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相似文献
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1.
鸡体内减毒鼠伤寒沙门氏菌的繁殖和免疫反应   总被引:2,自引:1,他引:1  
初步研究了cya和crp双基因突变减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)在鸡体内的繁殖和免疫反应。1、4或7日龄肉鸡分别经口感染10^8或10^9CFU减毒S.typhimurium X4550,接种后3—4周鸡体内特异性细胞和体液免疫达到最高峰。4日龄口服10^9CFu组免疫效果最佳,但1日龄高剂量组表现增重降低及免疫抑制。28日龄每鸡口服攻击10^10CFU强毒S.typhimurium 50333,各免疫组保护率为100%。同时免疫鸡还能全部或部分阻止沙门氏菌在肝脏和脾脏的繁殖。接种后病毒S.typhimurium在泄殖腔的检出时间为4周左右。  相似文献   

2.
将携带鸡柔嫩艾芙耳球虫5401基因的真核表达质粒pcDNA3—5401的减毒沙门氏菌ZJ111菌株(ZJ111/pcDNA3—5401)口服接种于3日龄非免疫鸡,2周后进行第2次接种。结果表明.利用该减毒沙门氏菌作为戴体具有相对安全性,用限制性酶切分析和PCR鉴定证实,体内试验和体外培养的重组质粒在受体菌ZJ111菌株内比较稳定。用ZJ111/pcDNA3—5401(10^4cfu)口服接种非免疫鸡.2周后用相同剂量加强免疫1次,二免后2周用柔嫩艾笑耳球虫孢子化卵囊攻击,观察其免疫效果。结果表明,重组ZJ111/pcDNA3—5401菌既能诱导产生抗鸡柔嫩艾芙耳球虫抗体,也能显著增强淋巴细胞增殖水平(P〈0.05);其抗球虫指数为164.98。试验结果显示,利用减毒沙门氏菌为戴体传递DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性。  相似文献   

3.
根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物,用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后,克隆至质粒表达载体pET-32a( ),成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3),并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10.8%,其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后,用E.necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析,结果为阳性。  相似文献   

4.
以相对增重率(RBWG)、饲料转化率(FCR)和盲肠相对卵囊产量(ROP)为指标,评价了1次或2次分别以1×103个或3×103个毒害艾美耳球虫(E.necatrix)孢子化卵囊(SO)/鸡剂量免疫接种后特异性免疫力的产生和持续时间。笼养岭南黄肉雏鸡于3日龄1次或3日龄和10日龄2次分别接种不同剂量的E.necatrix SO后,于17日龄(2次免疫组为24日龄)、34日龄和50日龄时以14×104SO/鸡剂量的同源卵囊攻虫,结果表明,免疫后2周卵囊接种鸡已产生坚强免疫力,1次免疫接种者(17日龄)高、低2个不同剂量组的RBWG、FCR和ROP分别为95.5%、2.32、24.54%和101.4%、2.32、21.1%;而2次免疫组(24日龄)的上述指标则分别为106.5%、2.44、9.3%和98.2%、2.38、7.48%。至34日龄和50日龄攻虫时,这些指标均有不同程度的下降,且随着时间延长,下降更为明显,但2次免疫处理组的这些指标均明显优于1次免疫者;同一次处理的不同剂量组间无明显差异。结果揭示,雏鸡口服免疫接种一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊后可迅速诱导鸡体特异性免疫力的产生,但免疫保护力在笼养条件下持续时间较短。  相似文献   

5.
探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏茵为栽体传递新城疫病毒DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pcDNA3-F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株(ZJ111/pcD-NA3一F菌株),以10^8CFU进行首免,2周后二免,三免后4周攻击强毒株F48E9,观察其安全性和免疫原性,同时设只含空载体pcDNA3的ZJ111/pcDNA3菌株对照及口服PBS对照。结果表明:重组ZJ111/pcDNA3-F菌株具有良好的安全性。对强毒株攻击的保护率达64.7%。重组ZJ111/pcDNA3-F菌株不仅能诱导雏鸡产生NDVELISA抗体,而且诱导产生的法氏囊B淋巴细胞和胸腺T淋巴细胞增殖反应显著高于ZJ111/pcDNA3时照组。这些结果提示,减毒沙门氏菌为载体不仅可直接将NDVF基因呈递给鸡体细胞进行表达,产生抗NDV的体液免疫,而且还可诱导细胞免疫应答。  相似文献   

6.
实验用Etmic-2和ta4两种基因的表达产物经口服,肌注免疫鸡,然后用柔嫩艾美耳球虫攻击免疫鸡,以观察重组产物的免疫保护作用。结果表明,免疫鸡的增重均高于红对照,口服两种活菌200μg组最佳,其相对增重为96.54%,其它组为77.07%-90.30%。从盲肠卵囊数看,同样是口服两种活菌200μg组最佳,相对卵囊产量为16.58%,其它均有降低,为17.72%-94.08%,从增重与卵囊产量来看,两种重组表达产物对E.tenella球虫有一定的免疫保护作用。尤其口服活工程菌效果最佳。  相似文献   

7.
减毒鼠伤寒沙门氏菌对鸡的致病力及免疫保护效果研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
初步研究了cya/crp双基因突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium X4550)对鸡的致病力及免疫保护效果。给1日龄岭南黄肉鸡口服感染不同剂量(10~7、10~8、10~9、10~(10)、10~(11)CFU/只)的S.typhimuriumX4550,所有试验鸡均未出现死亡,仅在最高剂量(10~(11)CFU/只)组试验鸡出现食欲减退和轻微下痢等症状。1、4或7日龄岭南黄肉鸡分别经口免疫接种10~8或10~9CFU减毒S.typhimurium X4550,28日龄每只鸡口服攻击10~(10)CFU强毒S.typhimurium 50333,结果不免疫对照组死亡率55%(11/20),免疫组保护率为100%(20/20),但1日龄高剂量免疫导致试验鸡的生长抑制。同时,免疫鸡还能全部或部分阻止沙门氏菌在肝脏和脾脏的繁殖。  相似文献   

8.
为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.  相似文献   

9.
根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。  相似文献   

10.
为探讨鸡艾美耳球虫种间交叉免疫这一尚有争议的问题,本文用ELISA方法检测了巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)免疫血清与其它主要虫种(柔嫩艾美耳E.tenella、毒害艾美耳E.necatrix及堆型艾美耳球虫E.acervulina)抗原的血清学反应,同时观察了E.maxima免疫(1×104个卵囊/只)鸡遭受上述虫种大剂量(1×105个卵囊/只)强毒攻击后的死亡率和肠道病变,对临诊交叉保护力进行了评估。结果表明,E.maxima免疫血清与E.tenellaE.acervulina可溶性抗原有不同程度的交叉反应;E.maxima免疫后用E.tenella,E.acervulina,E.necatrix大剂量强毒攻击,分别有70%、40%、6%的鸡获得了完全保护;25%、60%、27%的鸡获得了部分保护。  相似文献   

11.
根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)微线蛋白5(Micronemeprotein5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E.necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-Tsimple载体连接,重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1470bp,编码490个氨基酸。EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,表达产物为相对分子质量约57.5ku的融合蛋白。Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E.necatrix阳性血清识别。用重组蛋白免疫昆明鼠,一免后15d即可检测到相应抗体,且抗体在三免后40d仍维持较高水平,证实重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。  相似文献   

12.
The study was aimed to construct prokaryotic expression vector of NDV HN gene using attenuated Salmonella typhimurium SL1344ΔcrpΔasd as a carrier. The HN gene was cloned from the plasmid pMD18-T-HN by polymerase chain reaction (PCR) and inserted into the vector pYA3493. Electricity transformation method was used in this recombinant plasmid pYA3493-HN transformating to recepted state Salmonella typhimurium SL1344ΔcrpΔasd. The recombinant plasmid pYA3493-HN was identified by digestion of endonuclease, PCR and sequencing. The results confirmed that recombinant attenuated Salmonella typhimurium vaccine SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN) was constructed successfully, which provided a foundation for research and development of NDV HN orally genetic engineering live vaccine.  相似文献   

13.
采用间接ELISA法检测雏鸡初次及二次感染毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)后血清免疫球蛋白含量的动态变化。结果表明,雏鸡初次感染E.necatrix 后10 d~ 14 d血清IgG, IgM, IgA 含量开始增加,16 d~18 d达到峰值;雏鸡二次攻击性感染E.necatrix 后2 d~7 d,其血清的上述3种免疫球蛋白含量均不同程度低于初次感染雏鸡,随后开始回升,至10 d~14 d明显高于相应对照及初次感染雏鸡。血清抗体,特别是IgG介导的体液免疫,在雏鸡抵抗E.necatrix初次及二次感染中发挥了重要作用。  相似文献   

14.
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株.PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5.将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5).鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测.结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体.本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础.  相似文献   

15.
Xu XG  Zhao HN  Zhang Q  Ding L  Li ZC  Li W  Wu HY  Chuang KP  Tong DW  Liu HJ 《Veterinary microbiology》2012,157(3-4):294-303
Attenuated Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) was selected as a transgenic vehicle for the development of oral vaccines against Porcine circovirus type 2 (PCV2). The Cap-encoding gene of PCV2 was amplified by PCR and cloned into expression vector pYA3341. The recombinant plasmid pYA3341-Cap was transformed into attenuated S. typhimurium X4550. BALB/c mice were inoculated orally with various doses of attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap. The bacterium was safe to mice at dose of 2×10(9)cfu and eventually eliminated in the spleen and mesenteric lymph nodes at 4 weeks post-immunization. The flow cytometry analysis showed that the percentage of CD4(+) T cells and CD4(+)/CD8(+) ratio were increased significantly in mice immunized with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap. Vaccine tests in swine showed that the oral immunization with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap could elicit significantly higher Cap antibody titers in the treated swine than the control groups. Virus neutralization test showed that serum from the swine treated with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap had significant levels of neutralization activities. The swine lymphocyte proliferative responses indicated that attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap could induce obvious cellular immune response. An in vivo challenge study showed the swine treated with attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap had significantly lower PCV2-associated lesions and PCV2 viremia than the control groups. The results indicated that attenuated S. typhimurium X4550/pYA3341-Cap can be a potential vaccine against PCV2 infections.  相似文献   

16.
通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-VP2)。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-VP2),为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。  相似文献   

17.
用PCR扩增猪圆环病毒Ⅱ型广东分离株的衣壳蛋白羧基端基因,将PCR产物连接到pR质粒,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定并测序后,转化E2菌,将重组E2菌与缺陷型噬菌体T4-Z1同源重组后,得到重组噬菌体,经SDS-PAGE和Western blotting分析,表明衣壳蛋白片段在噬菌体表面正确展示,表达的融...  相似文献   

18.
应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2(rh—potryprotein2)的部分基因,构建pGEX—KG—ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入E.coli BL21CodonPlus中,在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS—PAGE和Western—blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9%,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。  相似文献   

19.
为构建牛分支杆菌ag85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出ag85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒。将此重组质粒转化入大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定。酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同。结果表明,成功地克隆并构建了ag85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b。  相似文献   

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