重组细胞因子在禽类疫苗中的应用进展

细胞因子是免疫系统的重要调节因子,具有明显的免疫佐剂效应。随着鸡细胞因子(IL-2,IL-6,IL-12,IL-18,IFN-γ等)相继克隆成功,重组细胞因子在禽类疫苗中的应用研究也逐步深入。研究表明,用原核、真核载体或者病毒构建的细胞因子重组质粒或表达的重组蛋白,能很好的发挥免疫佐剂的活性。论文综述了细胞因子的免疫增强机制,以及重组细胞因子在现代禽类疫苗中的应用概况。     

论兽医临床中细胞因子免疫佐剂的效应机制及其应用

随着我国畜牧业的不断发展,兽医的重要性也随之凸显。由于兽用抗生素的滥用以及畜牧业密度的升高,各种兽类疾病特别是病毒性疾病越来越多,病症表现也越来越复杂。新型的细胞因子免疫佐剂作为目前医学研究的先锋领域,在细菌、病毒、寄生虫等疾病的治疗和疫苗研发方面起着重要的作用。本文介绍了部分常用细胞因子免疫佐剂的效应机制以及其在兽医临床中的应用,以供畜牧业从业人员及兽医工作者参考。     

基因工程技术在畜牧兽医上的应用及展望

自从Ｗａｔｓｏｎ和Ｃｒｉｃｋ于１９５３年发现ＤＮＡ双螺旋结构以来，分子生物学取得了飞跃性发展。形成了以基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等为主要内容的现代生物技术。近十多年是世界生物技术迅速发展时期，无论在基础研究方而还是应用开发方面，都取得了令人瞩目的成就，生物技术在生命科学的所有领域得到了广泛的应用，促进了相关学科的发展，也使畜牧业生产达到更高水平。尤其是近年来基因工程育种取得了一些鼓舞人心的成果，正在改变畜牧业研究的方向，展示了其广阔的应用前景。本文拟就基因工程在畜牧兽医上的研究现状，趋…     

基因工程技术在免疫应用中的研究进展

基因工程技术在兽医领域中的免疫应用,为疾病的预防和治疗开辟了新的途径,成为一项新的具有远大发展前景的技术体系。１新一代疫苗─—基因工程疫苗 随着分子生物学和基因工程技术的发展,新一代动物疫苗应运而生。基因工程疫苗的出现解决了常规疫苗在预防畜禽传染病方面许多自身难以克服的缺陷,如弱毒苗由于变异或与野毒株发生基因重组而产生的毒力返强;灭活苗免疫保护期短,存在灭活不当造成疾病传播的问题;有些病原微生物由于变异而产生多种血清型等。１．１基因工程活载体疫苗：活载体疫苗是以活病毒为载体,将致病性病原体的外源…     

用于免疫治疗和疫苗佐剂的禽细胞因子

随着饲用抗生素及化学药物广泛的禁用 ,需研究替代方法以确保畜牧业不会受到影响 ;对家禽的研究结果表明 ,被饲料中抗生素抑制的产气芽孢杆菌若大量繁殖将会引起胃肠疾病并导致畜产品产量和品质的下降。因此 ,研制促畜禽生长的抗生素替代品至关重要。1　抗生素的替代品一种抗生素替代品如纤维素酶可增加饲料消化率并促进肠道菌群的平衡。消化后的营养成分被鸡体吸收用于能量代谢和生长而不是被肠道微生物消耗。另一个替代品是甜菜碱 ,它能降低肠道寄生虫如艾美耳球虫引起的损伤 ,抑制球虫的再次感染 ,降低肠炎的发生率。细菌素是由某些细菌…     

新型免疫佐剂的研究进展

免疫佐剂是指先于抗原或与抗原同时应用,能非特异地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答,以及增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型,而本身无抗原性的物质.随着免疫学研究的不断深入和基因工程技术的迅速发展,针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制,但这些疫苗普遍存在分子小、免疫原性弱、难以诱导机体产生有效免疫应答等不足,从而需要某种物质来协同这种作用,免疫佐剂就在这种情况下产生了.文章对近年来免疫佐剂的研究概况进行了综述,现介绍如下.     

细胞因子及其应用的研究进展

概述了细胞因子的特性、分类及其基因转录和表达调控的机理，介绍了一些细胞因子在疾病诊断、治疗和预防方面的作用，对其在免疫学，特别是作为疫苗佐剂方面的应用前景进行了展望。     

DNA疫苗免疫佐剂的研究及应用

DNA疫苗是近年来出现的一种新型疫苗,能够诱导机体免疫系统产生体液免疫和细胞免疫,在预防和治疗人和动物的疾病中发挥重要的作用。随着DNA疫苗研究的深入和扩展,用于提高DNA疫苗免疫效果的免疫佐剂也逐渐开展起来。本文就新型细胞因子佐剂、趋化因子和协同刺激分子佐剂、补体分子佐剂和CpGDNA佐剂的研究作一综述。     

鸡的7种细胞因子的一些分子生物学特性

细胞因子是免疫系统的重要调节因子 ,能够影响免疫应答的类型和水平。近年来 ,禽细胞因子研究取得很大进展 ,随着更多鸡细胞因子基因的发现及其生物学特性的研究 ,临床应用细胞因子成为可能。文章对 7种鸡细胞因子——干扰素 (I型和 II型 ) ,白细胞介素 (IL-2、IL-6、IL-1 5和 IL-1 8)和鸡髓细胞生长因子(c MGF)一些生物学特性作了综述 ,主要包括c DNA克隆的方法、c DNA及其编码蛋白的生物学特性、检测方法、主要生物学功能 ,并与相应的哺乳动物细胞因子比较 ,阐明鸡的细胞因子与哺乳动物的异同点。     

Cytokine response of porcine cell lines to Salmonella enterica serovar typhimurium and its hilA and ssrA mutants

Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium) is a facultative intracellular bacterium which can infect and colonize pigs. After contact with enterocytes and macrophages, S. Typhimurium induces production of cytokines thus triggering the innate immune response. In this study we evaluated the cytokine response of two porcine cell lines, IPI-2I and 3D4/31, of epithelial or macrophage origins, respectively, to the wild-type S. Typhimurium and its hilA and ssrA mutants. We observed that the 3D4/31 cell line essentially did not respond to S. Typhimurium infection when a medium with foetal calf serum was used. However when the 3D4 cell line was incubated overnight in the presence of porcine serum, it efficiently responded to the wild-type strain and the ssrA mutant but not to the noninvasive hilA mutant as measured by mRNA quantification of TNF-alpha, IL-8 and GM-CSF by the real-time RT-PCR. In IPI-2I, all the cytokines were also induced by the wild-type S. Typhimurium and the ssrA mutant although the induction of TNF-alpha was lower than that induced by the wild-type strain. The hilA mutant was unable to induce any of the cytokines tested. The ssrA mutant can therefore be considered as more suitable for further vaccine development as the stimulation of innate immune response is important for animal protection against a challenge with virulent strains.     

奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及其活性检测

为了表达奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并对其活性进行检测.根据GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列(U22385),设计一对特异性引物;采用RT-PCR方法,以LPS体外诱导的奶牛肺泡巨噬细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛GM-CSF cDNA基因,克隆到pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定,结果显示克隆的奶牛GM-CSF基因与GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.3%.构建pET32a-GM-CSF原核表达重组质粒,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白大小约为35 ku.分别运用集落形成试验与MTT比色法测定重组蛋白活性,结果显示重组奶牛GM-CSF蛋白能够诱导粒细胞前体呈集落性生长并具有较强的体外增殖淋巴细胞的活性,为下一步临床试验奠定了基础.     

以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素DNA疫苗的安全性和稳定性

将含GM-CSF基因与生长抑素(SS)的融合真核表达质粒pGM-CSF/SS转入减毒沙门氏菌株CS022。选择40只22~24 g的雌性小鼠,随机分成4组,其中1组为对照组,口服生理盐水;2~4组为试验组,分别用上述重组减毒沙门氏菌株CS022以108、109、1010CFU的剂量口服免疫小鼠,2周后以相同的剂量加强免疫,研究pGM-CSF/SS真核表达质粒在体内的稳定性和减毒沙门氏菌对小鼠的安全性。同时通过体外传代,研究该真核表达质粒在体外的稳定性。结果表明:108、109CFU剂量口服小鼠,成活率达100%,而1010CFU剂量口服小鼠成活率降低至90%,腹泻率达50%。体外传10代和口服免疫4周后从小鼠肝脏和脾脏分离的减毒菌用琼脂糖凝胶电泳和酶切鉴定法证实,减毒菌中的重组质粒在体外和侵入小鼠体内过程中具有较好的稳定性。质粒DNA在传10代以后,虽然每代的质粒DNA含量有些变化,但总体趋势基本是恒定的,第10代时,质粒DNA的含量与第1代的含量差异不显著。上述结果提示,利用该减毒沙门菌作为载体传递pGM-CSF/SS DNA疫苗免疫小鼠具有相对安全性和稳定性,为进一步有效激发机体的免疫应答提供了前提。     

抑制素与羊GM-CSF基因融合表达质粒pCGMISI和pEGMISI的构建

为构建抑制素基因与羊GM-CSF基因融合的真核表达质粒,通过EcoRI、XhoI酶切抑制素真核表达质粒pCISI、pEGISI及羊GM-CSF表达质粒pGM-CSF/SS,然后将GM-CSF基因分别插入pCISI、pEGISI,转化DH5α,挑选阳性克隆,抽提质粒DNA,进行酶切和测序鉴定。结果表明,构建的抑制素融合表达质粒pCGMISI和pEGMISI正确,为研究GM-CSF基因对抑制素基因疫苗的免疫增强作用奠定了基础。     

羊传染性脓疱病毒疫苗株和野毒株GIF基因比较分析

羊传染性脓疱(orf)是由羊传染性脓疱病毒(orf virus,ORFV)感染引起的绵羊和山羊的一种接触性人兽共患病。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/白细胞介素(IL-2)抑制因子(GIF)基因为ORFV编码中晚期病毒基因,它能够与GM-CSF、IL-2结合并且抑制二者的活性,从而抑制宿主抗病毒作用。为了比较疫苗毒株和流行毒株间GIF的差异,本试验扩增并测定了ORFV疫苗株和野毒株的GIF基因序列,比较分析了ORFV疫苗弱毒株和野毒株GIF基因的核酸水平和氨基酸水平的差异情况,以及二、三级蛋白结构。结果表明:本次测定的ORFV疫苗株与野毒GIF基因核苷酸序列相似性为94.3%,氨基酸序列相似性为92.5%,两者的蛋白三级结构预测上也有差异。本研究结果为该病的防控提供了参考依据。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因佐剂对DNA疫苗的免疫调节作用

DNA疫苗具有制备简单,不需要蛋白质的合成、提取与纯化,免疫效果维持时间长,稳定性好,易保存等特点。但由于种与种之间免疫遗传差异,DNA疫苗往往对大动物特别是对哺乳动物的免疫效果不理想。细胞因子常作为基因佐剂用以增强DNA疫苗的免疫原性。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一个具有多项潜能的造血生长因子,在免疫反应中具有重要作用,编码GM-CSF的质粒能增强DNA疫苗的免疫效果。本文就GM-CSF的分子结构、对增强疫苗免疫原性、协同其他因子作用等方面作一综述。同时介绍了基因佐剂与目的基因表达质粒的构建方案。     

柔嫩艾美耳球虫卵囊免疫后鸡盲肠扁桃体GM-CSF基因表达的动态变化

为检测和评价鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ChGM-CSF）在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了ChGM-CSF编码基因的开放阅读框（ORF）,其长为435 bp。将试验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12、22日龄时用E. tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每次取5只鸡采集盲肠扁桃体,以鸡β-actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChGM-CSF的表达动态。结果表明,在第1次免疫后的第1天（13日龄,P＜0.05）和第2次免疫后的第7天（29日龄,P＜0.01）,试验组ChGM-CSF的表达量显著高于对照组;在第1次免疫后的第9天（21日龄）和第2次免疫后的第3天（25日龄）ChGM-CSF的表达量显著低于对照组（P＜0.01）。本研究提示ChGM-CSF参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChGM-CSF的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础。     

干扰素的研究进展及其在动物临床中的应用

干扰素(interferon,IFN)是由干扰素诱生剂诱导生物细胞产生的一类多功能、具抗病毒活性的糖蛋白,具有抵抗病毒感染、抑制肿瘤细胞生长与调节机体免疫功能的作用,成为当今免疫学等相关领域的研究热点.该文简要介绍了干扰素的分类、生物学活性与作用机理以及近年来在动物临床中的应用和开发进展情况.     

惠阳胡须鸡IFN-α基因克隆和序列分析

根据红色原鸡IFN－A基因设计了引物对，采用PCR法克隆并测序了我国地方标准品种惠阳胡须鸡的IFN－α基因，定名为HyIFNA4.HyIFNA4与红色原鸡类IFN－α比较，FORF长度均为582个核苷酸，编码162个氨基酸，相互间同源性在97．4％－99％。UPGAM法构建鸡IFN基因系统树进一步揭示了HyIFNA4可能是一种新亚型干扰素。