磺胺甲噁唑残留快速检测胶体金试纸条的研制

磺胺类药物（sulfonamides，SAs）其抗菌谱广，能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌，但其半衰期较长，通过任何途径摄入均会在人体中蓄积，对人体造成潜在危害。我国、美国以及欧盟等规定动物性食品中总磺胺以及单种磺胺药的MRL为0．1mg／kg。     

磺胺甲噁唑的控温相变免疫分析

将已制备的抗磺胺甲噁唑（SMX）单克隆抗体（AbSMX）与温度敏感水凝胶（pNIPA）偶联形成水凝胶复合物（pNIPA—AbSMX），用异硫氰基荧光素（FITC）标记的抗原（FITC-AgSMX）和游离半抗原SMX竞争地与有限量的AbSMX和pNIPA—AbSMX反应，根据水凝胶相变温度以上免疫复合物沉淀的特性进行分离，结合接原抗体免疫反应测定SMX，建立了一种检测SMX的控温相变免疫分析方法。结果表明，SMX浓度在0．1ng／mL-100μg／mL范围内有良好的线性关系，60％抑制率时灵敏度为0．03μg／mL。     

胶体金试纸条半定量检测鸡蛋中磺胺嘧啶残留

采用竞争反应模式建立了鸡蛋中磺胺嘧啶(SD)残留的胶体金试纸条半定量检测方法。该试纸条由吸样材料、玻璃纤维、硝酸纤维素膜、吸水材料组成。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记SD单克隆抗体;SD竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成胶体金试纸条。该试纸条在15min内可完成对SD残留的半定量检测,读条系统判定灵敏度为5μg/L,肉眼判定检测限为10μg/L,与其他磺胺类药物无交叉反应,在鸡蛋中的回收率为71%~96.7%;用试纸条与ELISA对来自动物试验的52份鸡蛋样品进行对比检测,以10、100ng/g为cutoff值,两者阳性(大于100ng/g)符合率为100%,弱阳性(10~100ng/g)符合率为72.7%,阴性(小于10ng/g)符合率为84.2%,两者总符合率为94.2%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

磺胺甲噁唑人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

将磺胺甲噁唑以重氮化方法使之分别与人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA)载体蛋白连接,分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验,结果产生了特异性抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与磺胺甲口恶唑反应明显,与其他类似物交叉反应不明显。     

磺胺甲噁唑抗原合成及其抗体的制备

采用重氮化法将磺胺甲噁唑(SMZ)与人血清白蛋白偶联形成免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描和高效液相色谱分析偶联物,免疫抗原的偶联率为19∶1,改良辛酸-饱和硫酸铵纯化抗体,多克隆抗体效价达1∶105,间接酶联免疫吸附试验建立的SMZ检测的线性范围在0.1ng/mL~10μg/mL之间,50%抑制率检测限为22.53ng/mL,抗体与磺胺甲噁唑交叉反应率为100%,与其他7种磺胺药交叉反应率很低。表明制备的磺胺甲噁唑多克隆抗体具有很高的特异性,可用于SMZ在动物性产品中残留的检测。     

检测4种有机磷农药胶体金免疫层析试纸条的研制

本文通过制备有机磷农药半抗原,研制出一种能够检测蔬菜、水果中有机磷农药的胶体金免疫层析试纸条,辛硫磷、对硫磷、丙溴磷、氯唑磷等有机磷农药的检测限均为200μg/kg,检测时间仅为15min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求,试纸条能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

牛副结核胶体金免疫层析试纸条的研制

将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,兔抗羊IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,金标羊抗牛IgG点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体胶体金免疫层析试纸条。用牛的副结核标准阳性血清与检测试纸条反应,在检测线处出现红色反应带,而滴加阴性血清的试纸条检测线处未出现反应条带,上述2种血清在质控线处均出现红色反应条带;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400μg/mL;试纸条不与牛结核病、牛布鲁氏菌病的阳性血清发生反应;试纸条37℃保存9d后的检验结果与4℃保存的检验结果相同。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性良好;10min左右即出结果,操作简便,可用于临床诊断。     

鹿布鲁菌病免疫胶体金检测试纸条的研制

利用SUMO-BCSP31重组大肠杆菌表达并纯化了布鲁菌BCSP31重组蛋白,并利用该蛋白研制了布鲁菌免疫胶体金检测试纸条。以BCSP31蛋白作为检测抗原,通过间接法研制胶体金试纸条检测鹿血清抗体。该试纸条与大肠杆菌、沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌和绿脓杆菌无交叉反应;检测阳性血清最大稀释倍数为1∶640,证明试纸条具有良好的特异性和敏感性。临床上对420只鹿进行检测,比对试纸条与虎红平板凝集试验(RBT)检测结果:阳性符合率为100%,阴性符合率为96%,Kappa值为0.73,两种方法符合率较高;比对试纸条与cELISA检测结果:阳性符合率为81%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.88,两种方法符合率高。该试纸条简便快捷,具有较高准确性,可用于鹿布鲁菌病的现场初筛检测。     

磺胺甲噁唑在大菱鲆体内药代动力学及残留消除规律的研究

采用高效液相色谱法,对以80mg／kg b．W．单剂量口灌磺胺甲嗯唑的大菱鲆进行连续采样监测,研究大菱鲆口服磺胺甲嗯唑的药代动力学特征及残留消除规律。结果表明,磺胺甲嗯唑在大菱鲆血液、肌肉中药代动力学特征分别符合带时滞的一级吸收二室开放模型、一级吸收一室开放模型。磺胺甲嗯唑在大菱鲆体内消除速度较慢,16℃水温的实验条件下,在大菱鲆肌肉中的休药期为27天。     

林可霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中林可霉素的试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为20μg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

胶体金免疫层析法测定动物组织中氯霉素残留

应用胶体金免疫层析法对动物组织中的氯霉素残留进行检测,研究该方法的灵敏度、假阳性率、假阴性率及特异性。结果表明,用胶体金免疫层析法测定猪肉、鸡肉、鱼、虾中的氯霉素,检测限均为0.3g/kg,假阳性率和假阴性率皆为0%;方法的特异性较好,对其他抗生素无交叉反应;检测加标样本的结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。可见,该方法简便、快速、准确、稳定,可作为动物组织中氯霉素残留现场快速检测的一种有效手段。     

O、A、Asia1型口蹄疫病毒胶体金定量检测免疫层析方法的建立

旨在建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)抗原血清型的快速分型和定量的检测方法,利用双抗体夹心法,将口蹄疫病毒的兔抗及豚鼠抗体作为标记胶体金与NC膜检测带的原料,分别制备出检测O、A、Asia 1血清型的3种层析试纸卡.通过对标定的抗原标准品146S检测,拟合出定量标准曲线...     

检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将猪圆环病毒2型（PCV-2） Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测阳性样品时,在检测线和质控线处均出现红色条带;检测阴性样品时,仅在质控线处出现红色条带。该方法与ELISA相比,其灵敏度为89.19%,特异性为100%,并且与PCV-1、猪瘟病毒（HCV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）阳性血清无交叉反应。     

猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

酪蛋白胶体金快速检测卡的研制

目的:制备检测乳制品中酪蛋白含量的胶体金快速检测卡.方法:以酪蛋白为抗原和抗酪蛋白多克隆抗体为原料,用硝酸纤维膜和玻璃纤维纸作为载体,制作出检测酪蛋白胶体金快速检测卡.结果:该检测卡检测酪蛋白的灵敏度可达到2.3mg/mL,检测时间10min,重复性和稳定性良好.结论:本实验成功制作出了能检测酪蛋白的快速检测卡.     

新城疫病毒胶体金免疫层析试纸条的制备

为了建立一种简便、快速检测新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记NDV单克隆抗体6C4制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好1条病毒检测线（T线）和1条羊抗鼠抗体质控线（C线）,制备免疫层析检测试纸条,使用该制备好的检测试纸条可在10 min内检测出新城疫病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果提高8倍,与禽流感病毒未出现交叉反应,用缓冲液对照测试,结果为阴性,在密封、干燥、低温的条件下,试纸条的灵敏性与特异性没有明显变化。本研究建立的NDV免疫层析检测法具有特异、灵敏、稳定、操作简单等特点,符合现场快速检测的要求。     

Study on Colloidal Gold Immunochromatographic Assay for Rapid Detection of Estradiol in Milk

In order to develop a sensitive and specific method for the detection of estradiol residues (E₂) in milk, a colloidal gold immunochromatographic method was established. Colloidal gold particles were prepared by trisodium citrate reduction method and labeled with rabbit polyclonal antibodies (PcAb) by physical adsorption method. After optimization of reaction conditions such as the amount of coating antigen and labeled antibody to assemble test strip, the sensitivity, specificity, repeatability and accelerated preservation of the test strip were determined. The estrogen analogue cross reaction and milk matrix interference reaction were also measured. The results showed that the optimized concentration of E₂-OVA antigen was 2 mg/mL and the optimized antibody concentration was 20 μg/mL, visual detection limits of E₂ was 10 μg/L in PBS within 10 min. The cross reaction rate of this method with estriol was 40%, there were no negligible cross-reactivities with other estrogen compounds including estradiol valerate, estradiol benzoate, estrone, diethylstilbestrol, quinestrol, ethinyloestradiol and nonylphenol. Milk samples only needed two times diluted before analysis, and the results could judge by naked eye after 10 min with cut-off of 20 μg/L. The results demonstrated that the developed method was suitable for rapid on-site screening of E₂ residues in milk samples.     

牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E₂残留。     

金免疫层析法检测囊虫循环抗原试验研究

应用胶体金和免疫层析技术进行了检测金免疫层析法(GICA)囊虫循环抗原(CA)试验研究。5株抗囊虫McAb和一株多抗用于最佳配对的筛选,一株用于标记胶体金,另一株包被NC膜。以双抗体夹心ELISA为对照,GICA用于CA检测,观察其敏感性、特异性和稳定性。结果显示,以McAb 1A5和1B6配对的结果最佳,1A5最适标记量为10μg／mL,186最佳包被浓度为1 g／L;用GICA和ELISA两种方法检测囊虫CA,痈猪血清和囊液的符合率达100％,病人血清和脑脊液的符合率达80％;CA最低检测量为10 ng,检测正常猪、人及其他疾病血清,均呈阴性;检测时间5-15 min,整个实验仅一步操作;GICA试纸条分别在4℃和室温下保存105 d以及在37℃保存45 d,检测结果均未发现改变。以上结果表明,快速检测囊虫循环抗原的金免疫层析法具有简便、快速、敏感、特异和稳定的特点,适合基层使用。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫胶体金试剂板的研制

建立了一种快速检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的免疫胶体金检测方法.利用柠檬酸三钠还原法制备直径40 nm的胶体金溶液,利用胶体金标记抗DON单克隆抗体制备胶体金免疫复合物,将DON-BSA和羊抗鼠IgG分别固定在NC膜的检测线和质控线上,依次将样品垫、胶体金结合垫、NC膜和吸水垫粘贴到PVC膜上,组装成试剂板.该试剂板灵敏度可达到500 μg/kg,15 min内即可完成检测;特异性好,与其他霉菌毒素无交叉反应;稳定性、准确性均较好.该胶体金免疫层析试剂板使用方便、快速,且不需要任何仪器设备辅助,可开发作为一种大批量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇样本的筛选手段.