欧拉型藏绵羊GHRHR基因部分片段的克隆及多态性研究

对欧拉型藏绵羊生长激素释放激素受体(GHRHR)基因部分片段进行PCR扩增和克隆测序(GenBank Accession No:EU289218),利用BioEdit7.0.9.0、DnaSP 4.10.9和MEGA4.0等生物信息学软件对该部分序列与GenBank中普通牛、瘤牛、水牛相应序列进行比对分析,并对58只欧拉型藏绵羊该基因片段进行SmaI-RFLP研究。结果表明:欧拉型藏绵羊与普通牛、瘤牛、水牛3个物种基因序列间同源性大小依次为92.5%、92.0%、91.5%;4个物种间共发现41处序列间碱基差异(9.65/100 bp),其中藏绵羊与普通牛、瘤牛、水牛3个牛亚科物种均存在差异碱基29处。碱基变异类型主要表现为碱基转换和颠换,少数为碱基插入和缺失。推导的部分氨基酸序列间同源性大小依次为88.8%、88.8%、94.4%。58只欧拉型藏绵羊该基因片段SmaI-RFLP分析均为单态,表现为AA基因型。     

藏系绵羊MSX2和HOXA4基因的克隆与序列分析

对藏系绵羊的同源异型基因家族的两个成员（MSX2和HOXA4基因）进行克隆测序,为其功能分析奠定基础。从藏系绵羊皮肤中提取总RNA,采用常规的基因克隆方法,获得了MSX2和HOXA4基因编码区序列,长度分别为804 bp和552 bp。序列比对显示,MSX2基因与预测的绵羊序列存在多个碱基差异;藏系绵羊HOXA4基因与预测的山羊序列间只有1个碱基差异,但与绵羊的预测序列差异大。     

草地藏系绵羊心脏脂肪酸结合蛋白基因第二内含子的克隆和测序

采用PCR技术对草地藏系绵羊心脏脂肪酸结合蛋白基因第2内含子进行了扩增,扩增产物经克隆和测序显示,其长度为1 893bp,该基因片段与GenBank中普通绵羊和猪的H-FABP基因第2内含子分别有99%和66.4%的同源性。实验还对22只草地藏系绵羊H-FABP基因第2内含子中174 bp的序列进行了PCR-SSCP分析,结果未检测到多态性。     

草地藏系绵羊心脏脂肪酸结合蛋白基因第二内含子的克隆和测序

采用PCR技术对草地藏系绵羊心脏脂肪酸结合蛋白基因第2内含子进行了扩增，扩增产物经克隆和测序显示，其长度为1893bp，该基因片段与GenBank中普通绵羊和猪的H—FABP基因第2内含子分别有99％和66．4％的同源性。实验还对22只草地藏系绵羊H—FABP基因第2内含子中174bp的序列进行了PCR—SSCP分析，结果未检测到多态性。     

牦牛肿瘤坏死因子-α基因部分片段的克隆测序

根据普通牛和其他哺乳动物基因的碱基序列和相关文献资料设计引物,用PCR扩增并测定了牦牛肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的部分序列。结果表明,TNF-α基因片段(1160bp)包括外显子3～4、内含子2～3,3'侧翼区和外显子2的部分序列。通过GenBank中的Blastn序列比较分析,牦牛的TNF-α基因与普通牛种同源性高达98%。这为开展牦牛功能基因组计划和分子育种提供了理论依据。     

麦洼牦牛肥胖基因部分片段的克隆测序研究

根据普通牛和其他哺乳动物基因的碱基序列以及相关文献资料设计引物，用PCR扩增并测定了牦牛OB基因的部分序列。结果表明：OB基因片段(1820bp)包括内含子2全部，外显子2～3的一部分。通过GenBank中的Blastn序列比较分析，牦牛的OB基因与普通牛种同源性高达98％。这为开展牦牛功能基因组计划和分子育种提供了科学的理论依据。     

藏系绵羊KRT26基因的克隆测序和组织表达分析

为了克隆藏系绵羊KRT26基因序列,并研究其组织表达谱,试验从藏系绵羊皮肤中提取总RNA,用RT-PCR技术克隆KRT26基因,并进行了氨基酸序列测定和荧光定量PCR分析。结果表明:获得了1 407 bp的编码区序列,该序列与绵羊KRT26基因的预测序列仅有1个碱基差异,推导的氨基酸序列相同,与牛、人、小鼠KRT26的氨基酸序列相似性依次为94.44%、79.44%和73.32%。KRT26基因在藏系绵羊的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脂肪、皮肤中均有不同程度表达,但在皮肤的表达量远远高于其他组织,表现出极高的组织特异性。     

牦牛生长分化因子-9基因cDNA克隆及序列分析

根据GenBank中普通牛生长分化因子9(GDF-9)基因序列(AF 307092)设计1对引物,以麦洼牦牛卵母细胞总RNA为模板,通过RT-PCR技术对牦牛GDF-9基因cDNA进行克隆测序和序列分析.结果表明:所克隆的1399 bp片段为预期的牦牛GDF-9基因cDNA序列,包含由2个外显子组成的全编码区和3′-下游部分序列.牦牛GDF-9基因编码区核苷酸序列长度为1362 bp,编码453个氨基酸,与GenBank中报道的普通牛、水牛、绵羊、山羊相应序列一致,而与人和黑猩猩存在差异.和普通牛相比,牦牛GDF-9基因编码区存在1处碱基转换(C→T),导致相应的氨基酸由丙氨酸(A)转换为缬氨酸(V).牦牛与普通牛、水牛、绵羊、山羊、人和黑猩猩的核苷酸同源性分别为99.9%、98.4%、97.0%、96.8%、85.6%和85.1%;氨基酸同源性分别为99.8%、97.1%、95.1%、95.4%、79.4%和79.5%.利用NJ法和MP法以该基因编码区核苷酸序列构建的物种间分子系统进化树结果基本一致,即牦牛与普通牛先聚为一类,再与水牛聚为一类,而后与绵羊和山羊聚为一类,最后与人和黑猩猩聚为一类.该聚类结果与物种间遗传距离大小一致,也与各物种在动物学上的分类相吻合,表明GDF-9基因编码区适用于构建物种间系统进化树.     

南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1序列的测定及分析

利用GenBank中公布的牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1(in-1)全序列(GenBank登录号为AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641 bp,A、C、G、T4种碱基分别占35．73%、13．88%、17．47%、32．92%,A T (68．65%)的含量远高于G C(31．35%)的含量。不同物种间FSHβ基因序列相似性的变异范围为24．1%～97．3%,分歧度则为2．6%～85．7%。利用FSHβ亚基基因内含子1序列进行的物种间系统发育分析结果与实际的物种演化顺序一致,表明它可用于物种间的系统发育分析。     

牦牛心脏脂肪酸结合蛋白基因的分子克隆和进化分析

对牦牛心脏脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因进行了克隆测序，并与GenBank中9个物种相应基因编码区核苷酸序列进行了比对分析，在此基础上采用邻接法、最大简约法和最小进化法构建了牦牛与其它物种间分子系统进化树。结果表明，牦牛H-FABP基因由4个外显子和3个内含子组成，外显子1、外显子2、外显子3和外显子4大小分别为73、173、102和54bp，内含子1、内含子2和内含子3大小分别为3460、1892和1495bp。CDS序列全长为402bp，前体氨基酸数为133个。不同物种间在该基因核苷酸序列上有较高的保守性。牦牛与普通牛、绵羊、山羊、猪、人、大鼠、小鼠、鸡、斑马鱼各物种在H-FABP基因编码区核苷酸序列上同源性大小分别为99．8％、97．8％、97．0％、92．8％、88．8％、83．3％、83．1％、76．4％、68．7％。通过邻接法、最大简约法和最小进化法用H-FABP基因编码区核苷酸序列构建的物种间分子系统进化树，结果表明，3种方法构建的物种间分子系统进化树基本一致。系统树总体分为两支，斑马鱼为独立的一支，而牦牛与其它物种为另一大分支。牦牛与普通牛、绵羊与山羊先分别聚在一起，然后再聚为一类；后与猪、人依次聚为一类。小鼠和大鼠先聚为一类，再与人和其它物种聚类，然后再与鸡聚为一类。该系统聚类结果与动物学分类一致，表明H-FABP基因适合于构建不同物种间的系统进化树。     

日粮能量水平对塞北乌骨鸡促性腺激素分泌的影响

为研究日粮能量水平对塞北乌骨鸡血清促性腺激素分泌的影响,试验选60只30周龄体重相近、来源相同、产蛋性能相似的塞北乌骨鸡,随机分为5组,每组3个重复,每个重复4只鸡。试验1组为对照组,饲喂基础日粮;试验2~5组分别饲喂能量降低5%和10%及提高5%和10%日粮。采用放射免疫分析方法(RIA)测定血浆促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)。结果表明,试验结束时,与试验1组相比,试验2组FSH含量差异极显著(P<0.01);试验2组与试验1、3、4、5组组间LH含量差异极显著(P<0.01)。提示,能量通过促性腺激素分泌影响生殖性能。     

激素调控促进动物生长发育的研究

激素对机体的代谢、生长、发育、繁殖、性别、性欲和性活动等起重要的调节作用。动物机体通过各种内分泌腺分泌的激素,间接调节动物机体的活动。内分泌腺分泌的激素直接进入血液、随着血液循环到达身体各个部分,在一定的器官或组织中发生作用,从而协调动物机体新陈代谢、生长、发育、生殖及其它生理机能,使这些机能得到兴奋或抑制,使它们的活动加快或减慢。生长激素可以促进蛋白质的合成与骨的生长,甲状腺激素促进新陈代谢和生长发育,可以提高神经系统的兴奋。胰岛分泌的激素可以控制糖类代谢,调节血糖含量。性激素促进生殖器官的生长发育,维持第二性征。     

昆虫蜕皮的激素调控网络

昆虫蜕皮是由数种激素分级调控的一个重要生长发育过程。在蜕皮之前,脑神经分泌细胞合成和分泌促前胸腺素(prothoracicotropic hormone,PTTH)并促进前胸腺中蜕皮激素(ecdysone,Ecd)的产生。随后,Ecd促进气门腺Inka细胞合成蜕壳启动激素(ecdysis-triggering hormone,ETH),同时抑制ETH的分泌,对ETH具有双重调控作用。血淋巴中Ecd滴度下降后,羽化激素(eclosion hormone,EH)促进ETH的分泌。最终,ETH启动昆虫的蜕皮。     

家蚕滞育性卵胚胎发育过程中蜕皮激素和保幼激素含量的变化

测定发现，家蚕滞育卵胚胎发育全过程中，蜕皮激素和保幼激素含量的变化辐度较大，保幼激素含量与胚胎发育进程的关系密切，保幼激素含量又与蜕皮激素含量有关。因此认为，虽然蜕皮激素和保幼激素对胚胎滞育性没有决定作用，但蜕皮激素和保幼激素相互拮抗又相互协调，对滞育激素控制的胚胎发育进程起某种调节作用。     

Effect of Kisspeptin on Regulation of Growth Hormone and Luteinizing Hormone in Lactating Dairy Cows

Kisspeptin (KP),a neuroendocrine regulator of reproduction,is hypothesized to be an integrator of metabolism and hormones critical to the regulation of reproduction.Lactation is associated with enhanced growth hormone (GH) responsiveness and reduced fertility.Our study was designed to determine the effects of lactation on KP-stimulated GH and luteinizing hormone (LH) secretion.Five nonlactating and five lactating dairy cows were used in the study.Experiments were conducted with lactating cows at weeks 1,5 and 11 after parturition.The experimental treatments (saline and KP [ 100 and 400 pmol/kg body weight] ) were given intravenously and blood was collected and plasma was stored until later assay to determine concentrations of GH,LH,progesterone and non-esterified fatty acids.We found that neither dose of KP stimulated an increase in GH secretion.The low dose of KP increased (P ＜0.05)LH concentrations only in lactating cows.The higher dose of KP elicited an increase in circulating LH concentrations in both lactating and non-lactating cows.The lower dose of KP increased ( P ＜ 0.05 ) the area under the curve for LH only in cows during week 5 of lactation,and the area under the curve of LH following the highest dose of KP was greater ( P ＜ 0.05 ) in cows during week 5 of lactation than that for the other groups of cows.In summary,lactation status and stage of lactation did not change the sensitivity of the GH system to KP.However,an effect of stage of lactation on KP-stimulated LH secretion was detected in the dairy cows.Study of the KP system during lactation in dairy cows may provide critical insights into the mechanisms for lactation-associated changes in the reproductive axis.     

生长激素作用机理的研究进展

生长激素与它的受体相互作用导致受体二聚化，并产生大量的信息分子。这些信息分子包括Jak2,MAP激酶，Stat蛋白，IRS磷脂酶C，蛋白激酶C，Ca^2 离子通道。生长激素有四条通道：Jak2,Stat蛋白通道；MAP激酶通道；Jak2,IRS,PI3K通道；Jak2,PLC,DAG,PKC通道。生长激素正是通过这四条通道发挥生物学作用。     

雌性哺乳动物LH及其受体的研究进展

本文综述了雌性哺乳动物促黄体素及其受体的结构及其在卵泡发育过程中的表达和功能。阐明了促黄体素及其受体在卵泡的生长发育、优势化及排卵等方面的重要功能。     

生长激素促进细胞增殖机理的研究进展

生长激素(growth hormone,GH)对动物的生长发育具有重要的作用,其直接或间接通过诱导胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)促进干细胞的活化、细胞增殖和分化,并通过细胞膜受体发挥作用启动一系列信号通路.文章就生长激素对细胞增长的作用和功能进行简要概述.     

LH受体在山羊结状神经节中的分布

为了检测山羊迷走神经结状神经节中是否有促黄体生成素受体(LHR)的存在,探讨促黄体生成素(LH)是否能够影响结状神经节内脏感觉神经元的功能活动。本试验采用免疫组织化学SP法观察LHR在结状神经节中的分布特征,利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析LHR在结状神经节中阳性神经元和阳性非神经元上的表达量差异。结果显示,LHR主要分布在神经元细胞膜和细胞质中,呈棕黄色为强阳性。在带核的神经元中,神经元细胞核呈圆形空泡状,LHR为阴性反应。神经元群间的神经纤维呈淡黄色,LHR为弱阳性。LHR在神经元胞体上的相对表达量极显著高于节内其他阳性非神经元结构(P0.01)。结果表明,山羊结状神经节内脏感觉神经元是LH作用的主要靶细胞,提示LH有可能通过作用于结状神经节内脏感觉神经元胞体上的LHR参与调节内脏器官感觉信息的传导。     

大鼠GTH细胞PKC对FSH-β mRNA表达的影响

为研究大鼠促卵泡素(FSH)分泌的受体后信号转导机制,将GTH细胞用PMA或H7处理后,用GnRH脉冲刺激,再用实时荧光定量PCR方法测定细胞FSH-βmRNA表达的Ct值,并与空白对照组比较。结果表明,PMA能显著降低GTH细胞FSH-βmRNA表达的Ct值,H7则曾能显著升高,说明GTH细胞PKC活性显著影响FSH-βmRNA的表达,FSH-βmRNA的表达随着PKC活性的升高而显著升高,随着PKC活性的降低而显著降低。因此,PKC-Ca2+是GnRH脉冲刺激所引起的FSH-βmRNA表达的受体后的信号转导途径。