添加Ge-132对牛体外胚胎发育潜能的影响

试验旨在研究添加羧乙基锗倍半氧化物（carboxyethylgermanium sesquioxide,Ge-132）对牛孤雌激活后胚胎发育率、胚胎细胞数、早期胚胎内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平及胚胎内相关凋亡基因的影响。在牛早期胚胎体外培养基中添加不同浓度的Ge-132（0、10、100和200 μg/mL）,观察其对牛体外孤雌激活胚胎发育的影响;应用Hoechst对孤雌激活后第8天胚胎进行染色后制作装片,在显微镜下对细胞进行计数;用DCFH-DA染色检测早期胚胎内ROS水平,并用Image J测量荧光强度后对数据进行统计分析,用RT-PCR对胚胎内细胞凋亡相关基因（Caspase-3、Bax、Bcl-xl和Survivin）进行分析。结果显示,10 μg/mL Ge-132处理组胚胎率与对照组间无显著差异（P>0.05）,但可降低1细胞期的ROS水平;10 μg/mL Ge-132处理组较对照组早期胚胎细胞数显著增加（P<0.05）;通过检测细胞凋亡相关基因mRNA转录水平发现,与对照组相比,10 μg/mL Ge-132处理组胚胎促凋亡基因Caspase-3表达水平显著降低（P<0.05）,抑制细胞凋亡基因Survivin表达水平显著升高（P<0.05）。结果表明,在早期胚胎培养基中添加10 μg/mL Ge-132可降低细胞内ROS水平,减少胚胎中氧化应激诱导的细胞凋亡,从而提高孤雌激活后牛胚胎的发育潜能。     

基因表达差异对牛胚胎发育潜能的影响

随着牛胚胎体外生产(IVP)技术的不断成熟,体外胚胎生产在一些国家已进入商业化运营阶段.但与体内胚胎相比其移植受体妊娠率、产犊率及胎儿的后天发育能力均较差.因此,开发一种既可靠又实用的检测胚胎发育潜能的技术显得尤为重要.应用实时荧光定量PCR技术检测早期胚胎基因表达,通过分析mRNA的表达丰度来评价卵母细胞成熟情况和胚...     

Ge-132对蛋鸡脂类代谢的影响

150只35周龄蛋鸡,随机分为5组,每组30只。Ⅰ～Ⅳ组饲喂在基础日粮中添加四个不同梯度剂量Ge-132饲料,对照(V)组只喂基础日粮。定期检测鸡血锗含量、血清总脂、甘油三酯、总胆固醇、高密度胆固醇脂蛋白和鸡卵黄中胆固醇含量以及蛋中的含锗量,研究了Ge-132对蛋鸡脂类代谢的影响。研究结果表明伴随血锗和蛋锗含量的增高,同时显示:试验Ⅰ～Ⅳ组鸡自饲后第5天开始,血总脂、甘油三酯含量明显降低,与对照(V)组相比差异显著(p<0.05);自第10天开始血中胆固醇含量开始降低,至第20天时降低明显,且第Ⅰ、Ⅱ组与对照(V)组差异显著(p<0.05);血清高密度胆固醇脂蛋白含量变化不明显;蛋黄中胆固醇含量自饲后第10天起呈现下降,其中除第Ⅰ组与对照组在第10天及第15天差异不显著外,其余各组均显著低于对照组(p<0.05);上述变化在试验第Ⅰ～Ⅳ组间未见规律性差异。试验结果证实:在饲粮中添加适量的Ge 132可在一定程度上改变鸡体的脂类代谢并影响到鸡蛋蛋黄中胆固醇的含量。本文首次报道成功地通过饲料添加剂途径生产出富锗低胆固醇鸡蛋。     

Ge-132对蛋鸭机体抗氧化能力的影响

225只170日龄绍鸭随机分成5组,每组设3个重复,每个重复15只。Ⅰ组为对照组,仅喂基础日粮;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别在基础日粮中添加100、2004、00和600 mg/kg水平的Ge-132,持续饲喂28 d。于试验前及试验后71、4、212、8 d分别测定血锗含量、血清GSH-Px、SOD活性以及血清MDA含量。结果显示：（1）Ⅱ～Ⅴ组试验鸭血锗含量比对照组显著增高（P〈0.01）。（2）Ⅱ～Ⅴ组试验鸭血清GSH-Px、SOD活性比对照组明显增高（P〈0.01）;血清MDA含量比对照组显著降低（P〈0.01）。（3）血锗含量与血清GSH-Px、SOD活性呈强正相关（r=0.669和0.621）,与血清MDA含量呈强负相关（r=-0.651）。本研究表明,日粮中添加Ge-132可增强蛋鸭机体的抗氧化能力。     

微量元素锌对牛卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

本研究旨在探讨锌对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育的影响。首先使用锌螯合剂TPEN去除锌,并检测缺锌对牛卵母细胞体外成熟的影响;然后在体外成熟液中分别添加0(对照组)、0.4、0.8、1.2、1.6μg/mL硫酸锌,探索不同浓度硫酸锌对体外成熟及后续胚胎发育的影响。结果表明:锌元素在体外成熟液中的含量低于牛卵泡液和颈静脉血清(P<0.05);去除体外成熟液中的锌后牛卵母细胞的体外成熟效率下降(P<0.05),且具有时间依赖性,补充适宜浓度硫酸锌后成熟效率恢复;向体外成熟液中添加硫酸锌并未对卵母细胞体外成熟效率产生显著影响,但添加0.8μg/mL硫酸锌成熟后的卵母细胞中活性氧含量显著降低,后续体外受精胚胎的囊胚发育效率显著提高;RT-qPCR分析结果显示,与对照组相比,添加0.8μg/mL硫酸锌成熟后的卵母细胞中抗氧化基因SOD1、CAT、TXN1、PRD1和卵丘扩展基因PTX3、TSG6的表达水平均提高(P<0.05)。研究表明,添加0.8μg/mL硫酸锌可以通过提高卵母细胞内抗氧化酶基因的表达水平,降低卵母细胞内活性氧含量,促进卵丘扩展,从而提高卵母细胞成熟质量和体外受精胚胎的发育效率。     

不同培养液对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(β-ME)、亚硫磺酸(HTAU)对牛卵母细胞体外成熟(IVM)及孤雌激活胚胎体外发育(IVC)效果的影响,实验采集牛卵巢采用切割法收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机处于不同浓度EGF、β-ME培养液成熟培养24 h后孤雌激活,研究其在不同胚胎培养液中的后续发育,以期筛选出最好的牛卵母细胞IVM-IVC条件。结果表明:添加25、50、100 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率均高于对照组,其中50 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率与对照组差异显著(P<0.05);50、100、500μmol/L的β-ME对牛卵母细胞体外成熟没有促进作用;50 ng/mL EGF与50、100μmol/Lβ-ME组合并无协同作用;胚胎培养基中添加不同浓度EGF对早期胚胎的体外发育无显著影响;而添加100μmol/Lβ-ME组的囊胚率、囊胚细胞数均极显著高于对照组(P<0.01);在成熟液中添加50 ng/mL EGF和100μmol/Lβ-ME、胚胎培养液中添加0.5 mmol/L HTAU孤雌胚发育最好。     

添加褪黑素对牛卵母细胞及其ICSI操作后胚胎发育效果的影响

为探讨抗氧化剂褪黑素(MLT)对牛卵母细胞体外成熟及胞浆单精子注射(ICSI)显微操作后早期胚胎体外发育的影响。在牛卵母细胞体外成熟培养液中,分别添加0 M、10~(-10) M、10~(-9) M、10~(-8) M MLT,通过统计核成熟率,评估不同浓度的MLT对牛卵母细胞体外成熟的影响。于24h后收集核成熟的牛卵母细胞进行显微操作,同时在显微操作液中分别添加0 M、10~(-10) M、10~(-9) M、10~(-8) M MLT,经体外培养后评估MLT对ICSI处理后胚胎体外发育的影响。结果表明:与对照组相比,在成熟液中添加10~(-9) M MLT(73.8%vs 81.3%)(P0.05)可显著提高牛卵母细胞成熟率;同时在显微操作液中添加10~(-9) M MLT,与对照组相比,牛卵母细胞ICSI后胚胎体外发育的卵裂率(81.3%vs 85.5%)差异不显著(P0.05),但囊胚率(14.3%vs 22.6%)显著提高(P0.05)。因此,添加10~(-9) M MLT有助于优化ICSI技术体系,提高显微授精后胚胎体外生产效率。     

牛输卵管上皮对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（0～6 d）母牛外周血雌激素和孕酮浓度的变化，添加17β-雌二醇和孕酮至TCM-199中，体外培养间情期牛输卵管上皮细胞（BOECs），同时观察了BOECs分泌蛋白（BOEP）、发情期母牛输卵管冲洗蛋白（BOP）和小牛输卵管冲洗蛋白（COP）对小鼠胚胎发育的影响。结果表明：①类固醇激素可以调节和启动体外培养的间情期牛输卵管上皮细胞的分泌活动；②BOEP比BOP和COP能极显著地促进胚胎的分裂和发育（Ｐ<0.001）；③与对照组（未添加外源蛋白质，只添加胎牛血清）相比，BOEP的囊胚形成率极显著低于对照组（Ｐ<0.01），可能是缺乏某些分子量低于10 kD蛋白因子的协同作用，同时30～56kD分泌蛋白的存在，也可能参与了抑制和阻碍胚胎分裂和发育的过程。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响.试验1:以TCM-199 10?S为基础培养液(对照组),再加入7、14 mmol/L的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0.试验2:IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7 mmol/L的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9%,孵化囊胚率分别为25.9%、28.6%和25.0%;而添加14 mmol/L牛磺酸时,桑椹胚率分别为50.4%、56.4%和55.4%,囊胚率分别为26.5%、31.3%和27.7%,孵化囊胚率分别为27.5%、31.1%和29.9%.结果表明,体外发育培养液中添加7 mmol/L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(P＜0.05),并且在4～8细胞期添加14 mmol/L牛磺酸最为合适.     

牛胚胎体外生产与早期胚胎发育的探讨

试验对牛胚胎体外生产技术中的体外受精液、精卵共育时间、血清和培乔液等影响早期胚胎体外发育的因素进行了研究。以BO（Brackett ＆ Oliphant）和BM（BO：成熟培养液=3：2）作为受精液，受精卵的囊胚发育率分别为26．0％和15．0％；精卵共育时间以9-12h为宜；受精卵在含血清FBS或OCS培养液中的专胚发育率分别为26．4％或29．9％，明显高于在无血清培养基中的囊胚发育率（10．3％）；TCMl99、mBECMaa、mSOFaa3种胚胎培养液均能支持受精卵的体外发育，在其中培养受精卵囊胚发育率分别为18．O％、30．7％和29．2％。试验结果表明：精卵于BM受精液中共育9～12h后，将假定受精卵置于添加5％OCS的mBECMaa或mSOFaa培养液中培养，能显著提高体外生产胚胎的囊胚发育率。     

成熟培养基中添加卵泡液对牛体外受精卵发育的影响

从牛屠体卵巢采得卵母细胞后，置于ＣＯ２培养箱中作２４小时成熟培养。在成熟培养液中分别添加０％、１０％、２０％、３０％牛新鲜卵泡液９ＢＦＦ）或灭活卵泡液（ｈＢＦＦ）。分层Ｐｅｒｃｏｌｌ液将解冻精子离心洗涤后，悬浮于含有１０μｇ／ｍｌ肝素的修正Ｔｙｒｏｄｅ液滴中，将培养成熟的卵子移入后作授精培养。２０小时后，固定、染色一部分卵子，镜检其受精情况，其余卵子移入发生培养基与颗粒膜细胞作混合培养。试验结果表     

添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响

为了提高牛体外胚胎囊胚发育率,添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎进行体外培养。分别采集发情周期D0、D2、D4和D7山羊血清（发情当天为D0）,灭活除菌备用。结果表明不同发情时期羊血清对孤紫激活胚胎孵裂率影响差异不显著,囊胚发育率分别为29.5%、32.4%、33.9%和41.3%,D7血清能显著提高囊胚发育率（P＜0.05）,且扩张和孵化胚出现较早。添加D0血清体外受精胚胎卵裂率较高,但对囊胚发育率影响差异不显著。说明孤紫激活和体外受精胚胎发育有差异,D7血清对胚胎后期发育有利。受精胚无血清培养3d后添加D7血清,囊胚发育率为42.9%,是较为理想的培养方法。     

MG132对水牛卵母细胞成熟及IVF胚胎发育的影响

为了研究蛋白酶体抑制剂三肽基乙醛(MG132)对水牛卵母细胞体外成熟及体外受精(IVF)胚胎发育的影响,试验采用不同浓度(0,1,2.5,5μmol/L)MG132成熟液培养水牛卵母细胞24 h并统计第一极体排出率;然后对各组卵母细胞进行IVF,统计胚胎的发育率;最后采用免疫荧光技术检测组蛋白甲基化修饰(H3K4me3、H3K9me2和H3K9me3)的表达情况。结果表明:卵母细胞经不同浓度MG132处理后,其第一极体的排出率以及后续IVF胚胎的分裂率、8-细胞率差异不显著(P0.05)。但1μmol/L MG132提高了IVF胚胎的桑椹胚率和囊胚率(P0.05);而5μmol/L MG132对胚胎的桑椹胚率和囊胚率无显著促进作用(P0.05)。1,5μmol/L MG132分别提高胚胎的H3K4me3、H3K9me2的表达(P0.05),但各组H3K9me3的表达无显著差异(P0.05)。说明1μmol/L MG132通过提高胚胎H3K4me3的表达从而促进IVF胚胎的发育。     

半胱胺对牛卵母细胞早期胚胎发育能力的影响

半胱胺（Cysteamine）是一种重要的巯基物,在体外培养体系中添加半胱胺能够增强谷胱甘肽（GSH）的合成和胚胎发育能力。本研究旨在探讨不同浓度半胱胺处理对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育能力的影响。结果表明,在牛卵母细胞体外成熟液中添加100μM的半胱胺,其囊胚率与对照组有显著差异;但是,与同时在成熟液和发育液中都添加100μM的半胱胺组差异不显著。研究结果也表明,在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加半胱胺会提高牛卵母细胞的囊胚发育率,而且随着浓度的增加这种作用将达到饱和,其最佳作用浓度为100μM。     

孕酮对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

通过在牛精子获能液中添加不同浓度的孕酮,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行了研究。通过对顶体反应、超激活、早期胚胎发育率及其与精子孵育时间对精子活率的观察,筛选出获能液中最适孕酮浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明,单独添加孕酮不能诱导牛精子体外获能;孕酮只能诱导获能精子发生顶体反应,而且有一个剂量依赖关系,以1μg/mL的添加效果最好。当浓度超过1μg/mL、作用时间超过4h时,精子活率下降;获能液中添加孕酮,无论剂量多少,对胚胎体外发育无明显的促进作用。     

热应激对植入前牛胚胎发育的影响

采集屠宰母牛卵巢和输卵管中的卵母细胞，进行体外受精，受精卵继续在体外培养。将发育3d的牛胚胎于42℃下分别培养0．5、2．0和4．0h，与对照组（39℃）牛胚胎相比，接触最高热应激（42℃，4h）处理的胚胎，约509／6的胚胎发育速度明显下降。而处理组牛胚胎发育到第9d的囊胚数、细胞数及内细胞团与滋养外胚层比率与对照组差异不显著（P〉0．05）。表明，温度升高对牛囊胚期胚胎的发育没有明显损害。对9d的囊胚进行基因性别分析发现，正常体外培养的雄胚发育快于雌胚，而在发育第3d受42℃热应激后，到囊胚期生存的胚胎性别比率发生改变，雌胚比率高于雄胚，表明雌性胚胎比雄性胚胎具有更强的抗热应激能力。     

Ge-132诱导鸡体产生外源性IFN的研究

以Ｇｅ－１３２为诱生剂诱生鸡体产生外源性干扰素。将鸡胚成纤维细胞－水泡性口炎病毒作为鸡干扰素（ＩＦＮ）的检测系统,对不同种细胞、不同的细胞浓度、不同的ＩＦＮ诱生剂等诸因素对ＩＦＮ产生的影响进行了比较。试验结果表明：（１）在Ｇｅ－１３２、鸡新城疫病毒（ＮＤＶ－Ｆ）、植物血凝素（ＰＨＡ）、聚肌胞（ｐｌｙ Ｉ：Ｃ）四种诱生剂中,诱生能力差异极显著（Ｐ〈０．０１）,且以Ｇｅ－１３２诱生ＩＦＮ的能力为最强,     

三种培养基对牛体外受精胚胎发育的影响

本文比较了三种培养基：（1）B2（LABORNI、OIREC．C．D,France）＋颗粒细胞（GC）、（2）IVMD-101（FHK,Japan）、（3）ACM（本实验室自配）＋胎鼠成纤维细胞（MEF）,对牛体外受精胚胎发育的影响。结果显示,以卵裂率（％）来说,第1,2组和第3组分别为65．3±0．05、73．8±0．12及72．7±0．12;以囊胚率（％）来说,第1,2组和第3组分别为33．8±0．05、10．5±0．07及38．9±0．18;而以AB级囊胚率（％）来说,第1,2组和第3组分别为67．6±0．05、60．1±0．04及71．8±0．11。因此,通过统计分析,在我们所研究的三种培养基中,ACM＋MEF效果最好。     

牛绵羊猪胚胎发育至囊胚期的体外培养

体外生产胚胎以及进行胚胎处理(核移植、基因转移等)都需要将胚胎从合子培养至具有生活力囊胚期的体外培养方法。但是,牛、绵羊、猪胚胎培养存在的最大问题是“体外发育障碍”,致使胚胎难于发育到囊胚阶段。这种“障碍”(block)现在是采用以下方法加以克服:培养液里加其他细胞与胚胎共同培养或将原有的培养液加以改进。一些试验报告指出,体外培养后的胚胎与体内发育的胚胎,移植给受体后妊娠率差别很显著。不过,将培养技术作进一步改进,是完全可以提高胚胎体外培养效果的。