重组大肠杆菌pQE30-ChIL-6/JM109的遗传稳定性研究

为研究携带鸡白细胞介素-6(ChIL-6)基因的重组大肠杆菌pQE30-ChIL-6/JM109的遗传稳定性。本文通过菌株传代方法将重组菌株pQE30-ChIL-6/JM109在含有氨苄青霉素的LB液体培养基中连续传至100代,选取第1、10、20、50、100代菌株为研究对象,分别比较各代次菌株的菌落形态、细菌形态、质粒保有率、生长速度等差异;取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA序列比对;诱导表达各代次菌株,比较其重组ChIL-6蛋白的表达水平及免疫反应性。结果表明,各代次菌株菌落形态、生长速度等方面无明显差异;在传至100代时的质粒保有率为89%;各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱均未改变,未见ChIL-6基因变异;各代次菌株的蛋白电泳图谱、ChIL-6蛋白表达量、ChIL-6蛋白的体外促鸡脾淋巴细胞增殖活性无明显差异。结果提示,重组大肠杆菌pQE30-ChIL-6/JM109具有较好的遗传稳定性。     

牦牛副伤寒突变型菌株NG／UV—8的培育及免疫原性测定

应用诱变剂亚硝基胍(NG)和紫外线(UV)交替诱变处理法,诱变牛病沙门氏菌S.301株,筛选出一株突变型菌株—NG/UV-8。该菌株减毒情况良好(比母源S.301株毒力降低10～15倍),经培养基传10代、20代,豚鼠传5代后,其毒力、生理生化性质、抗原特性等遗传性状一直保持稳定。用该菌1.15亿,0.58亿个菌免疫小白鼠,能100％的抵抗2个MLD母源S.301株的攻击,用5.76亿个菌免疫豚鼠能75％的保护2个MLD母源S.301株的攻击。该菌株有希望成为预防牦牛副伤寒菌苗的候选菌苗株,有在本动物(牦牛)进一步作免疫保护试验的价值。     

犬腹泻病例沙门氏菌的分离与鉴定

对南京农业大学动物医院9例有腹泻症状的病犬采取直肠粪便进行沙门氏菌(Salmonella)的分离鉴定。通过生化鉴定和PCR扩增沙门氏菌invA基因,筛选出5株沙门氏菌菌株。对分离出的菌株进行血清型鉴定和对抗生素药物的敏感性试验。结果显示,5株分离菌株中4株属于B群鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium),1株属于D群伊斯特本沙门氏菌(S.eastbourne)。2个分离菌株仅对阿米卡星、头孢西丁、链霉素及头孢吡肟较为敏感。在动物致病性试验中,鼠伤寒沙门氏菌血清型的菌株的致病力则强于伊斯特本沙门氏菌。     

副猪嗜血杆菌国内流行血清型菌株的生物学特性比较研究

本研究对我国最流行的HPS血清4、5、12、13和14型共16株细菌的菌体形态、生长速度、生化特性、小鼠毒力等生物学特性进行了比较研究。革兰染色镜检结果表明,除4型菌株H4L3外,同一血清型HPS的菌体形态比较一致;不同血清型HPS的菌体形态具有明显差异,且具有型特异性。培养结果表明,在TSA固体培养基上生长24h后的菌落平均直径大小依次为13型2.02mm、4型1.91mm、5型1.80mm、14型1.71mm、12型1.66mm,同一血清型的不同菌株之间无显著差别。生化试验结果表明不同血清型HPS的生化反应存在明显差异,即使是同一血清型的不同菌株之间也有较大差别。小鼠毒力试验结果表明,除4型外,毒力强弱依次为血清12型、14型、5型、13型,其LD50分别介于(2.7⁴.6)×108、(4.34.6)×108、(4.3⁷.9)×108、(1.07.9)×108、(1.0¹.3)×109、(2.31.3)×109、(2.3².8)×109 CFU之间,同一血清型的不同菌株之间无显著差别。在血清4型菌株中,H4L3的毒力明显偏强(LD50为3.6×108 CFU),其他菌株的LD50介于(1.42.8)×109 CFU之间,同一血清型的不同菌株之间无显著差别。在血清4型菌株中,H4L3的毒力明显偏强(LD50为3.6×108 CFU),其他菌株的LD50介于(1.4¹.6)×109 CFU之间。本研究为HPS不同血清型的快速鉴定、致病机理和疫苗研发等提供了理论依据。     

四川规模化猪场仔猪黄、白痢的分子流行病学研究

在系统鉴定、药敏试验和血甭型鉴定的基础上,对52株致病性大肠杆菌和4株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析,结果表明,菌株的质粒得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱,质粒DNA分析为四川规模化猪场致病性E.coli的分子流行病学调查提供了科学依据。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。     

鸡大肠杆菌traT基因的扩增及TraT-DIG探针制备

以致病性Ｅ．ｃｏｌｉ的质粒为模板,用人工合成引物扩增出致病性相关的ｔｒａＴ基因核心部分;将菌株的致病性与ｔｒａＴ基因的扩增结果进行比较,强致病力菌株均扩增出ｔｒａＴ基因,无致病力菌株未扩增出ｔｒａＴ基因,约大多数中等致病力菌株亦扩增出ｔｒａＴ基因。扩增获得的ｔｒａＴ基因经纯化后标记地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｎ,ＤＩＧ）研制出ｔｒａＴ－ＤＩＧ基因探针,该探针与鸡沙门氏菌、鸡白沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌不发生     

鸡致病性大肠杆菌生物学特性的相关性研究

对来源于河南省新郑地区的14株鸡致病性大肠杆菌进行了致病性试验、血清型鉴定、耐药性试验和质粒图谱检测,并对其相互关系进行了分析研究,结果表明:菌株的血清型与其致病性、耐药性、质粒图谱均无一定的相关性;菌株的致病性与其耐药性、质粒图谱有一定的关系,耐药种类越多的菌株其致病性越强,质粒图谱中含有相对分子量较大的质粒条带的菌株其致病性较强;并且耐药图谱的复杂性与其质粒图谱中的条带数无一定的相关性.     

不同来源沙门氏菌的毒力基因检测与耐药性分析

[目的]了解不同畜禽中沙门氏菌的携带状况及其毒力和耐药性,为动物源沙门氏菌的流行病学分析和防控提供数据和依据。[方法]从山东、吉林、江西、新疆和云南等地区采集样本,用国标法分离鉴定沙门氏菌,用沙门氏菌血清型试剂盒检测血清型,用PCR方法检测毒力基因,最后用微量肉汤稀释法(MIC)对分离菌株进行耐药性分析。[结果]健康畜禽和发病畜禽样本中的沙门氏菌分离率分别为20.67%(141/682)、6.13%(45/734)。发现4种沙门氏菌优势血清型,分别为德尔卑(42.6%)、印第安纳(26.2%)、肠炎(17.7%)和汤普森(17%)。对分离菌株进行毒力基因分析,检测SPI-1~SPI-5上的5个核心蛋白基因和spv A、B、C、D和R毒力质粒基因,其中健康畜禽样本中沙门氏菌毒力岛上的基因携带率与发病畜禽样本中的携带率基本一致,但发病畜禽中的菌株毒力质粒基因携带率明显高于健康畜禽。耐药性检测结果表明,除多西环素和庆大霉素外,发病动物中的沙门氏菌对抗生素的耐药率均比健康动物中的高。猪源与鸡源沙门氏菌对庆大霉素、头孢噻呋、氧氟沙星、粘杆菌素的耐药率差异显著,对其他抗菌药物略有差异,但不显著。健康畜禽中的多数沙门氏菌株耐药1~2种,占分离菌株总数的55.32%;发病畜禽中耐药10种以上的沙门氏菌占分离株总数的44.44%。[结论]发病畜禽中的沙门氏菌分离率比健康畜禽中的低,但其毒力质粒基因的携带率较健康畜禽中的高,且耐药情况较严重,多重耐药率高。该分析结果可为沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。     

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12：i：1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。     

内蒙古地区奶牛源沙门氏菌的分离、鉴定及其对小鼠的致病性研究

本研究旨在通过对内蒙古地区奶牛源沙门氏菌的分离、血清学鉴定及其对小鼠的致病性研究,探明本地区奶牛源沙门氏菌的血清型分布及其对小鼠的致病力强度,为兽医临床防制由沙门氏菌引起的奶牛感染性疾病提供依据。采用SC增菌液和SS琼脂从兽医临床采集的奶牛乳房炎和奶牛子宫内膜炎病料中分离沙门氏菌;对分离到的疑似菌落进行涂片染色镜检和生化鉴定;采用A～F群O抗原多价诊断血清及单价诊断血清对疑似沙门氏菌进行血清型鉴定;采用腹腔注射感染小鼠,观察部分菌株对小鼠的致病和致死情况,并进行病理学检查。结果显示,从460份病料中共分离、鉴定出沙门氏菌38株,分离率为8.3%;38株分离菌均分布于A～F群内,分属8个群、14种血清型,其中鼠伤寒沙门氏菌分离率最高（39.5%）;选择的5株沙门氏菌攻毒后均可引起小鼠发生死亡,死亡率在50%～80%之间;在感染小鼠的心脏、肝脏均回收到了攻毒菌,且发病小鼠的心脏、肝脏和肾脏出现坏死灶,肺脏有细菌性栓子。结果表明,内蒙古地区奶牛源沙门氏菌血清型分布较复杂,对小鼠有较强的致病性,且不同血清型菌株间的毒力存在差异。