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相似文献
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1.
应用荧光PCR方法,对东莞市12个屠宰场份的120猪内脏和11个冻肉库的110份冻肉进行了猪链球2型检测,结果均为阴性。并随机从样品中选出22份样品进行了细菌分离鉴定,均未分离出猪链球菌2型。结果表明猪链球菌2型荧光PCR检测方法与传统的细菌分离鉴定方法一致,猪链球菌2型荧光PCR检测方法适合大规模动物产品的检测。  相似文献   

2.
四川省猪链球菌的分离与鉴定   总被引:6,自引:0,他引:6  
从41份病、死猪病料中分离到SC1-SC19 19株细菌,结合培养特性和生化特性鉴定为猪链球菌,通过玻片凝集试验,用猪链球菌2型阳性血清将最初分离出来的4株菌(SC1-SC4)鉴定为猪链球菌2型。同时还进行了动物试验和药敏试验,为及时有效地控制疫情提供了科学依据。  相似文献   

3.
根据猪链球菌16SrDNA基因的种特异性基因序列和CPS基因的2型(1或/和2型)型特异基因序列设计了4条引物,建立了快速检测猪链球菌2型(1或/和2型)的多重PCR方法。利用保存的猪链球菌2型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株对该方法进行了敏感性和特异性试验。结果显示,所建立的多重PCR方法特异、敏感,对组织中的猪链球菌2型(1或/和2型)的最低检出水平为30CFU/mL。用所建立的多重PCR方法对采自江西、北京、珠海、天津、四川等省市的猪扁桃体样品进行了检测,并通过细菌分离和玻片凝集试验对其检测结果进行了验证,结果显示,检出阳性符合率为100%,证实建立的多重PCR方法可用于猪链球菌2型的快速检测。  相似文献   

4.
根据猪链球菌2型的mrp基因自设计和合成了一对可扩增长度为885bp目的片段的引物,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白(MPR)的PCR方法,用XbaⅠ内切酶进行酶切,获得了与预期一致的578bp和307bp2的2个片段,并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性;检测的敏感度可达100个细菌。另外,对9株从病猪体内分离的猪链球菌2型菌株进行检测了8个呈阳性;对15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是1份为阳性。结果表明此法特异性敏感性均很高,可作为MRP快速诊和流行病学调查的手段。  相似文献   

5.
从送检的一份疑似链球菌病病死猪病料中分离出1株细菌,通过对分离菌株进行细菌的培养特性、生化试验、玻片凝集试验及PCR分型鉴定,确定为2型猪链球菌,动物致病性试验表明,1×108 CFU/mL的剂量可致死小白鼠,对该分离菌株的毒力因子进行PCR检测发现,溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)和溶血素(sly)均为阳性。此菌的分离鉴定为自家灭活菌苗的制备提供了候选菌株。  相似文献   

6.
从锦州地区的6个区县发病猪场采集18份疑似猪链球菌病病料进行细菌的分离和生化鉴定,分离到链球菌18株。对分离到的细菌进行系统的病原学研究,其形态、染色均符合链球菌的特点,具α或β溶血,用国际通用的链球菌乳胶凝集试验和玻片凝集试验对分离的18株链球菌进行血清型鉴定。该研究对预防和控制锦州地区猪链球菌病的流行提供了重要依据。  相似文献   

7.
猪传染性胸膜肺炎PCR诊断方法的建立   总被引:12,自引:2,他引:10  
根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌APXIV毒素的基因序列,自行设计和合成了二对可扩增448bp和365bp目的片段的引物,成功的建立了检测APP的套式PCR方法。通过对猪肺疫巴氏杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体和猪丹毒杆菌的DNA进行了PCR检测,结果均为阴性;对猪胸膜肺炎放线杆菌的1、2、5、6、7、9国际标准血清型均扩增出448bp和365bp的特异性条带;检测的敏感度一步PCR可达到5OO个细菌,最低检出DNA浓度可达到0.585ng/mL;套式PCR可达到50个细菌,最低检出DNA浓度可达到58.5pg/mL。另外,对5株从病猪体内分离的猪胸膜肺炎放线杆菌进行了检测,5株均成阳性反应;对10只屠宰猪的肺脏分离物进行了检测,结果1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高,可做为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断和流行病学调查的手段。  相似文献   

8.
为了解上海市屠宰场屠宰生猪丹毒丝菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌的分离情况,采取传统方法进行细菌分离,利用全自动微生物生化鉴定系统、全自动快速微生物质谱检测系统、普通PCR方法进行细菌鉴定。结果发现猪丹毒丝菌分离率为61%,猪链球菌分离率为7%,副猪嗜血杆菌分离率1%;猪丹毒丝菌从肺脏、扁桃体中均分离到,分离率高,猪链球菌和副猪嗜血杆菌从扁桃体中分离到,分离率低。  相似文献   

9.
用广西猪链球菌2型强毒株GX01、GX02分别以菌量1.92×108CFU及2.80×109CFU接种猪链球菌2型商品疫苗免疫猪、北里霉素预防猪及对照猪进行药物防治及疫苗保护试验。结果对照猪72h内全部死亡,从死亡猪分离到的细菌应用建立的3重PCR检测方法检测及序列分离证实为GX01、GX02;而疫苗免疫猪、北里霉素预防猪攻毒15d后仍存活,经活体采扁桃体分离、检测,猪链球菌2型阴性。猪链球菌2型商品疫苗及北里霉素对广西猪链球菌2型强毒株具有很好的预防效果。  相似文献   

10.
猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
为了鉴定青岛地区3个猪场病死猪的致病菌,试验采用形态学观察、生化试验、16S rRNA PCR鉴定、血清型鉴定、毒力因子基因表型检测及药敏试验等方法对分离得到的3株细菌进行研究。结果表明:这3株细菌均为革兰氏阳性链状球菌,生化特性与猪链球菌的生化特征大致相符;16S rRNA PCR产物测序结果证实3株细菌均为猪链球菌;用猪链球菌1,2,7,9型特异性引物进行PCR扩增,3株细菌均为猪2型链球菌,其中有2株细菌的毒力因子基因表型为Mrp+Epf+Sly+,1株细菌毒力因子基因表型为Mrp-Epf+Sly+;3株细菌对大部分β内酰胺类、氟喹诺酮类抗生素敏感,对多肽类、林可胺类抗生素耐药。说明猪场分离得到的3株细菌均为2型猪链球菌,可选用β内酰胺类、氟喹诺酮类抗生素进行治疗。  相似文献   

11.
We developed a PCR assay for the rapid and sensitive detection of virulent Streptococcus suis type 2 and highly virulent S. suis type 1 in tonsillar specimens from pigs. The PCR primers were based on the sequence of the gene encoding the EF-protein of virulent S. suis type 2 strains (MRP+EF+) and highly virulent S. suis type 1 strains (MRP(s)EF+) and of the EF protein of weakly virulent S. suis type 2 strains (MRP+EF). The latter strains give rise to larger PCR products than the virulent strains of S. suis type 1 and 2. A positive control template was included in the assay to identify false negative results. The PCR was evaluated using tonsillar specimens from herds known (or suspected) to be infected and herds without an S. suis history. The results obtained with the PCR assay were compared with the results obtained with a newly developed bacteriological examination. In this bacteriological examination we were able to identify the EF-positive strains directly in the tonsillar specimens. From the 99 tonsils examined, 48 were positive in the PCR and 51 negative. All specimens from which EF-positive S. suis strains were isolated were also positive in the PCR assay. Three samples were positive in the PCR, but negative by bacteriological examination. The results demonstrated that the PCR is a highly specific and sensitive diagnostic tool for the detection of pigs carrying virulent strains of S. suis type 2 and highly virulent strains of type 1. Application of the assay may contribute to the control of S. suis infections.  相似文献   

12.
根据猪链球菌2型荚膜多糖和马链球菌兽疫亚种类M蛋白的保守区序列分别设计了2对简并引物,建立了一种能同时检测猪链球菌2型和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法。结果显示,该双重PCR能从100个细菌的混合纯培养物中扩增出2条目的片段。而且可以直接从病料组织中检测到相应的病原菌。用建立的双重PCR方法和细菌分离培养法平行检测人工感染的组织病料,PCR方法与细菌培养法的阳性检出率基本一致,但PCR方法的特异性好、敏感性高,简便易行,可以用于猪链球菌病的流行病学调查和实验室的快速鉴别诊断。  相似文献   

13.
猪链球菌2型及其毒力因子检测多重PCR的建立与应用   总被引:8,自引:3,他引:8  
根据相关文献设计并合成引物,建立了能同时检测猪链球菌2型(cps)及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白(mrp)和细胞外因子(epf)的多重PCR方法。目的片段的大小分别为885bp(mrp)、675bp(cps)和443bp(epf)。对参考菌株、人工攻毒病料和临床收集病料的检测结果显示,该多重PCR特异性强、敏感性高,可直接从临床病料中检测出猪链球菌2型,并能鉴定其毒力因子表型。  相似文献   

14.
为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对检测疑似猪链球菌感染猪临床样品,并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100个CFU,特异性和重复性好;利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球菌感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验,其中有11份样品为gdh阳性,11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,可用于猪链球菌种和SS9型猪链球菌的快速诊断。  相似文献   

15.
16.
猪链球菌通用及2型TaqMan荧光PCR检测技术建立与应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
在对设计合成的引物和6-carboxy-fluorescein(6-FAM)荧光素标记的TaqMan水解探针进行筛选的基础上,通过反应体系优化,建立了检测猪链球菌通用和2型的2种荧光PCR检测技术,实现了对猪链球菌的快速检测和定型。敏感性、特异性、重复性、感染组织模拟试验及临床样品的检测结果均表明建立的方法快速、特异、灵敏,整个检测过程(包括样品的前处理时间)可在1.5 h内完成,检测培养物和模拟组织样品的灵敏度可达10 CFU~100 CFU。  相似文献   

17.
本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性对照菌株扩增产物大小分别为1 062、733和313bp。特异性和灵敏性检测结果表明,与肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、支气管败血波氏杆菌和猪链球菌等猪常见致病菌均无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为1 875CFU。利用建立的多重PCR检测方法对分离收集的128株大肠埃希菌进行鉴定,得到36株致猪水肿病大肠埃希菌,其中30株既有菌毛F18ab又产志贺毒素Stx2e,另外6株仅产志贺毒素Stx2e。结果表明,本试验所建立的多重PCR检测方法对致猪水肿病大肠埃希菌的快速诊断和流行病学调查具有一定的应用价值。  相似文献   

18.
猪链球菌2型多重PCR检测方法的建立及应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
设计3对引物,分别扩增链球菌属特异性gdh、猪链球菌种特异性16S rRNA和猪链球菌2型特异性cps2J等基因,目的片段大小分别为725bp、523bp和387bp。利用合成的3对引物并通过对反应条件与反应体系的优化建立了多重PCR。应用该多重PCR检测了分离到的链球菌1105株,检出猪链球菌667株,猪链球菌2型33株。研究结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可广泛应用于猪链球菌病的快速诊断及流行病学调查。  相似文献   

19.
根据GenBank上发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号U88565)设计合成2对引物,建立了猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法,经酶切分析、单管巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定,并与血涂片染色镜检、常规PCR进行了比较。结果:扩增的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(U88565)同源性为96%;特异性试验表明,设计的引物不能扩增弓形虫、链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌及羊附红细胞体等病原体;敏感性试验表明,单管巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.116 fg的标准模板DNA。通过对75份血液样本的检测表明,建立的单管巢式PCR方法明显优于血涂片染色镜检法及常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性。本试验建立的单管巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等优点,为猪附红细胞体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。  相似文献   

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