鱼粉国标中氨基酸指标的快速检测方法

建立鱼粉国标中氨基酸指标的微波水解测定法,缩短氨基酸分析时间,以便快速检测大批量样品。采用正交试验设计,通过与常规水解比较,得到最佳水解条件,同时通过检测同一样品,考察微波水解方法的稳定性。通过正交试验,得到微波水解的最佳条件是巯基乙醇含量为0.5%、水解温度160℃、水解时间20 min。在3个月内,微波水解法测定鱼粉中蛋氨酸和赖氨酸结果RSD均小于1%,证明微波水解的稳定性较好。微波水解和常规水解检测同一样品结果相对偏差均小于2%,且测定结果不存在显著差异(FF0.10)。微波水解与常规水解测定鱼粉中蛋氨酸和赖氨酸的结果无明显差异,且微波水解法稳定性较好,可用微波水解法代替常规水解法进行鱼粉蛋氨酸和赖氨酸的快速检测。     

藏猪粪样微生物对不同纤维底物的体外发酵

试验选用藏猪(n=5)新鲜粪样作为发酵接种物,以小麦、豌豆、燕麦和油菜秸秆为纤维底物分别进行体外发酵,测定产气量、发酵液中挥发性脂肪酸(volatile fatty acid,VFA)和铵态氮(NH3-N)的含量以及各纤维底物中纤维素和半纤维素降解率。结果显示:经发酵,各底物中纤维素和半纤维素的含量显著降低,豌豆秸秆中半纤维素降解率显著高于其他3种底物;豌豆秸秆产气量最高,且理论最大产气量显著高于其他3种底物,油菜秸秆的产气延滞时间显著低于其他3种底物;各底物发酵液中,乙酸和丙酸含量最多,且豌豆秸秆乙酸含量显著高于其他3种底物,而燕麦秸秆丙酸含量显著高于其他3种底物。各底物发酵液中铵态氮质量浓度为7.09~11.53g/L。结果表明:藏猪肠道微生物能够分解粗纤维,并且对豌豆秸秆的利用率较高,为藏猪非常规饲料资源的开发和利用提供理论依据。     

玉米秸秆降解真菌的筛选及鉴定

为了筛选到高效玉米秸秆降解真菌。实验以树林、稻田、玉米田等地土层下5 cm取得的腐殖质土壤为样品进行富集培养,通过刚果红染色法进行初步筛选,滤纸崩解法复筛,分别以羧甲基纤维素钠和玉米秸秆粉为唯一碳源,经30℃、120 r/min摇床培养72 h测定纤维素酶活性,液态发酵方法考察实际降解能力,通过分子学方法鉴定菌株。获得2株具有较高纤维素酶活和玉米秸秆降解能力的真菌菌株Z_(2-6)和Z_(3-5),液体发酵15 d后,秸秆降解率分别是59.43%和59.13%,通过分子学鉴定都为尖孢镰刀菌。真菌菌株Z_(2-6)和Z_(3-5)是具有较好研究价值的玉米秸秆纤维素降解真菌。     

纤维袋测定饲料原料中NDF和ADF含量方法的研究

为探讨用纤维袋测定饲料NDF(中性洗涤纤维)和ADF(酸性洗涤纤维)含量的方法,本试验选取新疆本地几种饲料,以ANKOM技术所测结果为参照,对在纤维袋测定过程当中的消煮时间、淀粉酶的添加量、是否添加无水亚硫酸钠和是否需脱脂等处理条件进行优选。试验结果表明:用纤维袋测定次粉、麸皮、玉米以及米糠的NDF值和ADF值,与ANKOM测定值最接近的处理条件为:消煮时间为1 h,ANKOM酶添加量分别为400、300、500、0μl/100 ml,不需要添加无水亚硫酸钠,不需要脱脂处理,消煮后均需用丙酮淋洗。     

温度对侧耳菌处理秸秆饲料营养价值及纤维分解酶活性的影响

试验旨在研究温度对侧耳菌处理玉米秸秆饲料营养价值及纤维分解酶活性的影响。在16,20和24℃温度条件下,采用侧耳菌处理玉米秸秆饲料,测定处理秸秆纤维素、半纤维和木质素含量、纤维素和木质素分解酶活性及秸秆养分瘤胃消失率。结果表明,在3个温度条件下,处理秸秆的纤维素、半纤维素和木质素含量均随时间的延长而降低。16℃组3种纤维含量降低速度(P<0.05)、酶活性(P<0.01)及干物质瘤胃消失率(DMD₄₈)(P<0.05)显著低于20和24℃组,而20℃组与24℃组以上指标没有显著差异,这2组秸秆DMD₄₈随着时间延长而增加,21 d后趋于稳定。结果显示温度显著影响侧耳菌处理秸秆饲料的纤维含量和营养价值,16℃处理秸秆显著低于20~24℃,而20℃与24℃处理秸秆饲料的纤维含量和营养价值差异不显著。     

CNCPS及体外产气法评价青海地区6种常用粗饲料的营养价值

本研究以豌豆秸秆、蚕豆秸秆、苜蓿干草、小麦秸秆、燕麦青干草、青贮玉米秸秆为研究对象,先采用概略养分法和康奈尔净碳水化合物—蛋白质体系(CNCPS)进行6种粗饲料养分含量的化学分析,再利用体外产气法进一步评价6种粗饲料在牦牛瘤胃内的发酵产气参数,为以上粗饲料在牦牛养殖中的应用提供重要基础数据。结果表明:苜蓿干草CP、CNSC含量最高,NDF含量最低,具有良好的营养价值,是优质粗饲料;小麦秸秆CP、CNSC含量最低,NDF含量最高,营养价值较差;青贮玉米秸秆和燕麦青干草CC和PC含量较低,营养价值优于豌豆秸秆、小麦秸秆、蚕豆秸秆;6种粗饲料48h积累产气量和有机物消化率由大到小依次为青贮玉米秸秆燕麦青干草苜蓿干草豌豆秸秆小麦秸秆蚕豆秸秆,代谢能由大到小依次为青贮玉米秸秆苜蓿干草燕麦青干草豌豆秸秆小麦秸秆蚕豆秸秆,苜蓿干草和燕麦青干草ME没有显著差异; CNCPS测定指标较多,可在一定程度上反映动物对饲料利用情况,对饲料营养价值的评价更精确;青贮玉米秸秆有益于反刍动物瘤胃微生物的发酵和利用。     

饲用羽毛肽粉的制备

本试验采用碱解法制备羽毛肽粉,旨在建立羽毛肽粉中寡肽、游离氨基酸含量的评测体系,并利用飞行时间质谱测定该体系能分离出羽毛多肽的分子量。通过均匀设计试验,获得了碱解法制备羽毛肽粉的最优试验条件:水温90℃、处理334min、液固比2.3%、碱浓度1.8%。本方法制备的羽毛肽粉产品中2kDa以下寡肽含量达87.74%,产品外观类似鱼粉。氨基酸组成测定结果表明,本羽毛肽粉角蛋白含量低、氨基酸营养均衡,具有潜在的饲用价值。     

微波处理黄连对小檗碱含量的影响

以药材粉碎细度、用水量、提取次数、提取时间等因素设计正交试验,测定从经微波处理的黄连中提取小檗碱的得率及其含量。结果表明,从微波处理的黄连中提取小檗碱的最优条件为：药材粉碎细度控制在10目,用8倍量水,加热回流提取4次,每次0.5 h。     

不同浓度的纤维素复合酶对小麦秸秆营养价值的影响

应用纤维素类酶制剂添加于饲料中,可以改善粗饲料的营养价值,提高饲料利用率,降低饲料成本,还可以提高反刍动物对纤维素类物质的消化率。试验研究饲用纤维素复合酶处理小麦秸秆粗饲料,为更好地利用纤维素复合酶提供理论依据。1试验材料与方法1.1材料风干小麦秸秆,来自青海大学农牧学院饲养场,粉碎过40目筛;酶制剂,由西宁城北复合预混料厂提供,主要含有纤维素酶、β葡聚糖酶和木聚糖酶。1.2处理方法称取4.0000g小麦秸秆,加入pH值5.0的醋酸醋酸钠缓冲液(10g/dL)处理。纤维素复合酶的添加按重量比为0和0.1%,温度40℃分别处理6,12,24,36,48h,每…     

酸性高锰酸钾溶液处理对秸秆消化率的影响

用不同浓度的酸性高锰酸钾溶液对玉米秸秆进行处理,应用范氏(VanSoest)洗涤纤维分析法测定纤维素、半纤维素、木质素及酸不溶灰分的含量,采用两级离体消化试验测定干物质消化率。试验结果表明酸性高锰酸钾溶液能使秸秆中木质素溶解,含量下降1.89%～7.81%,并使秸秆的干物质消化率提高10.43%～23.85%。试验结果还显示,7%浓度的酸性高锰酸钾溶液处理秸秆效果最好。     

巨菌草制备纳米纤维素及其表征

以巨菌草(Pennisetum sinese)为原料,采用硫酸水解法制备了纳米纤维素,考察了硫酸质量分数、反应温度和反应时间等因素对纤维素分离过程以及得率的影响,同时进行了工艺优化试验。采用透射电子显微镜（TEM）、傅利叶红外光谱仪（FTIR）、Zeta电位测定仪和X射线衍射仪（XRD）对纳米纤维素的形貌、体系稳定性、谱学性能、晶体结构和晶体性能进行了表征。结果表明,硫酸质量分数为50%,反应温度60 ℃,反应时间150 min时,纳米纤维素的得率最高,达到75.4%。电镜观察纳米纤维素为棒状,直径约20 nm,长度100~200 nm;XRD图谱表明纳米纤维素的结晶度较巨菌草纤维显著提高;与巨菌草纤维相比,所制得的纳米纤维素Zeta电位明显增大,表明其具有较好的稳定性。     

茯苓多糖含量测定方法研究

目的：测定不同产地茯苓中茯苓多糖的含量。方法：采用苯酚-硫酸法测定茯苓多糖吸光度。结果：对来自不同产地的10个样品进行测定。结论：茯苓多糖最佳检测条件为检测波长490 nm;5%苯酚用量为1.2 mL;浓硫酸用量为7.0 mL;反应时间为30 min;温度45℃。     

呼伦贝尔地区野生山野豌豆种子硬实破除方法研究

以呼伦贝尔采集的野生山野豌豆（Vicia amoena）种子为材料,通过室内及田间试验研究其种子萌发状况,寻找破除种子硬实的有效方法。结果表明：在各种破除种子硬实的方法中,擦破种皮及浓硫酸浸泡种子效果最为明显,擦破种皮处理的发芽率和发芽势分别为98.67%和98.00%;浓硫酸不同浸泡时间产生的效果存在差异,其中以浸泡30min效果最为明显,发芽率和发芽势均为99.33%,浸泡5～30min时随着时间的增加发芽率呈逐步增加的趋势,浸泡60min的处理,发芽率和发芽势均为97.33%,与浸泡30min处理相比呈下降趋势;而不同温度水浴、40%的氢氧化钠溶液浸泡不同时间对发芽及出苗效果均不明显。     

野生狭叶荨麻种子形态与萌发特性的研究

以野生狭叶荨麻种子为材料,观测其外部形态和活力,分别采用15,20,25,30和35℃不同温度条件与50,100,300和500mg/L4种赤霉素浓度以及98%浓硫酸、35%氢氧化钠不同时间浸种,研究狭叶荨麻种子的萌发特性。结果表明,荨麻种子长958.72μm、宽534.85μm,当年收获的种子活力为83.25%,种子卵形,淡黄色,千粒重为0.1045g。最适萌发温度为25℃,发芽率为42.67%。用98％浓硫酸和35%的氢氧化钠处理,能提高其发芽率,酸蚀以5min、碱蚀以15min为宜,赤霉素浸种对发芽率无明显影响。     

不同消毒方式对假俭草种子愈伤诱导的影响

为确定假俭草(Eremochloa ophiuroides)再生体系中种子外植体的消毒方式,经过预备试验后共设计A,B,C,D 共4组2系列8种消毒方式。A1:3.5%次氯酸钠消毒25 min,A2:浓硫酸灼烧30 s+3.5%次氯酸钠消毒20 min,B1:7%次氯酸钠消毒20 min,B2:浓硫酸灼烧30 s+7%次氯酸钠消毒20 min,C1:0.05%升汞消毒20 min,C2:浓硫酸灼烧30 s+ 0.05%升汞消毒15 min,D1:0.1%升汞消毒15 min,D2:浓硫酸灼烧30 s+ 0.1%升汞消毒10 min。结果表明:A2的愈伤诱导效果最好,达到52%;D1的愈伤诱导率最低,仅17.33%,其他处理的愈伤诱导率介于二者之间。发现浓硫酸灼烧假俭草种子30 s,可显著提高出愈率;试验证实消毒剂次氯酸钠比升汞有利于假俭草种子的愈伤诱导。     

获得最大酵母多糖提取率的破壁方法研究

试验旨在选择获得最大酵母多糖提取率的酵母菌破壁方法。以酵母多糖提取率与细胞破壁率为综合评定指标,首先对超声波破碎、超声波清洗、反复冻融、蛋白酶处理4种方法进行条件优化,选择最适破壁条件;然后将此4种单一的破壁方法与超声波破碎和蛋白酶处理协同方法相比较,确定获得最大多糖提取率的破壁方法。结果表明,当超声波清洗时间达到40 min、超声波破碎时间达到50 min时,酵母多糖提取率达到最大值;当菌泥加水量和冻融次数分别为15%与3次时,多糖提取率最大;当蛋白酶用量300 IU/g、酶解时间15 h、pH 5.0、处理温度40℃时,蛋白酶处理的多糖提取率最高。4种破壁方法中蛋白酶处理的效果最佳,对应的多糖提取率为149.81 mg/g,破壁率为53.49%。协同破壁处理的提取效果要优于单一的破壁方法,但考虑到协同作用对多糖结构的完整性构成威胁,将蛋白酶处理确定为最佳的酵母菌破壁方法。     

The Study of Cell Wall Breaking Methods to Obtain Maximum Extraction Rate of Yeast Polysaccharides

The aim of this study was to determine the optimal method of the yeast cell wall breaking which could obtain the maximum extraction rate of yeast polysaccharide. The extraction rate of yeast polysaccharide and the cell wall broken rate were used as the evaluating indexes. The conditions of ultrasonic disruption, repeated freezing and thawing, ultrasonic cleaning and protease treatment were optimized to select the appropriate parameters in cell wall breaking. The effects of these 4 methods and the synergistic action of ultrasonic disruption and protease treatment were compared. The results showed that when the ultrasonic cleaning time was 40 min and ultrasonic disruption time was 50 min, the water content of slurry was 15% and the times of freezing and thawing was 3, and the protease treatment was carried out at 40℃ for 15 h with enzyme concentration 300 IU/g and pH 5.0, respectively, the extraction rates of yeast polysaccharides were the highest. The effect of protease treatment was the best among these 4 cell wall breaking methods, its extraction rate of polysaccharide was 149.81 mg/g and the cell wall broken rate was 53.49%. The effect of combined way was better than that of single treatment, but the synergistic action would destroy the integrity of polysaccharide's structure. So the protease treatment was thought an ideal cell wall breaking method of yeast.     

灭菌乳中氨基酸测定条件改进

考察茚三酮比色法测定灭菌乳中氨基酸条件的主要影响因素。通过单因素及正交试验对其测定条件进行改进。结果表明：水浴时间对测定结果影响显著,要严格控制。茚三酮比色法测定灭菌乳中氨基酸的最佳条件为：水浴时间30min、水浴温度70℃、茚三酮用量1.2mL,在此条件下测得灭菌乳中氨基酸含量为1.62g/100mL。     

燕麦秸—稻草混合青贮的研究

为解决南方冬—春季牧草缺乏及能够合理利用南方稻草资源,对燕麦秸—稻草混合青贮样品设置了4个处理.结果表明,1号处理pH、氨态氮占总氮含量显著高于其他3组青贮饲料（P＜0.05）,4号处理的pH和氨态氮占总氮含量显著低于其他3组青贮饲料（P＜0.05）,4号处理粗蛋白含量最高,且4个处理间粗蛋白含量存显著性差异（P＜0.05）;4个处理组均未检测出丁酸.综合试验结果,单贮燕麦秸可以得到优良的青贮饲料,且鲜燕麦添加比例为70％的燕麦—稻草混贮效果与其相近.     

鸭疱疹病毒1型的gB蛋白截短表达及其ELISA检测

参照已发表的鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）基因组序列,利用生物学软件DNAstar进行序列分析,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增了长855 bp的gB基因片段.将目的片段克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,定向克隆至pET30a表达载体中,经PCR、酶切鉴定正确后,重组质粒转化BL21表达茵,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白.重组蛋白在变性的条件下采用Ni柱亲和层析法纯化,变性蛋白复性后,Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应活性,以该蛋白作为诊断抗原,初步建立了检测鸭肠炎病毒抗体的间接ELISA诊断方法,为鸭肠炎病毒抗体诊断试剂盒的研制奠定了基础.