对部分不明原因高热发病猪场的主要疫病调查报告

2007年以来广西一些猪场出现不明原因高热发病和死亡率的现象,为了解其病因,我们应用PCR和RT-PCR技术,对来源于8个发病猪场的89份病料进行猪瘟病毒(CsFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)猪伪狂犬病(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的调查.结果发现89份病料中检出CSFV阳性样品8份,阳性率8.99%,PRRSV阳性样品43份,阳性率48.31%;PRV阳性3份,阳性率3.37%,PCV-2阳性24份,阳性率26.97%;同时存在CSFV、PRRSV、PRV和PCV-2不同程度的混合感染现象,其中PRRS和PCV-2混合感染最为严重,阳性率达7.87%.调查结果表明,我区部分不明原因高热的发病猪场均不同程度存在CSFV、PRRSV、PRV和PCV-2感染的现象,特别是PRRSV感染情况极为严重,提示PRRSV可能是我区一些猪场出现不明原因高热发病死亡的主要原因.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其分子流行病学分析

为了弄清2006年在我国南方一些猪场暴发的一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病的病因,我们从12个省市48个发病猪场采集临床样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分离鉴定和分子流行病学分析。结果显示从48个猪场样品中均检测出了PRRSV,通过完整的ORF5和部分Nsp2基因序列比较分析发现来自12个省市不同猪场的PRRSV高度同源,而且在Nsp2基因上都有两个相同位点的缺失;从分离的15株PRRSV中选择湖南分离株HuN4人工感染5头60日龄的健康猪,结果5头猪分别在7 d～21 d内全部死亡,感染猪的临床症状和现地所见十分相似。本次试验结果表明新出现的以Nsp2基因部分缺失为特征的PRRSV对猪是高致病性的,可能是2006年大部分猪场暴发"高热综合症"的主要病因。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒接触感染仔猪模型的建立

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)接触感染模型,将易感仔猪与PRRSV人工感染仔猪在隔离器中同居饲养,每日观察记录体温变化和临床症状,定期采集血清和粪便样品,用荧光定量RT-PCR检测病毒血症和粪便排毒水平;对病死猪和试验结束迫杀猪进行剖检和肺脏组织病理学检查,并检测各器官病毒载量和组织分布。结果显示:接触感染仔猪出现高热和PRRS症状时间分别较人工接种猪推迟2~3d;第3天起血清检测PRRSV阳性,第10天病毒血症上升至较高水平(108.6拷贝/mL);第5天起粪便检测PRRSV阳性,第7天粪便排毒量上升至较高水平(103.9拷贝/0.1g);3头接触感染仔猪分别于同居后第12天和第13天死亡,较人工接种猪推迟1~2d,病死猪的主要器官病毒载量以及剖检和肺脏显微病理变化与人工接种病死猪相似。这些结果表明,本研究建立的接触感染仔猪模型可用于PRRS疫苗免疫效果评价。     

贵州省某规模化猪场暴发猪伪狂犬病与大肠杆菌混合感染的诊断

<正>2014年3月,贵州省开阳县某规模化猪场送检断奶仔猪10头,其中4头死亡,6头病危,1 d后其余病危的6头相继死亡。为了了解该猪场疫病的感染状况,对该规模化猪场送检的发病仔猪进行流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、细菌学和PCR技术诊断,确诊为猪伪狂犬病和猪大肠杆菌混合感染。报告如下。1流行病学调查该猪场断奶仔猪未免疫猪伪狂犬病疫苗,发病突然,1³ d共计有80头断奶仔猪发病,死亡     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因不同变异毒株对仔猪致病性研究

为了评价猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同分离毒株致病性差异,选择4株PRRSV分离毒株,即YX0907、BB0907、SY0909(属于NSP2基因亚型Ⅰ,具有30aa缺失特征)和NT0801(属于NSP2基因亚型Ⅱ,其NSP2上不存在缺失)进行动物接种试验。将23头45日龄PRRSV、猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌阴性健康仔猪随机分为5组,第1～4组各5头猪,分别颈部肌内注射上述4株PRRSV分离株(均为第3代)2×104.32TCID50.(mL.头)-1,第5组3头猪作为空白对照,隔离饲养21d,每天观察临床症状。攻毒后不同时间测定病毒血症,并对死亡猪和第21天处死猪进行病理剖解、观察大体病理变化和组织病理变化。结果显示,BB0907毒株毒力最强,试验猪感染后体温明显升高,临床症状明显,可引起3/5死亡,病猪肺脏组织具有明显病理变化;YX0907毒株毒力较强,试验猪临床症状和病理变化明显,可引起2/5死亡;NT0801毒力较弱,部分试验猪感染后出现1～2d体温升高和轻度临床症状,未引起死亡;SY0909毒株毒力最弱,感染猪出现1～3d体温升高,临床症状不明显,病理变化较轻;而对照猪无临床异常表现和...     

我国南方猪高热病的研究(Ⅰ)——大肠杆菌的分离、鉴定和致病性测定

从湖南3个高热病发病猪场11头病死猪的病料组织中均分离出了大肠杆菌,经血清学鉴定,鞭毛抗原(K88、K99、987P和F41)全为阴性反应。经过157种菌体抗原血清学检测,血清型为5、6、15、22、32和83型。药物敏感试验结果表明,分离的大肠杆菌对大多数常用药物耐药,对氟喹诺酮和头孢类药物敏感。将其中4头猪原代分离的大肠菌培养物以原倍(2×107个/mL)、104和108稀释的菌液分别感染18~22 g小白鼠,原倍菌液感染的小白鼠12/30在感染后24 h内出现死亡,而104和108稀释菌液感染的小白鼠均健活;将未经除菌的病死猪组织悬液、过滤除菌的组织悬液、大肠杆菌、过滤除菌的组织悬液及大肠杆菌分别感染30日龄左右的健康小猪,除未经除菌的组织悬液感染猪3/3发病,2/3死亡外,其余所有感染猪只出现体温升高,升幅达1~2℃,减食,精神萎靡,但没有死亡;将死亡猪再次分离到的大肠杆菌感染小白鼠和猪,小白鼠12/15出现死亡,感染猪只出现体温升高(超过1℃),没有出现死亡。结果证明:大肠杆菌在高热病的发病过程中只起协同诱发作用,引起猪发病死亡的真正原因可能是病毒感染。     

PRRSV的分离鉴定及与其他5种猪病毒混合感染情况调查

应用PCR检测方法,对来自山东、河北、河南等10省44份表现高热病症状的临床发病猪病料,进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪巨细胞病病毒(PCMV)和猪流感病毒(SIV)6种病原的检测。结果发现,6种病原中PRRSV的检出率最高为72.7%;单纯PRRSV感染的比例仅为2.27%。根据PCR检测结果分析PRRSV与其他5种病毒的混合感染情况,结果发现两重感染中PRRSV/PRV并发率最高(62.50%),三重感染中PRRSV/PRV/PCV并发率最高(43.75%),四重感染中PRRSV/PRV/PCV/PCMV并发率最高(28.125%),五重感染中PRRSV/PCV/PCMV/CSFV/PRV并发率最高(15.625%),PRRSV/PCV/PCMV/CSFV/PRV/SIV六重感染的比例为9.375%。将PRRSV阳性病料接种猪肺巨噬细胞和Marc-145细胞,共分离到9株PRRSV,分离率为28.1%。结果表明,发病猪多为感染PRRSV的同时混合感染其他多种病毒,为制定合理的免疫程序预防猪场各种疾病提供科学依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒人工感染试验

为探讨单纯猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染与猪"高热病"及猪群死亡率的关系,用经检测为PRRSV阳性的猪病料接种2头断奶仔猪,每日测定体温,将发病猪处死剖检,用PCR方法进行PRRSV检测和ELISA检测抗体,发现攻毒猪均迅速出现持续高热症状,无死亡趋向,剖检试验猪以肺脏损伤为主,无细菌的继发感染,PCR检测P...     

一例高致病性蓝耳病病毒、圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌混合感染的诊断

目前,猪场疫病混合感染的现象普遍存在,给我国养猪业造成了巨大损失。2013年10月,广西省某集约化猪场约6周龄猪群发生以高热、皮肤发绀、呼吸困难、关节炎为主要特征的传染病。根据发病情况、临床症状、剖检变化并结合实验室诊断方法进行综合诊断,最终结果显示,导致该猪场大规模发病并死亡的主要病原包括高致病性猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌,是典型的混合感染导致大规模发病及死亡的案例。     

1例保育猪呼吸道疾病的诊断报告

正江西泰和某猪场保育猪发生严重的呼吸道疾病,送检6头已死亡的保育猪。通过临床发病特征、病理剖检等初步诊断,推测导致死亡的可能病原为猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等病毒感染,继发细菌感染。取样送至江西农业大学预防兽医学实验室进行RT-PCR/PCR检测结果表明,发病猪PRRSV、PCV-2和猪瘟病毒(CSFV)阳性,同时,从发病猪肺脏和心     

广西德保县黑猪主要疫病病原学和血清学检测

为了解德保黑猪主要疫病流行状况和免疫效果,2018—2020年采集166个德保黑猪饲养场点的300份病死猪样品进行非洲猪瘟(ASF)、猪瘟(CSF)、口蹄疫(FMD)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)、猪圆环病毒病(PCV-2)、猪支原体病(PPLO)、猪传染性胸膜肺炎(PCP)、猪链球菌病(SS)、猪流行性腹泻(PED)、猪传染性胃肠炎(TGE)等11种主要疫病的病原学检测,2017—2020年采集35个场点的临床健康德保黑猪血清样品840份进行FMD、CSF、PRRS抗体检测。结果显示:PCV-2样品平均阳性检出率为68.3%,PRRS、PR、PED、PPLO、SS等疫病的病原阳性检出率分别为1.7%、1.0%、1.0%、0.3%、0.3%;CSF平均抗体阳性率为95.8%,而FMD、PRRS平均抗体阳性率较低,分别为79.3%、73.2%,且各年份变化较大。结果表明,德保黑猪主要疫病防控效果较好,大部分疫病得到有效控制,但PCV-2感染仍较严重,这是导致德保黑猪发病死亡以及FMD、PRRS免疫效果不佳的主要因素之一,需要重点加强控制。     

CSFV免疫状态下外周血T淋巴细胞亚群变化及对PRRS的免疫保护作用

建立CSFV疫苗免疫状态下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染动物模型。测定CSFV抗体阻断率和PRRSV抗体S/P值,根据CSFV抗体阻断率和PRRSV感染情况分析猪外周血中T淋巴细胞亚群变化和对PRRS的保护促进作用。采用流式细胞术（FAC）检测猪外周血T淋巴细胞CD3、CD4、CD8亚群的变化。结果,CSFV...     

某规模化猪场伪狂犬病的诊断

河南平顶山某猪场母猪出现较严重的流产和产死胎现象,且50日龄~70日龄仔猪出现神经症状,根据临床表现初步诊断为伪狂犬病。为排除猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟,进行了实验室诊断。应用ELISA方法检测发病保育猪及母猪血清的伪狂犬病病毒野毒株gE抗体,并对发病仔猪病料进行了伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的实时荧光定量PCR检测。结果显示,伪狂犬病病毒野毒抗体阳性,实时荧光定量PCR检测确定仔猪病料中PRV核酸阳性,PRRSV和CSFV核酸阴性。结合临床症状及实验室检测,确诊该猪场发生的是猪伪狂犬病。     

荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计1对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了1种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在101~106拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.999 8,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0%。用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7~10 d达到高峰,其病毒核酸载量能达到106拷贝/μL。试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7~11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性。对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝、脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在。试验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。     

Spatial dispersal of porcine reproductive and respiratory syndrome virus-contaminated flies after contact with experimentally infected pigs

OBJECTIVE: To determine whether flies can acquire porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and disperse the virus throughout a designated area. ANIMALS: 60 four-month-old pigs. PROCEDURE: On day 0, 28 of 60 pigs were inoculated with PRRSV MN 30-100 (index variant). On the same day, 100,000 pupae of ochre-eyed houseflies and 100,000 pupae of red-eyed (wild-type) houseflies were placed in the swine facility for a release-recapture study. Flies were recaptured at 2 locations within the swine facility, 6 locations immediately outside the facility, and 30 locations 0.4, 0.8, 1.3, 1.7, 1.9, and 2.3 km from the facility. Traps were emptied on days 2, 7, 8, 10, and 14. Samples derived from flies were tested by use of a polymerase chain reaction assay, virus DNA was sequenced, and viruses were tested for infectivity by means of a swine bioassay. RESULTS: PRRSV RNA homologous to the index PRRSV was detected in trapped flies collected inside and immediately outside the facility and from 9 of 48 samples collected at 0.4 km, 8 of 24 samples collected at 0.8 km, 5 of 24 samples collected at 1.3 km, and 3 of 84 samples collected at > 1.7 km from the facility. Two samples collected at 0.8 km contained genetically diverse variants of PRRSV. Swine bioassays revealed the virus in flies was infectious. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: Flies appeared to become contaminated with PRRSV from infected pigs and transported the virus > or = 1.7 km. Fly-born transmission may explain how PRRSV is seasonally transported between farms.     

猪链球菌2型仔猪感染动物模型的建立及免疫保护试验

采用猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒与猪链球菌2型协同感染仔猪的方式,建立动物感染模型,结果协同感染组试验仔猪均死亡,PRRS弱毒、猪链球菌攻毒组及空白对照组仔猪均存活.结果表明,PRRS弱毒可增强猪链球菌2型对猪的易感性.将建立的动物感染模型用于猪链球菌灭活苗(马链球菌兽疫亚种 猪链球菌2型)的效力检验,结果灭活苗可以保护PRRSV与链球菌的协同感染.     

猪瘟病毒石门株NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立

为配合猪瘟新型疫苗的研发,建立了猪瘟病毒NS3蛋白抗体检测间接ELISA,以期达到有效区分新型疫苗免疫猪与自然感染猪(包括常规疫苗接种猪)的目的。以接种猪瘟病毒(CSFV)石门株的PK-15细胞为模板提取总RNA,经特异性PCR扩增获得长度为2 049bp的CSFV NS3基因,将其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表达载体pET-32a(+),在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中优化表达CSFV石门株NS3基因。Western blot分析表明重组蛋白NS3具有反应原性。将纯化的重组蛋白NS3作为包被抗原建立检测CSFV NS3抗体的间接ELISA,以美国爱德士(Idexx)猪瘟病毒抗体检测试剂盒抗体检测结果为标准,对502份血清样品进行检测。结果表明,所建立方法的特异性为96.9%,敏感性为89.7%,总符合率为95.8%,为猪瘟新型疫苗的推广应用提供了血清学检测方法。     

Re-emerging of porcine respiratory and reproductive syndrome virus (lineage 3) and increased pathogenicity after genomic recombination with vaccine variant

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) was first reported in China since late 1995 and several variants were further reported in subsequence years, causing huge economic losses to the Chinese swine industry. To date, three major lineages (lineage 3, 5.1 and 8.7) of Type 2 PRRSV were reported in China based on our global genotyping. The present study provides the epidemiology of the PRRSV in South China based on the isolates collected during 2009–2012, indicating three lineages (lineage 3, 5.1 and 8.7) of Type 2 PRRSV were still circulating in this area. Our phylogenetic reconstruction indicated that lineage 3 re-emerged in 2010 formed a huge cluster with closely related to the 2004 isolates from Hong Kong. Furthermore, the inter-lineage genomic recombination between MLV vaccine strain (lineage 5) and a recently re-emerged lineage 3 virus (QYYZ) has also been found in a farm practicing MLV vaccination. Our in vivo experiment comparing the pathogenicity and clinical presentations among currently isolated viruses indicated that pigs infected with recombinant lineage 3 virus (GM2) showed persistent higher fever compared to pigs infected by its wild counterpart (QYYZ). This study enhanced our understanding on potential importance of the recombination of PRRSV along with their evolution.     

2016—2019年广西玉林市部分猪场主要病毒性疫病监测

为了解近年来广西玉林市规模猪场主要病毒性疫病的流行动态和免疫保护水平,分析疫情流行趋势和暴发风险,对2016—2019年采集自玉林市规模猪场284个场次的6954份血清样本,以及113个场次的1539份临床健康猪组织样本、249个场次自主送检的536份病死猪组织样本,进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)抗体和抗原检测,并对结果进行时间和区间分析。结果显示:2016—2019年,规模化猪场CSFV、PCV2、PRV-gB场群平均抗体阳性率以及个体平均抗体阳性率均在70%以上;PRRSV抗体阳性率总体偏低,但2019年抗体阳性率超过90%。北流市CSFV场群及个体抗体阳性率最低,与其他地区有差异(P<0.05);北流市、福绵区、玉州区的PRRSV场群抗体阳性率未超过70%,低于其他地区(P<0.05);各地区间PCV2抗体阳性率无统计学差异(P>0.05);福绵区PRV-gB抗体阳性率(<70%)与其他地区相比最低(P<0.05);在健康屠宰猪群及病死猪群组织样品中均检出上述4种病原,其中PRRSV、PCV2病原阳性检出率较高。结果表明,玉林市规模化猪场上述4种疫病的免疫抗体保护水平总体较高,但部分地区抗体水平偏低,且均存在猪群带毒现象,尤其是PRRSV、PCV2,存在疫病暴发风险。结果提示,各县(市、区)要根据本地养殖及疫病监测情况,制定科学合理的免疫计划,加强综合防控与监测,防止上述猪群疫病的发生与流行。本研究调查了广西玉林市猪群主要病毒性疫病的免疫保护水平及其病原流行特点,为该地区此类疫病防控提供了数据支持。