鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

利用雄鼠脾细胞免疫6~7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×107,3.2×1011pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。     

制备鼠抗猪肺炎支原体抗体的方法

小鼠饲养管理方便,价格亦很低廉,用常规方法免疫小鼠,虽可获得较高滴度的抗体,但是由于小鼠的血清量甚少,所产生的血清抗体在数量上远不能满足实验的需要。因此,通常均采用兔、羊、马等个体大的动物来制备所需抗体。这就在管理上和经费上带来一些困难。能否利用小鼠免疫制备大量的血清抗体?我们在制备抗猪肺炎支原体抗体时,利用接种小鼠骨髓瘤细胞诱生腹水的方法,解决了这一问题。     

抗轮状病毒抗体对初生小鼠抗鼠轮状病毒再感染的保护力

据报道，鼠感染鼠轮状病毒后的２个月内，可以抵抗轮状病毒的再感染；成年鼠抵抗轮状病毒感染的保护与血清抗体和粪抗体ＩｇＡ效价有关。本研究用小鼠测定了抗轮状病毒抗体产生的持续时间以及对轮状病毒感染的保护与抗体效价之间的关系。研究发现，用鼠轮状病毒ＥＤＩＭ株一次口服免疫后至少可在１４个月（几乎是鼠的生命期）保护鼠抵抗轮状病毒的感染。这一时期，血清和粪抗体，包括血清ＩｇＧ、ＩｇＡ以及抗ＥＤＩＭ中和抗体的效介     

花粉水提液对小鼠血清抗体OD值的影响

花粉水提液对小鼠血清抗体ＯＤ值的影响＊杨汉春陆钢王永全（中国农业大学动物医学院，北京１０００９４）王庆坡李长友（农业部畜牧兽医司动物防治处，１０００２６）花粉（Ｐｏｌｅｎ）是植物雄性繁殖细胞，蜂花粉（ＢｅｅＰｏｌｅｎ）是蜜蜂从被子植物雄性花药和裸子植...     

血清学检测的雄性特异性抗原Fab抗体的特异性鉴定

旨在研究血清学检测的雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的特异性。以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有较高雄性特异性结合活性的重组噬菌体克隆为基础,构建Fab抗体的可溶性表达噬质粒,并诱导和纯化该抗体片段,利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术和ELISA分析其特异性。结果表明,该抗体在约49 ku处有条带出现。在Fab抗体和H-Y抗血清的细胞免疫荧光比较分析试验中发现,从雌、雄鼠脾细胞的阳性细胞数量和平均荧光强度的角度分析,Fab抗体的雄性特异性强于抗血清。石蜡切片免疫荧光定量分析显示,Fab抗体与雄鼠肝脏的结合活性明显高于对应雌鼠,差异极显著(t=20.73,P=0.002 3<0.01),而H-Y抗血清与雄鼠肝脏的结合活性略高于对应雌鼠,差异显著(t=7.11,P=0.019 2<0.05)。以C57BL/6雄鼠脾细胞、睾丸细胞作为抗原的ELISA分析显示,Fab抗体具有雄性特异性,但Fab抗体的OD值低于抗血清。结果提示,Fab抗体的雄性特异性高于H-Y抗血清,但其雄性特异性结合活性低于H-Y抗血清,Fab抗体在具备雄性特异性的同时,仍有少量雌性非特异性结合,Fab抗体的体外亲和力成熟可作为后续研究工作,以获...     

江西省部分单位实验小鼠鼠痘病毒感染的调查

采用敏感性和特异性较好的酶免疫试验（ＥＩＡ）对江西省一些饲养单位在普通环境下饲养的４个品系２３２只小鼠进行了鼠痘病毒抗体检查。结果发现阳性标本３３份，阳性率为１４．２％。其中昆明小鼠的阳性率为１８．１％（３３／１８２），其它３个品系未检出。阳性感染鼠群似呈地区性分布，吉安地区未发现。     

小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立

本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金颗粒、5.05 μg为最低稳定抗体量(稳定0.5 mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640 μg/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800 μg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 min快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。