猪感染牛病毒性腹泻病毒的诊断

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)除可感染牛外,还可以感染猪、绵羊、山羊、鹿及野生动物。猪感染BVDV后会出现类似慢性猪瘟的临床症状和病理变化。本文通过对猪场发病猪进行临床及实验室诊断,最终确定由牛病毒性腹泻病毒感染所致,建议加强对该病的综合防控。     

猪感染牛病毒性腹泻病毒的诊断

2015年10月,某猪场发生一起以母猪产死胎、木乃伊胎,以及出生仔猪发热、腹泻、消瘦和最终死亡的病例,通过对病死猪发病前临床症状的观察和病理剖检,结合实验室RT-PCR检测,最终确诊为感染牛病毒性腹泻病毒。     

北京地区牛病毒性腹泻病毒流行传播的原因分析

在对北京地区20个奶牛群进行抗体水平检测和全群抗原筛查的基础上,将牛群中牛病毒性腹泻病毒流行状况同牛群在3年内是否引入过动物进行相关性比较。结果显示,20个牛群中,引入过动物的8个牛群中后备牛群血清抗体平均水平为80.0%,抗原筛查的总体阳性率为0.61%;未引入过动物的12个牛群中后备牛血清抗体平均水平为65.5%,抗原筛查的总体阳性率为0.15%,两组数据之间差异极显著,表明牛群在3年内是否引进过动物对牛群持续感染牛的分布影响极显著,动物引进可能是造成BVDV在北京地区流行传播的主要原因之一。     

猪感染牛病毒性腹泻病毒的研究进展

牛病毒性腹泻病毒（BVDv）与猪瘟病毒同属于黄病毒科瘟病毒属,在基因序列上具有近70％的同源性。猪通过与BVDV牛群的直接接触或通过污染的猪瘟疫苗而感染BvDV,感染BVDv,后可产生类似慢性猪瘟的临床症状和病理变化。仔猪可表现腹泻和消瘦,怀孕母猪可致发生流产和产出畸形胎儿。不少学者都报道从类似猪瘟病料中检出BvDv并经基因测序而证实,表听猪感染BVDV的普遍性。这引起了许多国家和地区的关注和高度预警。我国是世界上猪肉及其产品生产量和消费量最大的国家,因此对猪感染BVDV的现状必须有清醒的认识并应采取必要的防范措施。     

猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。     

猪感染牛病毒性腹泻病毒的研究进展

本文就猪感染牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）的发生,临床症状与病理变化,猪感染ＢＶＤＶ的传染来源以及猪感染ＢＶＤＶ和猪瘟病毒的鉴别诊断等方法作了综述性介绍。     

1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。     

牛病毒性腹泻病毒致病机理研究进展

牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是危害养牛业的重要病原之一。BVDV感染能够引起广泛的临床症状，包括牛病毒性腹泻、粘膜病、持续感染与免疫耐受、繁殖障碍、血小板减少与出血综合征等，其相应的致病机理也非常复杂。持续感染是妊娠母畜在怀孕早期通过子宫内感染非致细胞病变（NCP)型BVDV引起的，是BVDV在自然环境中维持存在的一种重要形式。当持续感染动物再次感染抗原性相似或同源的致细胞病变（CP）型病毒时就会发生粘膜病。本文将粘膜病发生过程中CP型病毒的来源机制概括为五点：①外源细胞序列的插入；②病毒基因的重排和拷贝；③外源细胞序列插入同时伴有病毒基因的复制；④缺陷干扰粒子；⑤点突变。BVDV感染导致奶牛繁殖力下降的机制可能有两条：一是造成卵母细胞的质量下降，二是使性腺类固醇激素生成机制受到破坏，导致血浆中雌二醇、黄体酮等激素紊乱。血小板减少和出血性综合征是BVDV感染引起的又一重要临床症状，其致病机理主要有两种：①BVDV进入到外周循环，使外周循环中血小板受损程度增加，病理检查表现为血小板体积平均值较正常有明显增大；②BVDV感染造成骨髓生成血小板的能力下降，病理检查表现为血小板的体积平均值较正常减少。     

牛病毒性腹泻病毒在绵羊垂直感染中的抗原分布

将新疆分离的病毒性腹泻病毒（BVDV）野毒株SHN－98和标准毒株Oregon C-24分别接种无BVDV感染的羔羊和怀孕100天左右的母羊，建立BVDV在绵羊垂直感染的动物模型，应用病毒抗原定位检测的免疫组化染色技术，探求BVDV在实验性感染绵羊经胎盘感染胚胎、羔羊过程中，病毒在感染组织、靶器官、靶细胞中的分布规律。结果表明：BVDV通过母羊的胎盘感染胚胎。BVDV在感染妊娠母羊体内主要分布于心肌、肝、肺、脾、淋巴结、胃肠粘膜、脑神经、子宫粘膜、胎盘等器官组织，其中以胃肠粘膜、脾、淋巴结、脑神经、子宫粘膜、胎盘等器官组织中分布量较多；BVDV在垂直感染胚胎体内主要分布于胸腺、淋巴结、脑、肝、肾、心肌、脾、肺、胃肠粘膜、脐带等器官组织，其中以胸腺、胃肠粘膜、脑神经等器官组织中分布量较多；BVDV在垂直感染羔羊体内主要分布于心、肾、胃肠粘膜、脾、胸腺、淋巴结、大脑、小脑、海马、视丘、视神经、眼球脉络膜等器官组织，其中以胃肠粘膜、大小脑、用、视神经、淋巴结等器官组织中分布较多，在组织分布中，BVDV对上皮细胞、神经胶质细胞、淋巴细胞有较强的亲嗜性，SHN－98和OregonC-24在垂直传播中组织器官的分布无明显差异。     

牛病毒性腹泻病毒间接ELISA方法的建立

持续性感染和免疫耐受是牛病毒性腹泻病的重要特征,也是该病的防控难点.本试验将2种生物型的牛病毒性腹泻病毒(BVDV):致细胞病变(CP)型(BVDV OregonC24株)和非致细胞病变(NCP)型(BVDV Yak株),灭活、浓缩作为抗原,分别免疫家兔制备高免血清.同时,使用BVDV全病毒蛋白作为包被原,建立了检测BVDV的间接ELISA检测方法.本试验利用该方法对高免血清进行检测,探讨CP型BVDV与NCP型BVDV抗原免疫原性差异.结果显示,CP型BVDV的高免血清效价均比NCP型BVDV高免血清的效价高,平均高35%.结果表明,CP型BVDV的免疫原性优于NCP型BVDV,且CP型BVDV与NCP型BVDV的血清效价具有明显差异.这为在实践中疫苗毒株筛选及生产提供了理论指导.     

牛病毒性腹泻病毒的分子生物学研究进展

牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）是导致牛腹泻的重要致病病毒之一,BVDV感染不仅能造成严重的临床症状,且可导致患畜的免疫力降低从而感染其他病原,致使患病动物的发病率和死亡率大大增加,给养牛业造成重大的损失。随着近年来分子生物学相关理论及技术不断发展,对于BVDV的研究逐渐深入,人们对该病毒的分子生物学方面有了一些新的了解,作者主要从BVDV的病毒粒子结构组成及功能、国内外的流行情况和BVDV基因的遗传与变异情况3个方面阐述近几年BVDV的分子生物学研究进展。     

Research Progress on Molecular Biology of Bovine Viral Diarrhea Virus

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the most important pathogenic viruses which mainly causes bovine viral diarrhea disease (BVD). BVDV can not only cause serious clinical symptoms, but also lead to decrease of immunity of livestock and infect other pathogens, resulting in significant increase of morbidity and mortality of sick animals, and causes significant losses to the cattle industry. With the development of molecular biology theory and technology in recent years, the research on BVDV has been deepening, and some new understandings have been made to the molecular biology of the virus. In this paper, the progress of molecular biology of BVDV in recent years is described from three aspects of the composition and function of virus, the epidemic situation of BVDV gene and the genetic and mutation of BVDV gene.     

BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。     

牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒病原的方法,本研究根据GenBank上登录的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)基因组序列,设计1对引物,建立了检测BVDV的一步法RT-PCR方法。该方法对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛副流感病毒3型的扩增结果均为阴性,检测的敏感性达1 ng RNA。该一步法RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,可以准确快速检测出极低含量的BVDV,将为BVDV的病原检测及分子流行病学调查等提供一种快速、灵敏、特异、准确的分子生物学检测方法。     

牛病毒性腹泻病毒LAMP检测方法的建立与应用

针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 5'UTR基因(GenBank登录号:AY278459.1)序列设计4条特异性环介导等温扩增 (LAMP) 引物,特异性识别靶基因序列上4个独立区域,采用LAMP技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP 反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实时监测反应液浊度来判断反应结果,实现对扩增反应全过程的监控,建立BVDV的LAMP快速检测方法。通过实时浊度仪在恒温63 ℃下50 min完成检测,对方法的特异性、灵敏度、重复性进行了评价。结果显示,经优化该方法只检测BVDV阳性,特异性强;病毒10^-6倍稀释时仍能被检测到,比PCR方法灵敏度至少高100倍;重复性良好。LAMP实时浊度法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优势,为BVDV的临床检测提供了一种简单快速的试验手段。     

Establishment and Application of LAMP Detection Method of Bovine Viral Diarrhea Virus

Since the 5'UTR gene (GenBank No.:AY278459.1) had 4 isolated regions,we designed a set of 4 LAMP primers to specifically recognize target gene sequences.This study developed a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for detecting BVDV,using the pyrophosphate magnesium white precipitate for Real-time detection in LAMP reaction process of turbidity instrument,Real-time monitor liquid turbidity to determine result.The whole reaction lasted only 50 minutes at a constructed temperature of 63 ℃ to evaluate specificity,sensibility and repeatability of the method.The result demonstrated that the LAMP assay could only react with BVDV,its specificity was high;It could detect at least 10^-6-fold diluted samples,which was 100 more sensitive than PCR assay;And repeatability was good.The simple,rapid,high siensitivity and specificity LAMP assay was a potential tool for the detection of BVDV in field conditions.     

牛病毒性腹泻弱毒活疫苗免疫持续期的研究

为检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)弱毒活疫苗在免疫牛体内抗体产生及其消长规律,评价弱毒疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本试验对免疫试验牛每头颈部肌肉接种BVDV SM株弱毒疫苗10^4.5TCID₅₀/头,监测血清抗体效价,进行免疫持续期的确定。在疫苗免疫后的6、9和12个月分别抽取5头免疫组和5头对照组牛采用BVDV-JL强毒株进行攻毒试验,每头牛攻毒剂量为6×10^7.0 TCID₅₀/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时血清中和抗体效价仍维持在1∶1048以上,攻毒结果显示3个时间点强毒攻击后,免疫组所有动物白细胞数量都没有下降也没有分离到病毒,而对照组动物白细胞数下降均超过30%,6和9个月动物均分离到病毒,而12个月对照组动物由于年龄大,没有分离到病毒,因此暂定此疫苗的免疫持续期为9个月。