细菌素产生菌的分离鉴定及细菌素生物学特性的初步研究

为筛选产生细菌素的细菌,本研究以粪纤维单孢菌NCTC7547株作为指示菌,从韶关市某市场环境和动物体表样本筛选对指示菌具有抑制活性的细菌菌株,结果共筛选到48株菌,其中有2株菌对指示菌的抑菌圈直径为40 mm,并且均对红斑丹毒丝菌具有抑制作用,其中1株菌对猪链球菌血清型9型菌株和实验中偶然污染的变形杆菌也具有抑制作用。通过对活性物质产生菌的形态观察、革兰氏染色镜检、生理生化试验和16S rDNA序列鉴定确定2株菌均为鸡葡萄球菌。2株菌产生的活性物质对链霉蛋白酶敏感的特性表明了它们的蛋白质属性,并且活性物质初提物能够抵抗65℃、80℃及100℃15 min处理,121℃处理仍未使初提物活性完全丧失;pH3.0、pH9.0和pH11.0作用后该初提物活性无明显变化。细菌素特异性结构基因的PCR检测表明2株菌产生的活性物质极有可能为鸡皮素。本研究对进一步筛选高效和可能具有临床意义的细菌素奠定了基础。     

一株产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

从市售3种酸乳中分离得到4株乳酸菌,通过发酵液的抑菌试验确定S1菌株为细菌素产生菌,综合S1菌株的形态学特征、生理生化特征,将其初步鉴定为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。在排除过氧化氢和有机酸对指示菌的抑制作用后,确定该菌株产生的抑菌物质为细菌素。该细菌素对大肠杆菌具有较好的抑制作用。     

细菌素及其在蚕业上的应用前景

细菌素是细菌代谢产生的抑菌活性产物之一,既可以由革兰氏阴性菌产生,也可以由革兰氏阳性菌产生.细菌素通常只作用于产生菌同种或亲缘关系很近的其它菌株的一种蛋白类抗菌物质,它是一种多肽或多肽与糖或脂的复合物.许多广谱细菌素的发现使细菌素的概念得到了扩大.作为一种细菌外分泌细菌素的现象很早就被发现,利用细菌素进行动植物病虫害的防治是近十几年发展起来的一个研究方向,作为一种新的生物控制因素,细菌素由于无毒副作用、无残留、无抗药性、不污染环境等优点而被各国学者给予极大关注和兴趣.蚕业生产中的两个生物主体--家蚕和桑树同样存在许多病害,因此在蚕业领域开拓细菌素的研究,将具有十分积极的意义.     

多黏菌素E对鸡源性大肠杆菌和沙门菌的PAE及其机制初探

从发病鸡的粪便中分离出具有多重耐药性的大肠杆菌O18和鸡白痢沙门菌O2,检测多黏菌素E的最小抑菌浓度(MIC)和抗生素后效应(PAE),测定多黏菌素E接触过的细菌各组乳酸脱氢酶(LDH)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)活性变化、电镜观察细胞膜形态、巨噬细胞吞噬细菌数量和细菌对Caco-2的黏附力。多黏菌素E作用后,菌液中LDH和γ-GT活性显著性增高(P0.01),细菌胞膜出现破损或缺失,细菌形态改变,被巨噬细胞吞噬的菌量明显增多(P0.01),细菌对Caco-2的黏附力显著下降(P0.01)。多黏菌素E对鸡源性多重耐药菌株存在PAE,推测其产生机制为破坏细菌细胞膜,改变细菌形态,促进巨噬细胞对细菌的吞噬能力增强,降低细菌对细胞黏附力。     

硫酸黏菌素对土壤细菌耐药性的影响

为了解硫酸黏菌素在环境中残留对土壤细菌的影响,本试验建立土壤生态模型,施加不同浓度硫酸黏菌素,并在作用于土壤的14 d、35 d、70 d分别采集土壤,采用琼脂稀释法进行细菌对硫酸黏菌素的敏感性试验,采用药敏纸片扩散法进行细菌对抗菌药物的敏感性试验。结果表明,随着硫酸黏菌素施加浓度的逐渐增大,耐药菌数量逐渐增多;19种抗菌药中,硫酸黏菌素敏感菌对其中10种抗菌药的敏感性极显著高于硫酸黏菌素耐药菌(P0.01)。     

鸡源乳酸菌细菌素的分离筛选及鉴定

为了分离鉴定产乳酸菌细菌素,采用双层琼脂扩散法,对从健康鸡肠道内容物分离到的68株乳酸菌进行筛选,获得对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡白痢沙门菌均有抑制作用的17株乳酸菌,在排除酸、过氧化氢等因素作用后仍具有较强抑菌活性,表明发酵液中还有其他抑菌活性物质的存在,用蛋白酶处理上清液后有6株菌的抑菌效果消失,表明抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素类物质。筛选出的菌株所产抑菌物质是一种广谱细菌素,它们对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有较强抑制效果。结合形态鉴定、生理生化特性试验以及16S rRNA序列同源性分析鉴定菌株LABJN02、LABJN05、LABJN06和LABJN14分离菌为唾液乳杆菌,LABJN16为约氏乳杆菌,LABJN31为卷曲乳杆菌。细菌素作为潜在的抑菌物质,与其产生菌一起在平衡肠道菌群中具有重要意义。     

粪肠球菌产伏尔加霉素E5的生物学特性研究

为了确定分离自健康猪胃肠道粪肠球菌产生的细菌素伏尔加霉素E5(enterocin E5)的生物学特性,本研究检测了该细菌素对热、酸碱、酶类的耐受性及其抗菌谱,enterocin E5经过121℃高压处理10min对指示菌抑菌活性没有影响;细菌素于pH 2～12作用后,对大肠埃希菌仍有抑菌活性,最强的pH抑菌活性范围为pH 4～6;enterocin E5对胰蛋白酶和蛋白酶K处理敏感,过氧化氢酶、脂肪酶和淀粉酶对其抑菌活性没有影响;enterocin E5对21株动物源病原微生物具有抑制作用,革兰阴性病原菌包括大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、多杀性巴氏杆菌等,特别对产生多重抗药性的3株鸡伤寒沙门菌具有明显的抑菌活性。抑制革兰阳性金黄色葡萄球菌、马腺疫链球菌、猪链球菌,对炭疽芽胞杆菌弱毒株和蜡样芽胞杆菌产生显著的抑菌活性。结果表明,enterocin E5对酸碱是比较稳定的,具有很宽泛的pH耐受范围,属于热稳定IIa亚型细菌素,能够作为一种抗菌物质防控动物源细菌病。     

枯草芽孢杆菌细菌素的分离、表达及稳定性分析

旨在分离枯草芽孢杆菌及其所产细菌素,并分析重组表达后的细菌素的抑菌活性和稳定性。通过牛津杯扩散法筛选羊驼粪便中高产细菌素的芽孢杆菌;借助16S rRNA鉴定分离菌;采用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、SDS-PAGE、质谱分析等技术获得细菌素的氨基酸序列;利用大肠杆菌表达系统对细菌素进行体外表达,并利用牛津杯扩散法测定其抑菌活性和稳定性。结果显示,分离菌是一种枯草芽孢杆菌,命名为枯草芽孢杆菌SXAU18,其可产生抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌生长的细菌素;枯草芽孢杆菌SXAU18所产细菌素可能是分子量为10～20 ku的DarA蛋白和两种未知蛋白,属于类细菌素的范畴,将未知蛋白分别命名为BLIS SXAU181和182;经原核表达的BLIS SXAU181和182主要以可溶性上清蛋白形式表达,纯化后为单一条带;重组BLIS SXAU181蛋白没有抑菌活性,重组BLIS SXAU182蛋白具有良好的抑菌活性,且具有耐高温、耐酸碱、耐人工胃液和肠液的的特性。综上,本研究从枯草芽孢杆菌SXAU18分离到具有抑制革兰阳性菌生长活性的细菌素,且重组表达后的BLIS SXAU18...     

硫酸黏菌素对培养分离的土壤优势细菌的影响

随着抗生素在畜禽养殖业上的广泛应用,药物残留对生态环境的潜在隐患日益突出.为了了解硫酸黏菌素在环境中残留对土壤细菌数量和耐药性的影响,本实验对硫酸黏菌素作用35 d后用纯培养法分离的土壤细菌进行了计数,并对作用70 d后的土壤优势细菌进行了抗菌药物敏感性试验.结果表明,实验组的土壤细菌总数均低于对照组,且培养分离的细菌数量与药物浓度成反比;在供试的13种抗菌药中,硫酸黏菌素敏感菌对其中的11种药物的敏感性与硫酸黏菌素耐药菌差异显著（P＜0.05）.     

伴侣动物源细菌质粒介导的黏菌素耐药机制研究进展

临床应用中,抗菌药物不合理使用导致细菌很容易产生耐药性甚至多重耐药性。由于碳青霉烯类药物的耐药性不断上升,黏菌素被视为对抗多重耐药菌的最后一道防线。然而,宠物和人类中已出现质粒介导的新型移动黏菌素抗性基因,产生的获得性耐药菌株将严重影响黏菌素的疗效,增大耐药基因跨物种传播的风险,给公共卫生造成重大威胁。论文从目前黏菌素的使用情况、耐药性形成和传播机制以及黏菌素耐药菌流行现状等几方面进行综述,以期为伴侣动物临床用药和耐药性转移的风险评估提供参考。     

混合青贮紫花苜蓿与骆驼刺中一株植物乳杆菌的鉴定

从混合青贮紫花苜蓿与骆驼刺中分离到一株乳酸菌,经常规形态学、生理生化特征的鉴定、及16S rDNA序列分析表明该菌为植物乳杆菌。通过抑菌试验认为该细菌产生类细菌素。     

沙门菌的“拉链”与“触发”入侵机制及其调控

沙门菌可以通过"拉链"与"触发"2种机制入侵宿主细胞,"触发"机制依赖于三型分泌系统,"拉链"机制依赖于细菌表面蛋白(侵袭素)与细胞膜受体的相互作用,两者都是通过刺激宿主细胞的信号转导途径,产生一系列的细胞反应,最终导致细菌内化。Rck、PagN和HlyE是目前被鉴定的3种侵袭素。沙门菌入侵基因的表达受转录水平的几个环境因素影响。     

致病性哈氏弧菌生物学及分子特征

从2尾病死的观赏用长鳍真鲨中分离到大量优势生长的细菌,致病性试验表明该菌对牙鲆及大菱鲆均有较强的致病性.在对分离菌进行了形态特征、理化特性、胞外酶及溶血素活性等生物学性状检验的同时,使用API-ID32E对分离菌做了进一步鉴定;同时,测定了该菌的16S rRNA和gyrB基因序列,分析了与相关细菌16S rRNA和gyrB基因序列的同源性,构建了系统发生树,比较了2种基因在相似细菌的检测和鉴别能力,结果gyrB基因用于细菌种间鉴定更具优越性.根据分离菌的表型特征及分子特征,判定分离菌为弧菌属(Vibrio Pacini 1854)的哈氏弧菌(Vibrio harveyi Johnson and Shunk 1936).胞外酶及溶血活性检测表明,分离菌均能产生淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、DNA酶和卵磷脂酶,在含7%家兔脱纤血液营养琼脂培养基上呈β型溶血.以哈氏弧菌溶血素基因的保守区段设计的特异性引物,能够扩增出特异性片段.     

黏菌素对鸡源性铜绿假单胞菌的抗生素后效应及其机制初探

从发病鸡的粪便中分离出具有多重耐药性的CHNⅣ型铜绿假单胞菌,测定黏菌素的最小抑菌浓度(MIC)和抗生素后效应(PAE),以4×MIC黏菌素作用临床分离株,除药后分别继续培养0、1、2 h,无菌水代替黏菌素设为空白组。检测细菌细胞膜完整性,巨噬细胞吞噬细菌数量和细菌对Caco-2细胞的黏附力。与空白组相比,黏菌素作用后细菌细胞膜发生严重损坏,被巨噬细胞吞噬的细菌数量明显增多,细菌对Caco-2的黏附力显著下降。上述指标随着细菌除药后培养时间的延长而改变。说明黏菌素对鸡源性铜绿假单胞菌存在PAE,且可能与细菌细胞膜被破坏,细菌对细胞黏附力下降和巨噬细胞对其吞噬能力增强有关。     

细菌素在动物疾病防治中的作用和机理

当前,抗生素滥用已经严重地困扰着养殖业健康发展,使得细菌的耐药性不断增强。在这种情况下,细菌素在动物疾病防治中就发挥着重要的作用。细菌在代谢过程中,核糖体会产生一种蛋白质或多肽,这种蛋白质或多肽具有杀菌或抑菌作用,它就是细菌素。细菌素不仅对细菌有作用,对已经具有耐药性的细菌仍具有抑杀作用。因此,了解细菌素的作用机理,对于动物疾病的防治效果尤为重要。     

葡萄球菌素及其应用研究进展

细菌素是由某些细菌产生的、由核糖体合成的一类对其他细菌有抑杀活性的蛋白类或多肽类物质,细菌素产生菌株同时进化了一套对自身细菌素有免疫的保护系统,使其不受自身细菌素的作用。葡萄球菌是医学和兽医学一种很重要的革兰阳性菌,由葡萄球菌产生的细菌素统称为葡萄球菌素。由于葡萄球菌素对其他微生物有广谱活性,并且在食品和农业方面具有潜在的应用价值,使其在近些年来逐渐成为研究热点。本文对葡萄球菌素的研究进展及其潜在应用前景加以论述。     

引起仔猪当前腹泻难治的病菌分析及药敏试验

采用实验室方法分离鉴定了引起猪腹泻的细菌,并对分离菌进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测和对24种抗菌药、5种复方药的敏感性测定。结果显示,分离细菌为大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、奇异变形杆菌,有的且产生ESBLs。药敏试验结果表明该菌对兽医临床中常用的β-内酰胺类抗生素、氟喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类等均产生耐药;对粘杆菌素、亚胺培南、美罗培南敏感,β-内酰胺类药物与酶抑制剂联用能使药物对细菌的最低抑菌浓度（M ICs）降低,因此复方β-内酰胺类药物是治疗猪腹泻的有效措施之一。     

科技动态

<正>包含细菌素的支链淀粉膜可控制即食禽产品的李斯特菌污染近来,美国宾夕法尼亚州立大学和意大利米兰大学的研究人员联合进行了一项有关活性包装控制食源性细菌污染的研究。他们从清酒乳杆菌DSMZ6333中分离一种细菌素sakacin A,并对其在即食食品中的活性进行了评价,采用支链淀粉制备的膜作为该细菌素的传递介质。试验证实了sakacin A具有抗食品中的单核增生性李斯     

鹌鹑沙门菌的分离鉴定

对病死鹌鹑的肝脏和心血进行了细菌分离培养、生化鉴定及动物接种试验,确定为沙门菌。在水井、禽舍输水系统处采取的两处水样中,同样分离鉴定出了上述细菌。动物试验结果表明,从脏器中分离到的沙门菌比从水样中分离到的沙门菌致病力更强。药敏试验结果表明,从脏器中分离的沙门菌对强力霉素、多黏菌素B敏感,水样中分离的沙门菌对卡那霉素敏感。     

促生素的基础与效能

促生素(probiotic)的定义是“改变动物肠道内微生物平衡的细菌及其产物”。其作用机理是,这些细菌及其产物通过改善宿主动物的营养,生长或健康而对宿主产生有利影响。目前市场销售的促生素大多是乳酸菌(乳酸杆菌、链球菌或双裂菌),通过饲料或饮水喂给动物。这些细菌促生机理及途径现在尚不明了,但可能是通过提供养分、消化食物或抑制有害细菌而发挥作用。最有可能的机理是抑制有害细菌。我们已经知道,乳酸杆菌能够产生多种抗菌物质,这些物质的作用可能是抑制了抑制动物生长的细菌,如粪链球菌或明显的病原菌如大肠杆菌。获自鼠的实验证据表明,口服乳酸杆菌能够刺激免疫系统。在农家庭园饲养的健康鸡的肠道中通常存在着