚群参考株的同源性仅为34.6％～88.7％.表明这两株分离株分属于A、B两个不同亚群,该鸡群存在A、B亚群ALV的混合感染.     

云南省鸡减蛋综合征的血清学调查

从云南省10个养鸡场采集不同日龄、品种、性别和不同用途鸡的血清样品103份，以血凝抑制（HI）试验检测鸡群的减蛋综合征（EDS）血清抗水平，结果，10周龄以下鸡的EDS血清抗体阳性率为16．7％，其阳性率随着日龄的增加而增高；不同品种鸡群中，迪高鸡和地方土鸡的EDS血清抗体阳性率较低，而伊萨褐鸡阳性率高达100％；公鸡EDS血清抗体阳性率为55．6％，母鸡为73．4％；商品鸡EDS血清抗体阳性率为68．95，种鸡阳性率为62．5％；全部检测各的平均阳性率为67．9％，多数血清EDS HI效价为1：32－1：1024之间，最高的达1：4096。     

芦花鸡传染性肿瘤病的流行病学调查

从山东某养殖场散养的60日龄芦花鸡随机抽取100只隔离饲养,分别于65、120、190、240日龄翅静脉采血,动态检测禽白血病（AL）AB、J亚型抗体、网状内皮组织增殖病（RE）抗体;取泄殖腔棉拭子动态检测禽白血病病毒（ALV）群特异性抗原p27;同时对患瘤病死鸡进行剖检、病理组织学检查、PCR病原检测。结果显示,鸡群在240日龄时出现13．24％的ALV-AB抗体阳性率,未检测到ALV—J抗体,网状内皮组织增殖病病毒（REV）抗体在120日龄时出现阳性,且阳性率随日龄增加而升高;p27阳性率为34．21％～66．18％;开产前后鸡群开始出现肿瘤性疾病,一直持续至240日龄,死亡率达32％,120～190日龄为死亡高峰期;剖检病鸡可见内脏器官普遍肿大,肝、脾、肾表面及切面有大小不等的灰白色肿瘤样结节,部分病鸡坐骨神经肿胀;组织学检查,肿瘤组织为浸润性生长的多形态淋巴样细胞构成,符合马立克氏病（MD）的病变特征;PCR检测16份肿瘤病料中有14份为ALV-J阳性（87．5％）,13份马立克氏病病毒（MDV）阳性（81．25％）,2份为REV阳性（12．5％）,ALV-J与MDV、REV混合感染率分别为68．8％（11／16）、12．5％（2／16）,三重感染率为6．3％（1／16）。该芦花鸡群存在ALV、MDV和REV的共感染。     

免疫抑制鸡群鸡传染性贫血病毒和网状内皮增生症病毒共感染检测

分别用digoxigenin标记的鸡传染性贫血病毒（CAV)和禽网状内皮增生症病毒（REV）核酸探针以及PCR技术对某种鸡场进行检测，检测结果表明，在20个样品中，CAV和REV感染的阳性率分别为10％和5％，这一结果显示，CAV和REV感染是导致该鸡场发生免疫抑制的主要病因之一。     

商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV多重感染的检测

从山东省东营、日照、潍坊、聊城等地区自然发病和临床健康AA商品肉鸡群中分别采集脏器样品,用特异性核酸探针对样品进行马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus,CAV）和禽呼肠孤病毒（Avian reoviruses,ARV）检测。结果显示,自然发病AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV和ARV的检出率均较高,分别为69．30％、57．46％、63．60％和67．11％;临床健康AA商品肉鸡群中MDV、REV、CAV的检出率分别为36．96％、43．48％和30．42％,且自然发病和健康鸡群中均存在不同病毒组合的多重感染,感染率分别为85．96％和43．46％。用x2检验进行分析发现,自然发病商品肉鸡群与临床健康商品肉鸡群中MDV、CAV、MDV＋REV、REV＋CAV的检出率和未检出的比例差异极显著（P〈0．01）;REV、MDV＋CAV检出率差异显著（P〈0．05）。对自然发病商品肉鸡的肝脏、脾脏、法氏囊中4种病毒检出率进行X2检验分析发现,MDV在脾脏中检出率显著高于肝脏和法氏囊;REV在法氏囊中检出率显著高于肝脏和脾脏,而CAV和ARV分别在脾脏和肝脏中检出率较高。结果表明,多种免疫抑制性病毒的共感染已普遍存在,是目前AA商品肉鸡易发病且生长缓慢的重要流行病学因素之一。     

禽白血病病毒囊膜基因gp85片段的克隆与鉴定

用ＰＣＲ从禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus,ALV)RAV-1,RAV-2感染或未感染的ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）分别扩增出１．２kb囊膜基因片段，分别将上述ＰＣＲ产物的KpnⅠ／SaⅡ酶切片段克隆到质粒pGEM-3zf( )中得到３个重组子即pGEM-3zf-RAV-1env、pGEM-3zf-RAV-2env和pGEM-3zf-Eenv。酶切分析和序列测定结果表明克隆的ＰＣＲ片段分别来自ＡＬＶ ＲＡＶ－１，ＲＡＶ－２和内源生Ｅ亚群病毒，这为病毒囊膜基因gp85的表达及个体鸡遗传抗性的鉴定打下基础。     

禽白血病病毒分离鉴定

使用 SPF鸡胚成纤维细胞从蛋用种鸡的病料中分离到一株病毒.经禽白血病病毒（ALV） p-27抗原ELISA检测、病毒培养、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）鉴定、群特异性抗血清中和试验和动物回归试验等证明,该株病毒属于禽白血病病毒.     

用斑点杂交法同时检测鸡群中的CAV MDV和REV

为研究鸡传染性贫血病毒(CAV)在鸡群中的感染状况以及马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮细胞增生病病毒(REV)在鸡群中的发病率，用斑点杂交法对山东省4个肉鸡场和2个肉种鸡场进行CAV、MDV和REV的检测，结果表明除一个肉种鸡场没有检测出REV以外，其他鸡场均同时检测出CAV、MDV和REV，并且发现直接从病科中检测CAV的阳性率(20％)远远低于将病科接种SPF鸡胚后的检出率(80％)。     

荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用

gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenI模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;在8.2×102～8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(Y=3.46X+31.8,r=0.9995);最低可检测82个拷贝的病毒核酸,与普通PCR方法相比,灵敏度高出1000倍。组内CV为0.28%～1.45%;组间CV为2.13%～3.84%;对151例临床疑似样本的检出率为54.9%(83/151)。随机选择15份阳性样本PCR产物克隆测序,结果证明扩增片断为ALV的特异序列,与ALVgag基因核苷酸同源性为97.8～98.9%;对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,鸡群的阳性率为14/14。同时用实时RT-PCR方法和ELISA方法对从种鸡场随机采集的30份100日龄蛋鸡的血清进行检测,实时RT-PCR检测率为5/30,ELISA方法检测率为4/30。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。     

A、J亚群禽白血病病毒感染肉用种鸡的诊断

通过流行病学调查、剖检病变和组织病理学观察,结合PCR技术检测病原核酸,确诊肉用种鸡群发生了由ALV—A和ALV—J感染而导致的淋巴细胞性白血病和骨髓细胞瘤型白血病。在检测的6只病鸡中,6只病鸡均感染了ALV—J,2只病鸡感染了ALV-A.     

禽白血病病毒抗体间接ELISA 检测方法的建立及初步应用

以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒（ALV）重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10％,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验（IFA）有更高的符合率.     

用ELISA对种蛋中禽骨髓细胞瘤病毒的母源抗体调查

为了调查种蛋中禽骨髓细胞瘤病毒的母源抗体 ,从北京、山东、内蒙古地区共 4个种鸡场购买种蛋抽取蛋清共 55份 ,其中肉鸡种蛋清3 8份 ,蛋鸡种蛋清 1 7份 ,在 AL V-Jgp85抗原包被的 96孔板中进行微量滴定 ,两个肉鸡场种蛋中 AL V-J母源抗体阳性率分别为 3 .3 3 % (1 /3 0 ) ,2 5% (2 / 8) ,两个蛋鸡场种蛋中 AL V-J母源抗体阳性率分别为 3 3 .3 % (3 / 9) ,3 7.5% (3 / 8)。