上海地区猪源大肠杆菌血清型及其毒力因子分布调查

对上海地区分离的199株猪源大肠杆菌分离株进行血清型鉴定和毒力因子检测,使用大肠杆菌标准抗O因子血清进行玻片凝集试验;采用普通和多重PCR方法,对分离株进行STa、STb、LT、Stx2e等4种肠毒素和K88、K99、987P、F18、F41等5种黏附素检测。结果:199株猪源大肠杆菌分离株有110株鉴定出血清型,占检测菌株的55.28%,覆盖了30种血清型,优势血清型为O8、O45、O64、O78、O138、O157、O163、O7+O8,占定型菌株的60%。共有32株大肠杆菌检测到毒力因子,阳性率为16.08%,检测出9种毒力因子。其中有21株单独检测到肠毒素,占65.63%,STa和STb+LT阳性的菌株分别为14和4;6株单独检测到黏附素,3株菌株K99阳性;5株同时检测到肠毒素和黏附素。在32株毒力基因阳性的大肠杆菌中,有15株血清型定型,覆盖7种血清型,其中O138、O7+O8与肠毒素STa相关,O8、O45与STb+LT相关。研究表明,上海地区猪源大肠杆菌分离株优势血清型至少覆盖了包括O8、O45、O64、O78、O138、O163等在内的8种血清型;大肠杆菌分离株以产肠毒素为主,主要毒力因子包括黏附素K99和肠毒素STa、STb+LT等。     

皖北地区仔猪源大肠杆菌毒力因子及HPI毒力岛的检测

我国皖北地区哺乳仔猪腹泻频发,临床直肠棉拭子培养物有34例符合大肠杆菌特征,并进行产肠毒素大肠杆菌(ETEC)毒力因子(STa、STb、LT、SLT-2e)和HPI毒力岛的PCR快速检测。结果,仅有10例表达STa和STb(29.41%),其中3例表达STa基因(8.82%),2例表达STb基因(5.88%),2例表达STa和STb基因,1例表达STa和irp2基因(2.94%),2例表达STa和STb及irp2基因,揭示HPI+大肠杆菌与ETEC混合感染共有3例(8.82%);未检测到LT和STL-2e毒力因子。有10例表达irp2基因(29.41%),其中7例独立表达irp2基因(20.59%)。STa、STb和Irp2的PCR产物测序结果分别与GenBank检索的目标序列比对,其同源性均达到100%。结果初步揭示了皖北地区致哺乳仔猪腹泻ETEC毒力因子及HPI毒力岛的分布情况。     

黑龙江地区断奶仔猪腹泻大肠杆菌种系类群、血清型和毒力基因分析

揭示黑龙江地区集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)直肠棉拭子分离到的123株大肠埃希菌所属种系分类群、O血清型及其与毒力基因的特征.采用常规凝集试验进行测定,种系分类群标记的ch uA、yjaA基因和TSPE4.C2DNA片段及肠毒素基因STa、STb、LT、SL T-2e采用PCR方法检测.在123株分离菌株中,除21株未定型、10株自凝外,测定出92株分离的血清型,覆盖18个血清型,其中以O8、O 9、O 149 3种血清型为主,共57株,占定型菌株的61.96％.环境共生的种系进化A群113株占91.87％,肠外强致病D种系进化群2株占1.63％.肠毒素检出菌株74,占分离株的60.16％,其中以STa、STb为主,共占肠毒素检出株的94.59％.结果显示黑龙江省PWD病原性大肠埃希菌优势血清型为O 8、O9、O149,大肠埃希菌肠毒素主要毒力因子为STa、STb,种系进化群为A.     

东北地区仔猪腹泻大肠杆菌EAST1基因调查

大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规模化猪场共采集断奶仔猪腹泻粪便样品290份,经染色镜检和生化试验鉴定出362株大肠杆菌,应用PCR检测方法对STa、STb、LTa、LTb、paa、AIDA-I、afa E、irp2和EAST1等毒力基因进行检测。结果表明:有286株大肠杆菌携带毒力基因,其中89株(占31.12%)携带EAST1毒力基因,只含有EAST1毒力基因的有49株(占17.13%),同时携带其他毒力基因的有40株(占13.99%)。EAST1毒力基因可以协同F1菌毛、paa基因频繁交叉出现在同一致病菌中,但这些毒力基因编码的毒素之间是否存在协同致病关系尚需进一步研究。     

北京地区仔猪大肠杆菌血清型鉴定及其毒力因子检测

本试验旨在调查北京地区仔猪腹泻的原因及猪源大肠杆菌血清型、毒力因子的分布情况。收集北京京郊地区仔猪腹泻样本400份,应用含2%血清的TSA培养基分离大肠杆菌,通过血清型鉴定试验和毒力因子检测验证O抗原。结果显示,400份样本中分离到64株大肠杆菌,定型42株。其主要为O101型（18.7%）、O64型（12.5%）、O8型（10.9%）、O20型（10.9%）、O45型（4.7%）、O149型（4.7%）、O2型（1.6%）、O89型（1.6%）8种血清型,其携带的毒力因子为STa、Stx2e、astA和eaeA等。结果表明,引起京郊仔猪腹泻的大肠杆菌主要有8个血清型,其中O101型发病比例最高。其携带的毒力因子主要为astA和eaeA,占全部菌株的50%以上,STa和Stx2e因子占全部菌株的30%以上。本试验结果将为今后京郊地区仔猪腹泻病的防控提供有效的数据支持。     

双重PCR检测猪产肠毒素性大肠埃希菌耐热肠毒素基因

为了研究猪产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素基因(STa、STb)的临床快速诊断方法,试验以已发表的猪ETEC耐热肠毒素基因保守区为目的片段设计合成了2对可扩增182bp和108bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因的双重PCR检测方法。结果表明:该方法对猪肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌、鼠伤寒沙门杆菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性;对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果STa+5株、STb+2株,其中STa+STb+1株。     

四川阿坝州牦牛源溶血性大肠杆菌血清型鉴定及毒力相关基因检测

为了解牦牛源溶血性大肠杆菌血清型及毒力相关基因,本研究从四川阿坝州采集的牦牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠杆菌,并通过玻板凝集结合试管凝集试验鉴定其血清型,采用PCR方法检测大肠杆菌的4个溶血素基因及其它7个毒力相关基因。结果显示,从临床健康的牦牛鼻腔中分离鉴定出74株溶血性大肠杆菌,分离率为19.2%(74/386)。O血清型鉴定结果显示,74株牦牛源溶血性大肠杆菌中已确定O血清型的菌株有60株,共24种O血清型,其余14株未能定型。PCR检测与溶血素相关的4个基因携带率分别为96.0%(hly A)、86.5%(hly E)、14.9%(ehly)和2.7%(ehx);有4种溶血素基因组合,分别为hly A~+(96.0%),hly E~+(86.5%),hly A/hly E双阳性(80.9%),ehx/hly E双阳性(2.7%);其它毒力相关基因的检出率分别为93.2%(irp2)、93.2%(fyu A)和2.7%(stx2);LT、STa、STb和K99基因未检出。研究结果表明,溶血性大肠杆菌存在于临床健康牦牛鼻腔内,血清型复杂且无优势血清型,大肠杆菌溶血素相关基因和高致病性毒力岛相关基因携带率高。本研究首次对四川阿坝州牦牛源溶血性大肠杆菌的血清型和毒力相关基因进行了研究,提示在牦牛中存在溶血性大肠杆菌的潜在威胁。     

猪大肠埃希菌分离鉴定及毒力因子PCR检测

为了解陕西省宁强县部分地区引起仔猪黄白痢的致病性大肠埃希菌的主要血清型及其主要毒力因子,用细菌分离培养方法,从宁强县5个猪场采集的60份有疑似黄白痢症状仔猪的肛门拭子中分离出20个大肠埃希菌菌株。经菌落形态观察、革兰染色镜检、培养特性、生化试验、血清型鉴定,确定分离菌株均为致病性大肠埃希菌。血清分型表明,20个分离菌株中有18株能确定血清型,分布在7个血清型中,其中优势血清型为O8(8株),占总数的40%。药物敏感性试验表明,分离菌株对临床常用药物具有抗药性。毒力因子的PCR检测结果表明,分离菌株均不携带STa、STb、LT和SLT-2e四个毒力基因。     

一规模化猪场断奶仔猪腹泻大肠杆菌毒力因子的检测

从疑似断奶仔猪腹泻的仔猪中分离、鉴定出15株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定,11株为0131、4株未定型,所有O131血清型菌株呈β溶血。多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,O131菌株的毒素为STa、STb、SLT-2e,表达F18粘附素,未定型菌株的毒素为STa,共表达F6和F18粘附素。对15株大肠杆菌用16种抗生素进行药敏试验,结果表明:分离株对阿米卡星、痢特灵、新霉素敏感,而对多种抗生素产生了不同程度的耐药性。运用本场大肠杆菌分离株灭活苗免疫猪群,取得良好效果。     

一例鸽大肠杆菌病的病原鉴定及其致病性研究

为了确定某赛鸽公棚病死赛鸽的病原菌,试验从送检病死鸽的肝脏分离出病原菌,然后对病原菌进行纯化培养、染色、生化试验、血清型鉴定、菌毛基因PCR检测与系统发育分析,以及肠毒素基因PCR检测、动物致病性试验。结果表明:共分离得到7株病原菌,7株病原菌均符合大肠杆菌的生物学特性;血清型分别为O55(3/7)、O1(1/7)、O164(1/7),2株未定型;分离菌除O164外,其余6株均表达黏附素基因K99、肠毒素基因STa及LT毒力因子; O55分离株对试验鸽有一定的致病性。说明该公棚赛鸽病死系由大肠杆菌引起。