26例犬毛囊肿瘤的组织病理学诊断和免疫组织化学分析

本研究旨在为犬毛囊肿瘤的诊断提供最优的免疫标记物,提高肿瘤诊断的准确性,缩短肿瘤的病理学诊断时间,为犬毛囊肿瘤病的临床精准治疗提供帮助。作者收集了26例临床犬毛囊肿瘤病例,分别用免疫标记物CK5/6、CK8/18、CK19、P63、CD34、CD10、Vimentin对肿瘤样本进行免疫组织化学标记（IHC）。26例犬毛囊肿瘤的IHC染色结果表明,CD34在86.9%的毛囊肿瘤中呈瘤细胞阳性;CD10和CK8/18在毛上皮瘤中呈瘤细胞阳性,在其他毛囊肿瘤中均为瘤细胞阴性;CK19在良性和恶性毛上皮瘤中分别为强阳性和中阳性,CD34在良性和恶性毛上皮瘤中分别为中阳性和弱阳性;CD10在毛母细胞瘤中呈周边间质特异性阳性;Vimentin在毛囊肿瘤中呈瘤细胞阴性,间质细胞阳性。结果显示,CK5/6、P63可用作本研究中所有毛囊肿瘤的阳性标记物;CD34可用作除毛母质瘤和毛囊瘤外的其他毛囊肿瘤的瘤细胞特异性阳性标记物;CD10和CK8/18可用作毛上皮瘤的瘤细胞阳性标记物;共同使用CK19和CD34可用于区分毛上皮瘤的良恶性;CD10可用作毛母细胞瘤周边间质特异性阳性标记物;Vimentin可用作毛囊肿瘤的瘤细胞阴性标记物。     

犬乳腺肿瘤手术治疗及其预后的调查

本研究采用单个乳腺切除、区域乳腺切除、单侧乳腺切除对临床31例犬乳腺肿瘤病例进行手术治疗,调查不同手术方法及肿瘤质量对良性、恶性乳腺肿瘤术后预后的影响。结果显示,犬乳腺肿瘤的大小与其预后相关,随着犬瘤体质重的增加,其术后预后不良愈加明显,复发率、死亡率呈上升趋势;区域乳腺摘除术或乳腺完全根除术对乳腺肿瘤患犬的预后有一定影响。     

二甲双胍对犬乳腺肿瘤细胞周期及其相关蛋白的影响

为研究二甲双胍对犬乳腺肿瘤细胞增殖和细胞周期的影响,以犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp为模型,采用终浓度为0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍对其进行干预,应用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布比例,再通过Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin D1和p27的表达情况。二甲双胍作用48 h后,与对照组比较,CHMm细胞试验各组的成活率显著降低(P0.05),而CHMp细胞除了5 mmol/L组(P0.05),其他试验各组的成活率也显著低于对照组(P0.05),并且均呈现一定的浓度依赖性。流式细胞仪分析细胞分布比例发现,CHMm的G0/G1期细胞比例从(38.7±5.89)%增加到(70.36±5.78)%,CHMp的G0/G1期细胞比例也从(37.03±4.23)%增加到(54.92±4.67)%。随着二甲双胍作用浓度的增加,CHMm和CHMp细胞内cyclin D1表达量呈现减少的趋势,而p27表达量呈现上升的趋势。研究结果表明,二甲双胍可以抑制犬乳腺肿瘤细胞体外增殖能力,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,并下调cyclin D1和上调p27细胞周期相关蛋白表达量,从而为犬乳腺肿瘤治疗提供一定的理论基础。     

血小板凝血酶蛋白1对犬乳腺肿瘤细胞体外生物学特性的影响分析

本研究旨在深入探讨血小板凝血酶蛋白1(THBS1)对犬乳腺肿瘤细胞CHMp的影响,并阐明其影响犬乳腺肿瘤发生发展的作用机制。通过构建THBS1慢病毒稳定过表达和THBS1沉默表达的犬乳腺肿瘤细胞CHMp细胞系,采用CCK-8试验、划痕试验、Transwell试验、原位荧光检测和流式细胞术检测THBS1对CHMp细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡和细胞周期情况的影响;通过qRT-PCR和Western blot检测THBS1对CHMp细胞凋亡相关因子(p53、Bcl-2、Bax)表达情况的影响,验证THBS1对CHMp细胞凋亡通路的影响。结果显示,过表达THBS1能有效增强犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移和侵袭能力,并且减少CHMp细胞的凋亡数量,而沉默THBS1后结果与之相反;流式细胞术得出THBS1能够影响CHMp细胞的细胞周期分布;经qRT-PCR和Western blot检测发现,在THBS1过表达后,p53和Bcl-2的表达量均明显增高,Bax的表达量明显减少,在沉默THBS1后结果与之相反。结果表明,THBS1的异常表达能够影响犬乳腺肿瘤细胞CHMp的增殖、迁移、侵袭以及细胞周期;此外,THBS1能够通过影响细胞凋亡因子p53、Bcl-2和Bax的表达来影响CHMp细胞凋亡相关通路,进而影响犬乳腺肿瘤的发生发展。     

犬乳腺肿瘤组织病理学观察及腱糖蛋白C表达的检测

为了探讨腱糖蛋白C(TNC)表达与犬乳腺肿瘤生物学关系,对23例犬乳腺肿瘤临床病例进行病理学观察及分类,然后采用免疫组化SABC方法检测TNC蛋白在23例犬乳腺肿瘤和2例犬正常乳腺组织中的表达情况。结果显示:23例病例中,良性肿瘤有7例,占30.43%;恶性肿瘤有13例,占56.52%;增生病变有3例,占13.05%。在良性肿瘤中良性混合瘤最多,为3例,其余2例为导管内乳头状腺瘤,1例复杂腺瘤及1例纤维腺瘤。恶性肿瘤中,5例未分化癌,3例癌肉瘤,2例筛状癌,2例固体癌,1例纤维肉瘤,1例混合瘤引起的癌。TNC蛋白主要表达于细胞外基质。犬恶性乳腺肿瘤中,TNC蛋白阳性表达率为46.15%(6/13);良性乳腺肿瘤中,其阳性表达率为42.85%(3/7);乳腺增生病变和正常乳腺组织中,未见其表达。研究结果表明,TNC蛋白可以为犬乳腺肿瘤的鉴别诊断提供参考。     

犬p27蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达分析

为分析犬p27蛋白在犬乳腺肿瘤组织中的表达情况,本研究构建了原核表达重组质粒pET-p27,进行重组蛋白的表达,并将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备了抗犬p27蛋白多克隆抗体。将制备的犬p27抗体对临床84例犬乳腺肿瘤组织中的犬p27蛋白表达情况进行了检测。结果显示,制备的抗体效价达1∶12 800以上;western blot检测显示,该多克隆抗体能够与重组蛋白发生特异性反应;免疫组织化学试验表明,犬p27蛋白在犬恶性乳腺肿瘤组织中表达率低于犬良性乳腺肿瘤组织,提示犬p27的表达水平可能与犬乳腺肿瘤的恶性程度相关,本实验为进一步研究犬p27蛋白的生物学功能奠定了基础。     

1例犬乳腺肿瘤的诊治

乳腺肿瘤是一种多发于老年母犬的肿瘤性疾病.一病例经临床检查结合血常规、血液生化检查,诊断为疑似乳腺肿瘤;采取犬乳腺全切除术及犬子宫卵巢摘除术治疗,并对切除的乳房肿物进行组织病理学检测,确定乳房肿物的性状为恶性乳腺肿瘤;术后患犬预后良好.及早发现并采取有效的治疗措施可治愈犬乳腺肿瘤.     

兔乳腺上皮细胞凋亡与泌乳量的相关性研究

为研究哺乳动物在泌乳期前后乳腺上皮细胞凋亡数量及泌乳量变化的规律,实验采用免疫组织化学SP染色法、流式细胞仪分析法检测母兔泌乳前后乳腺上皮细胞凋亡数量;采用仔兔吃奶前后窝体重变化差值法测量泌乳量。结果表明:泌乳全期乳腺上皮细胞凋亡数量呈现先下降再上升的趋势,泌乳量高峰期时细胞凋亡不显著,泌乳期兔乳腺上皮细胞的细胞凋亡与兔的泌乳量呈强负相关。     

检测p53基因诊断犬乳腺恶性肿瘤的初步研究

研究犬乳腺恶性肿瘤p53基因在体内的表达,探讨其与犬乳腺肿瘤恶性程度的相关性。根据GenBank中犬p53基因序列以及文献报道的高度保守区域,设计1对引物,同时以GAPDH基因序列作为内参,将临床采集的犬乳腺肿瘤组织进行p53基因PCR检测,分析p53基因的表达量变化趋势。结果表明,良性肿瘤组织p53基因的表达量极小;恶性肿瘤组织中的表达量随着其恶化程度明显增高。由此可推断,检测p53基因的表达量可作为诊断犬乳腺肿瘤、判断肿瘤恶化程度及预后的一个重要指标。     

GSK126对犬乳腺肿瘤细胞上皮间质转化的影响

探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)抑制剂GSK126对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。取对数生长期的犬乳腺肿瘤细胞(canine mammary tumor cells, CHMm cells),将不同浓度的EZH2抑制剂GSK126(0、10、20、40μmol·L^-1)作用于体外培养CHMm细胞后，培养48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和细胞克隆形成试验检测细胞增殖能力，Transwell法检测细胞迁移能力变化，Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡能力，qRT-PCR和Western blot方法检测CHMm细胞中凋亡相关因子Bcl-2和Bax、上皮间质标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、EZH2 mRNA和蛋白相对表达量。结果显示：与对照组相比，GSK126对CHMm细胞的增殖及迁移具有明显抑制作用，呈明显的剂量依赖性；与对照组相比...     

PTEN 基因在犬乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义

有关酪氨酸磷酸酶基因（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosometen,PTEN）在乳腺肿瘤中的检测在人医早有报道。为了研究PTEN基因在犬乳腺肿瘤组织中的表达情况,笔者运用实时荧光PCR定量检测了38例不同的犬乳腺肿瘤组织（包括15例良性乳腺肿瘤和23例恶性乳腺肿瘤）、4例正常犬乳腺组织。结果发现：PTEN基因在犬恶性乳腺肿瘤组织中表达量明显低于其在良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织中的表达量,两者差异极显著（P〈0.001）;PTEN在良性乳腺肿瘤组织中的表达与正常犬乳腺组织相比,差异不显著（P〉0.05）;发生了淋巴结转移的乳腺癌PTEN基因的表达量与未发生转移的乳腺癌组织的表达量间差异亦不显著（P〉0.05）,且PTEN的表达量与肿瘤组织的大小和发病动物年龄无关。结论：PTEN蛋白表达异常可能与乳腺肿瘤发生、发展相关,可考虑作为判断犬乳腺肿瘤生物学行为和预测的指标。     

SRC-3在犬乳腺癌中的表达及分析

犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种母犬肿瘤疾病。类固醇受体辅助活化因子-3(Steroid receptor activation factor 3,SRC-3)与多种肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关,已成为一个潜在的用于癌症诊断的癌基因标记物。本试验通过免疫组化的方法,检测了从中国农业大学教学动物医院收集到的68例乳腺肿瘤组织SRC-3的表达情况。结果显示,犬恶性乳腺肿瘤组织中的SRC-3蛋白表达率高于正常与良性乳腺肿瘤组织。结果表明,SRC-3在恶性肿瘤里高表达,可以作为犬乳腺肿瘤疾病诊断的参考指标。     

犬常见肿瘤流行病学调查及组织病理学诊断

为探讨犬常见肿瘤的发病规律,试验收集哈尔滨地区2016—2017年宠物医院部分犬肿瘤病例71例,采用组织病理学方法对犬肿瘤进行病理学诊断,并对患病动物的品种、性别、年龄、发生部位和饮食情况与肿瘤发生关系进行统计分析。结果显示,71例确诊肿瘤病例中,恶性肿瘤28例,包括鳞状上皮细胞癌3例,基底细胞癌5例,乳腺癌14例,淋巴瘤2例,肾母细胞瘤、精原细胞癌、生殖细胞癌、侵袭性血管黏液瘤各1例;良性肿瘤43例,包括良性乳腺肿瘤15例,纤维瘤10例,平滑肌瘤5例,乳头状瘤和精原细胞瘤各3例,造釉细胞瘤、耵聍腺瘤、脂肪瘤、结节样增生、性索间质细胞瘤、颗粒细胞瘤、肛周腺瘤各1例。上述病例中,乳腺和皮肤是犬肿瘤的高发部位,分别占全部患犬的40.8%和34.0%;患病犬年龄1~16岁不等,平均发病年龄为9.1岁,7岁以后是肿瘤的高发期,中老年犬仍为主要发病群体,但低龄犬发病数量上升;各品种犬均可发生肿瘤,其中杂种犬发病率最高,其次是贵宾犬和京巴犬,且主要为乳腺肿瘤;饮食习惯主要以剩饭剩菜类和肉拌饭类为主,分别占患犬总数的39%和30%;部分肿瘤类型与犬的性别、是否绝育有关,如乳腺肿瘤多发生于未绝育的老年母犬。本研究结果为犬肿瘤的流行病学及诊断提供了参考依据,对犬肿瘤的预防和诊断有一定的借鉴意义。     

SOX2敲低对犬乳腺肿瘤CHMm细胞增殖和迁移的影响

为探究SOX2对犬乳腺肿瘤细胞系CHMm增殖及迁移能力的影响,采用脂质体将siRNA转染至犬乳腺肿瘤细胞系CHMm降低其SOX2的表达,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室迁移试验检测细胞的迁移能力,Western blot检测NF2和YAP的表达。结果表明,成功建立了SOX2敲低的犬乳腺肿瘤细胞模型,敲低SOX2的犬乳腺肿瘤细胞的增殖能力和迁移能力均显著降低(P<0.05);敲低SOX2的犬乳腺肿瘤细胞中NF2的表达显著升高(P<0.05),Hippo信号通路下游效应分子YAP的表达显著降低(P<0.05)。说明SOX2可通过NF2/YAP影响犬乳腺肿瘤细胞增殖和迁移,进一步阐明了SOX2在肿瘤发生中的作用机制。     

IGFBP-2 PTEN蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达

为了探讨IGFBP-2、PTEN蛋白表达与犬乳腺肿瘤生物学行为关系。采用免疫组织化学PV法对临床收集的71例乳腺肿瘤,4例非典型性增生和6例健康犬乳腺组织中IGFBP-2和PTEN蛋白的表达水平进行检测,并分析它们与临床病理特征之间的关系。结果 IGFBP-2和PTEN蛋白染色主要定位于胞浆,少量可见于胞核和胞膜。IGFBP-2和PTEN蛋白在犬正常、增生乳腺组织中和良性乳腺肿瘤中的表达差异不显著(P0.05),但与恶性乳腺肿瘤相比二者表达差异极显著(P0.01)。IGFBP-2和PTEN蛋白表达与患犬年龄、肿瘤大小和预后无关。表明联合检测IGFBP-2、PTEN表达可作为犬乳腺癌生物学行为判断的重要指标。     

2例犬肝胆管细胞癌的病理学诊断

肝胆管细胞癌是来源于肝胆管上皮细胞的恶性肿瘤,在多物种中都有发生。笔者运用组织病理学和免疫组织化学的方法,对2例犬肝肿瘤进行了诊断。结果显示：肝肿瘤眼观均为圆球形白色肿块,组织病理学检查肿瘤组织由呈腺管状排列的瘤细胞构成,有的腺管中央有坏死脱落的细胞,有的有黏液样物质,腺管间以薄的纤维结缔组织分隔,瘤组织有大片的坏死。瘤细胞多呈卵圆形,细胞核大、卵圆形,核分裂象多见,瘤细胞的CK19阳性表达,而CK18和AFP呈阴性表达。根据组织病理学和免疫组织化学检查结果判断,2例犬肝肿瘤为肝胆管细胞癌,本研究为犬肝肿瘤诊断积累了病理学资料。     

RNAi沉默接触蛋白-1对犬乳腺肿细胞系CHMm增殖及迁移的影响

为探究接触蛋白-1(CNTN1)对体外培养的犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖及迁移能力的影响,本研究利用RNAi技术沉默CNNT1基因在犬乳腺肿瘤CHMm细胞中的表达,采用CCK8法检测CHMm细胞增殖能力、细胞划痕法检测CHMm细胞迁移能力,western blot检测CHMm细胞中E-cadherin蛋白含量。结果显示CNTN1沉默后,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm增殖无明显影响,但能够导致使细胞迁移能力显著减弱,细胞中E-cadherin蛋白含量明显增加。研究表明CNTN1对犬乳腺肿瘤CHMm增殖调节无明显作用,对犬乳腺肿瘤细胞CHMm作用主要是通过降低E-cadherin蛋白的表达增强体外培养的肿瘤细胞迁移力,为犬乳腺肿瘤的治疗提供新的靶点。     

犬乳腺肿瘤中MUC1的表达及临床意义

为了检测MUC1在乳腺肿瘤的侵袭、转移及病理分级中的作用,本研究通过real-time PCR检测了47例犬乳腺肿瘤组织(20例良性,27例恶性)和3例健康犬乳腺组织中MUC1基因的转录情况,通过IHC检测MUC1在犬乳腺组织中的表达情况,并分析二者与肿瘤恶性程度分级的关系。结果发现:MUC1基因和MUC1在犬乳腺肿瘤组织中高表达,且在不同的恶性分级中差异显著(P0.05)。研究显示MUC1基因和MUC1可作为犬乳腺肿瘤诊断和恶性程度评估的重要指标之一。     

38例犬肿瘤的病理诊断及分析

收集深圳市2010年－2012年部分宠物医院的犬肿瘤病例41例，采用组织病理学方法对犬肿瘤病例进行组织学分类，并对患病动物的年龄、性别和发生部位进行了统计分析。38例确诊肿瘤病例中，皮肤肿瘤有19例，包括鳞状细胞癌4例、基底细胞癌5例、乳头状瘤3例，皮脂腺瘤和肛周腺癌各2例，脂肪瘤、黑色素瘤、角化棘皮瘤各1例；乳腺肿瘤9例，包括乳腺癌3例、乳腺鳞状细胞癌2例、乳腺癌肉瘤2例、黏液癌1例，患犬以雌性为主；其他部位肿瘤分别有纤维肉瘤2例，血管瘤、肺癌、淋巴瘤、睾丸精原细胞瘤、睾丸支柱细胞瘤、组织细胞癌、鳞状细胞癌、乳头状瘤各1例。上述结果显示，犬肿瘤的高发部位是皮肤，其次是乳腺，其发生年龄以7岁以上为多，在发病动物的品种上没有明显差别；除乳腺肿瘤外，其余肿瘤的性别差异不大。本研究为犬肿瘤的流行病学及诊断提供了参考依据。     

大鼠表皮干细胞的分离及鉴定

在试验中采用组织块法分离培养大鼠表皮干细胞,观察所培养的细胞形态,免疫组织化学方法检测CK15、P63、α6-integrin表达情况并用α6-integrin标记表皮干细胞经流式细胞仪检测其标记率,同时对1~6代表皮干细胞在不同培养时间计数。结果表明,采用组织块法能分离得到大鼠表皮干细胞,且获得的细胞生长良好;干细胞标记物CK15、α6-integrin、P63呈阳性。经流式细胞仪检测得知,黏附细胞被α6-integrin标记的几率为80%,而未黏附细胞被α6-integrin标记的几率仅为2%,二者相差较大。