不同种公牛X／Y精子分离效果及对体外受精能力的影响

本研究首先时比了3头种公牛的X/Y精子分离效果,并通过常规冻精和性控冻精的活力检测,来评价流式细胞仪分离及冷冻处理对不同种公牛精子分离效果的影响.应用体外受精试验,探讨了不同种公牛个体的常规冻精和分离冻精的受精和胚胎发育能力.试验结果表明,不同种公牛个体间除分离准确率外,精子的分离速率(4.1×103/s vs 4.5×103/s vs5.3×103/s,P<0.05)和死精率(19.3%vs 14.5%vs 11.0%,P<0.05)都存在显著差异.三头种公牛的性控冻精在体外培养过程中,精子活力的下降速率要显著快于常规冷冻精液组.不同种公牛个体的分离冻精组在4小时的精子活力也有显著差异(1号种公牛9.1%vs 2号种公牛22.1%、3号种公牛21.5%,P<0.05).此外,常规冻精和性控冻精在受精后的卵裂率和囊胚率存在显著差异(1号种公牛:64.0%vs 41.6%,26.9%vs 19.3%;2号种公牛:67.3%vs 52.3%,29.2%vs26.5%;3号种公牛:60.3%vs 43.1%,27.3%vs 29.9%).上述结果表明,不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离冷冻处理的耐受性存在显著差异,造成其解冻后活力和存活时间不同程度的下降;但在体外受精试验中,3头种公牛的分离精子仍具有正常的受精能力,并能支持胚胎发育到囊胚阶段.综上结果表明,选择适宜的种公牛和降低分离及冷冻处理对精子的损伤,对于提高精子的分离效率、分离精液的品质和体外受精效率都有着重要的意义.     

牛细管冷冻精液对提高解冻后精子活力及增强优秀公牛利用率的探讨

当前评定公牛精液品质的主要依据是采精量、原精活力、精子密度、精子的冻后复活率(冻后活力/原精活力)等项指标。而公牛由于个体间的差异使以上各项评定指标,尤其使冻后解冻活力出现较大差异。精液冷冻主要目的是为充分利用优良种公牛的精液,以先进的手段--深冷技术,制成冻精剂型加以保存,然后解冻(40℃水浴)复     

马鹿X/Y精子分离及人工授精技术研究

对马鹿X/Y精子进行分离、冷冻保存和人工授精,探讨马鹿鲜精保存运输、精子分离以及性控冻精的受胎及后代性别控制准确率.结果表明:①马鹿鲜精中加入三联抗生素、18℃恒温保存最有利于精子活力的保持.②马鹿鲜精死精率与X/Y精子分离速度有明显相关性,死精率越低,分离速度越快.③来自同一马鹿供体的3组样品分离精子解冻后活力(0.61 vs 0.60 vs 0.65)及4 h时活力(0.30 vs 0.30 vs 0.32)无显著差异(P>0.05).④应用马鹿性控冻精对80只发情母鹿进行子宫角深部输精,有55只母鹿妊娠期满产下仔鹿,情期受胎率67.5%,均为雄性,性别控制准确率100%.结论:分离马鹿X/Y精子的冷冻保存、人工授精,在技术上已达到产业化应用水平,通过进一步改善后,可以大规模推广应用.     

昆明气候节律对西门塔尔牛精液品质的影响

[目的]西门塔尔牛分布极广,本文旨在分析云南昆明气候条件对西门塔尔牛精液品质的影响,以便进一步提高种公牛冷冻精液质量。[方法]对西门塔尔牛2011年至2016年不同季节和节气的射精量、原精活力、精子密度、解冻活力进行测定、记录和统计分析。[结果]结果得出,西门塔尔牛春季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.82±2.129mL(n=1729)、66.75±7.620%、11.5±7.955亿/mL和37.94±2.642%(n=1417);夏季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.89±2.048mL(n=1849)、66.05±7.314%、10.95±4.7450亿/mL和37.56±2.638%(n=1550);秋季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.89±3.335mL(n=1819)、65.81±8.687%、10.10±4.621亿/mL和37.82±2.686%(n=1537);冬季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.94±2.154mL(n=1847)、66.77±6.709%、10.40±5.056亿/mL和37.75±2.557%(n=1622)。[结论]西门塔尔牛精子活力和密度受气候和季节变化的影响明显。     

不同种公牛精子分离效果的比较

本研究对使用经流式细胞仪分离的4头种公牛精液的分离速率、死精率以及分离后的雌性准确率进行了比较分析,结果表明,3号种公牛的精子分离速率显著高于1号和2号种公牛(P＜0.05);1号种公牛的死精率显著高于2号和3号种公牛(P＜0.05).但是3头种公牛精液分离后的雌性准确率没有显著差异.4号种公牛的死精率达到32％,所以没有分离.同时对3头种公牛精液分离及解冻后的活率进行了比较,结果表明,3头种公牛精液经流式细胞仪分离后鲜精活率差异不显著,冷冻后0h活率差异不显著,而在冷冻4h后的精子活率差异显著(p＜0.05).     

L-肉毒碱对牛精液体外保存时间及品质的影响

精液体外孵育保存会使精子品质下降,抗氧化剂L-肉毒碱可促进激活的脂肪酸从细胞质到线粒体基质的转运,减少ROS产生和脂质过氧化反应的发生。研究分析了牛精液体外保存过程中不同浓度L-肉毒碱(LC)(0、2、10和15mmol/L)和不同孵育时间(2、4、6h)对牛精子活力、质膜完整性、线粒体活性和顶体完整性的影响。结果表明:与对照组相比,在牛精液体外保存稀释液中添加10mmol/L和15mmol/L的LC均可显著(P0.05)提高精子活力(33.0%vs 45.6%,42.4%)、质膜完整率(61.2%vs 73.6%,68.4%)和顶体完整率(81.4%vs 88.4%,86.3%),而线粒体活性则是10 mmol/L LC组效果最好;将筛选的最佳浓度10mM LC组于27℃体外孵育2、4、6h后,其精子的活力、质膜完整率和线粒体高膜电位百分率均显著高于对照组(P0.05),顶体完整率仅在孵育6h后与对照组差异不显著(P0.05)。由此可见,LC可保护精子功能和结构免受损伤,不仅能改善牛精液体外保存的品质参数,又可延长牛精液体外保存的时间。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。     

不同冷冻保护液和解冻温度对猪精液冷冻效果的影响

在BF5稀释液中分别添加不同水平的牛血清白蛋白(BSA)(0.5,1,1.5 g/L)、二甲基乙酰胺(DMA)(0.5%,1%,1.5%)、甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)(1,2.5,5 g/L),对成年健康猪精液进行冷冻保存,于不同温度(37,50,70℃)解冻后分别检测冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性、项体完整率、线粒体活性.结果显示,0.5 g/L BSA组冷冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性均高于其他组,但差异不显著(P0.05).1% DMA组冷冻后精子活率和活力显著优于1.5%DMA组(P＜0.05),同时也高于对照组(3%甘油)冻后精子活率和活力,但差异不显著.不同质量浓度CLC组冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性和线粒体活性与对照组相比差异不显著.50℃和70℃解冻组精子的活率和线粒体活性显著高于37℃解冻组的精子;50℃解冻组精子的活力和质膜完整率显著高于其他2组.因此,在猪精液冷冻稀释液中,用DMA可以代替甘油作为渗透性保护剂,且以1%DMA,50℃解冻最佳.     

关于公牛冷冻精液冻后存活精子数的探讨

当前评定公牛精液品质的主要依据是采精量、原精活力、精子密度、精子的冻后复活率(冻精活力/原精活力)等项指标。由于不同公牛精液活力、密度、及冻后复活率不同,总的精液品质优劣就无法衡量。在实际工作中,我们常常发现生产性能和外貌优秀的公牛,由于精液品质低     

物候节律对河流型水牛精液质量影响的分析

对摩拉水牛和尼里水牛2006—2014年不同季节和节气的射精量、原精活力、精子密度、解冻活力进行测定、记录和统计分析。结果:河流型水牛春季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(4.80±2.063)m L(n=2 216)、(57.61±14.727)%(n=2 209)、(7.79±4.165)亿/m L(n=2 213)和(36.00±2.581)%(n=1 413);夏季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(53.28±2.311)m L(n=2 392)、(60.32±10.515)%(n=2 379)、(8.26±4.250)亿/m L(n=2 389)和(35.99±2.506)%(n=1 823);秋季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(5.28±2.161)m L(n=1 977)、(61.15±16.462)%(n=1 965)、(8.28±4.212)亿/m L(n=1 977)和(36.56±9.897)%(n=1 517);冬季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力平均分别为(5.02±2.019)m L(n=2 350)、(57.11±18.910)%(n=2 337)、(7.68±3.901)亿/m L(n=2 344)和(36.21±2.615)%(n=1 476)。     

解冻稀释液及孵育温度对冷冻-解冻后犬精液品质的影响

实验旨在比较解冻后解冻稀释液(Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液)的添加比例(1:0、1:1、1:2)对精液品质的影响,并比较了4种孵育温度(37、34、25、4℃)对精子寿命及精子活力的影响,探索合适的冷冻-解冻后犬精液的孵育条件。结果显示:解冻稀释液的添加与否及添加比例对解冻后孵育30 min的精子活力、活率、质膜完整率及顶体完整率均无显著影响;解冻后,在不同温度下孵育30 min,4组精子活率和质膜完整率无显著差异,而4℃孵育温度下精子活力和顶体完整率高于37℃(P0.05);解冻后孵育2 h,4℃孵育温度下的精液品质(精子活率、精子活力、质膜完整率、顶体完整率)最佳(P0.05),34℃和25℃组之间差异不显著,而37℃组的精液品质最差。结果表明,解冻稀释液对解冻后精液的孵育效果无影响,而解冻后精液的孵育温度以4℃最佳。     

近交五指山小型猪精液冷冻保存技术的研究

用液氮熏蒸法在氟板上制作冻精颗粒,以解冻后的精子活率、活力和质膜完整性为判定指标,比较4种冷冻稀释液及不同冷冻-解冻程序对五指山小型猪精液冷冻的效果。结果表明:①Ⅳ号冷冻稀释液冷冻解冻后精子的活率(0.610±0.036)、活力(0.427±0.025)和质膜完整性(0.503±0.015)均显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号冷冻稀释液(P<0.05)。②实验中精液在4℃冰箱中平衡降温2 h的精液精子活力、质膜完整性均好于在17℃平衡3 h再放入4℃冰箱中平衡2 h的解冻效果,而且精子活率差异显著(P<0.05)。③湿解法的效果优于干解法。     

应用微流路精子分离器优选奶牛性控精子的研究

为奶牛性控精子体外受精提供具有活力的精子,筛选出高效的精子分离方法来提高体外受精效率。将市售的冷冻奶牛性控精液解冻、精子浓度调节为1×107cells/m L后,利用微流路精子分离器(microfluidic sperm sorter,MFSS)分离精子,检测分离后的精液质量并分析精子的线粒体膜电位变化。精液样本通过MFSS分离后,精子活力由35.28%提高到57.24%(P0.05);直线速度由23.91μm/s提高到32.76μm/s(P0.05)。此外,MFSS的C室中精子线粒体相对活性为1.56,显著高于分离前A室(0.28)的(P0.05)。综上结果 ,微流路精子分离器可以分离出既有较高活力又具有高活性的线粒体的奶牛性控精子,精子质量得到较大的改善。     

牛血清白蛋白对犬精液冷冻保存效果的影响

为了研究牛血清白蛋白(BSA)对犬精液冷冻保存效果的影响,试验配制含有不同浓度(0、3%、5%、7%)BSA的精液冷冻稀释液用于保存犬精液,测定冷冻-解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量及线粒体膜电位(MMP)等指标。结果表明：3%和5%BSA组冷冻-解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和T-AOC均显著高于对照组(P<0.05);3%BSA组MDA含量显著低于其他各组(P<0.05),线粒体膜电位值显著高于其他各组(P<0.05);除精子活力外,7%BSA组和对照组之间各项指标均差异不显著(P>0.05)。说明在犬精液冷冻稀释液中添加BSA能有效改善冷冻-解冻后精液品质,对提高精子抗氧化能力及代谢能力都有显著效果,BSA的最适添加浓度为3%。     

绵羊精液不同处理方法对体外受精效果的影响

试验通过开展绵羊低温保存精液和冷冻精液制备精子对体外受精效果影响的研究,旨在探讨制备绵羊IVF优质精液的新方法。结果表明:利用低温保存精液和冷冻精液,分别采用Percoll离心法和上游法制备精子进行体外受精,低温保存精液上游法的卵裂率78.6%显著高于低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法和60.2%、62.3%,(P<0.05),极显著高于冷冻精液上游法21.1%,P<0.01;低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法组间无显著(P>0.05)差异,但均显著(P<0.05)高于冷冻精液上游法。低温保存绵羊精液可用于制备IVF精子,上游法优于Percoll离心法,可显著提高体外受精效果。     

金华猪精液冷冻保存技术研究

本试验用0.5 mL细管作为冷冻载体对金华猪精液进行冷冻保存研究,比较3种冷冻稀释液及不同冷冻方法、解冻程序对金华猪精液冷冻的效果,以解冻后的精子活力、畸形率和质膜完整率为判定指标。结果表明:Ⅱ、Ⅲ号冷冻稀释液处理组解冻后精子的活力、畸形率和质膜完整性都明显地高于Ⅰ号冷冻稀释液(P0.05);Ⅱ号冷冻稀释液和Ⅲ号冷冻稀释液处理组之间没有明显差异(P0.05)。采用程序冷冻仪冷冻法,使用Ⅲ号冷冻稀释液冷冻保存精子,并在60℃,8 s条件下水浴解冻精子后,精子活力和质膜完整率最高分别为42.3%和50.3%,畸形率最低为17.7%。因此,采用程序冷冻仪冷冻法,使用Ⅲ号冷冻稀释液,在60℃,8 s条件下水浴解冻方法较为适合0.5 mL细管金华猪精液冷冻保存及解冻。     

离心条件对犬精液冷冻保存精子活率的影响

通过手握法,采集的精液汇集,分成3等份,分别用3种离心条件离心。对离心后的精液进行稀释冷冻。解冻后保存在37℃水浴中,0~6h测定精子活率、对精子活力进行评估。结果表明,解冻后放入37℃水浴中,立即检查,3种离心处理组在0h精子活力、活率差异不显著（P〉0.05）。精子活力、精子活率随保存时间的增加明显下降（P〈0.05）,3组之间变化差异不显著（P〉0.05）。     

在4℃降温平衡过程中0.2g/L咖啡因与精子共孵育时间对猪颗粒冻精质量的影响

实验旨在探讨在猪精液于4℃平衡2 h过程中0.2 g/L咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h,对颗粒冻精解冻后精子活率、活力、质膜完整性和顶体完整性以及解冻后精子体外存活时间等指标的影响,以期进一步提高猪颗粒冻精质量。实验结果表明,在精液冷冻之前,咖啡因不同平衡时间组的精子活率和活力都呈现出升高趋势,但与对照组差异不显著;咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组的精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组,前3组之间差异均不显著。而颗粒冻精解冻后,咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组精子活率和活力均显著高于对照组,其中共孵育1 h组显著高于其他3组(P0.05),共孵育2 h组和0.5 h组间差异不显著(P0.05);共孵育2 h组精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组和共孵育0.5 h、1 h组(P0.05),但后3组之间差异不显著;共孵育2 h组精子存活时间显著低于对照组、共孵育1 h和0.5 h组(P0.05),其中共孵育1 h组精子存活时间最长,达7 d以上。总之,在精液4℃降温平衡过程中咖啡因与精液共孵育1 h对冷冻后精子质量最有利,解冻后精子活率和活力显著高于其他各组,且解冻后精子体外存活时间最长。     

分离和冷冻处理对牛性控精液线粒体膜电位的影响

采用JC-1染色结合流式细胞仪和激光共聚焦显微镜,分别对4组牛精液样品(鲜精、分离精液、普通冻精和分离冻精)的线粒体膜电位进行检测,研究分离和冷冻处理对牛精子线粒体膜电位的影响。结果表明:分离处理对A和B种公牛的精子线粒体膜电位影响不显著(P0.05),但对C种公牛影响显著(P0.05);而冷冻处理后,A、B和C种公牛的线粒体膜电位均显著变化(P0.05);且鲜精时线粒体膜电位无显著差异的A和B种公牛,分离后线粒体膜电位出现显著差异(P0.05)。当精液从采集到处理的间隔时间在24h以内时,分离处理后精子线粒体膜电位无显著性变化(P0.05),但同样时间间隔内冷冻处理后,精子线粒体膜电位显著变化(P0.05)。实验表明和分离处理相比,冷冻处理对精子线粒体膜电位的影响更为显著,且不同种公牛对分离和冷冻处理的耐受性不同。     

羊冷冻精液的制作技术研究

通过对羊精液冷冻稀释液组成成分的研究,筛选合适的稀释液配方,研究精子平衡时间、解冻温度、稀释倍数和稀释方法等对精子活力的影响。结果如下:①解冻后的精子活率以加入Tris的一组稀释液活率最高,与其他组相比差异极显著(P<0.01)。②精液的平衡时间以平衡4～5h解冻后活率最高。③在45℃～60℃的水温条件下,取得了精子复苏率74.5%的解冻效果。④选用5种稀释比例(精液:稀释液),分别为1∶4、1∶5、1∶6、1∶6、1∶8,结果1∶8的稀释比例精液解冻后活率最高,达到了70%以上。