红茂草生物碱TLC检测技术的建立及抑菌活性研究

利用醇提法提取红茂草中生物碱,并对其进行TLC检测,建立红茂草生物碱TLC检测技术;用红茂草浓缩液对3种供试菌进行体外抑菌活性研究,测定其最小抑菌浓度（MIC）。结果以95%乙醇：冰乙酸：水：浓氨水（15：0.5：2.5：0.5）为展开系统,分离效果最好,斑点清晰;对供试菌MIC测定结果分别为：大肠埃希氏杆菌0.18mg/mL、金黄色葡萄球菌0.14mg/mL、粪肠球菌0.26mg/mL。红茂草具有明显的抑菌作用。TLC检测技术可作为红茂草提取物中生物碱质量控制方法,且该法重现性好、准确度高。     

红茂草总生物碱酸水提取工艺试验

利用生物碱盐酸盐易溶于水这一特性,用稀盐酸溶液进行红茂草总生物碱的提取试验。先分别进行提取时间、料液比、pH值和温度对红茂草总生物碱提取率影响的单因素试验,在此基础上再从每个单因素中选出3个较好水平进行正交试验,从而得出酸水提取红茂草总生物碱的最佳条件。按照正交试验所确定的最佳提取条件进行总生物碱的提取。以红茂草中主要生物碱异紫堇碱为指标,对提取物进行HPLC检测。结果表明,在温度90℃,提取时间5 h,料液比1∶40,pH值1.5为提取红茂草总生物碱的最佳条件。HPLC检测结果显示,提取物中异紫堇碱含量为9.28%。分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该区猪源肺炎克雷伯杆菌的防治提供理论基础。     

红茂草总生物碱酸水提取法研究

用酸水提取法提取红茂草总生物碱。先分别进行提取时间、料液比、pH值和温度对红茂草总生物碱提取率影响的单因素实验,在此基础上从每个单因素中选出3个较好水平进行正交试验,从而得出酸水提取红茂草总生物碱的最佳条件。结果表明,温度80℃、提取时间4 h、料液比1∶50、pH值1.5为提取红茂草总生物碱的最佳条件。     

红茂草中异紫堇啡碱正交提取工艺的建立

采用正交工艺提取红茂草中异紫堇啡碱,在紫外光210 nm处对红茂草生物碱提取液进行检测,以异紫堇啡碱标准品作对照。结果正交提取最佳工艺参数为:乙醇浓度60%、乙醇用量200 mL、超声温度30℃、回流时间2.5 h。表明应用正交工艺对红茂草中异紫堇啡碱的提取比较合理。     

红茂草总生物碱醇提取法与酸水提取法比较研究

试验利用乙醇溶液和稀盐酸溶液分别进行红茂草总生物碱的提取.重量法计算总生物碱的提取率(得率),并对试验结果进行t检验.结果表明,乙醇提取法提取红茂草总生物碱得率极显著高于酸水提取法(P＜0.01).     

不同浓度红茂草总生物碱盐酸盐制剂治疗羊口疮试验研究

将25只健康羊只随机分为5组,每组5只。用羊口疮强毒感染试验羊只建立羊口疮病理模型,用不同浓度的红茂草总生物碱盐酸盐制剂进行对比治疗试验,以确定最适药物浓度。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别用浓度5 mg/m L、10 mg/m L、20 mg/m L、40 mg/m L的红茂草总生物碱盐酸盐制剂进行治疗,Ⅴ组为对照组。结果表明,除了Ⅲ组和Ⅳ组之间羊只溃疡面愈合率差异不显著(P0.05)外,其余各组两两之间均存在极显著性差异(P0.01)。红茂草总生物碱盐酸盐制剂剂量与溃疡面愈合率之间的回归方程为:y=1.709 3 x+3.547 7,R~2=0.977 2,其半数效应浓度EC_(50)=7.073 7 mg/m L。     

红茂草注射液对鸡传染性支气管炎病毒抑制效果的观察

用不同含量的红茂草注射液,对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的H52毒株进行稀释,在鸡胚尿囊腔中接种传代,测试了红茂草注射液对H52毒株的抑制作用。试验结果显示,红茂草注射液能有效的抑制H52毒株在鸡胚中的增殖,其最终有效浓度为2．5～5mg／mL,而且抑制作用随着红茂草注射液浓度含量的提高而增强,同时红茂草注射液对鸡胚的生长、发育无任何不良影响。     

红茂草生物碱对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

研究红茂草生物碱对金黄色葡萄球菌的抑菌作用,测定其生长曲线、最小抑菌浓度、抑菌率及半数抑菌浓度,并检测了金黄色葡萄球菌膜通透性和形态变化。结果表明,红茂草生物碱对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用,其最小抑菌浓度为0.35 mg/m L,半数抑菌浓度为0.214 mg/m L。红茂草生物碱可改变金黄色葡萄球菌的细胞形态,显微观察发现菌体变形缢裂。     

红茂草生物碱对黏虫卵的杀灭作用

为评价野生药用植物红茂草的生物碱提取物对黏虫卵的杀灭效果,取适量黏虫卵分别与含50、100、200、400、800 mg/L红茂草生物碱提取物的丙酮溶液短暂接触,观察并比较经不同浓度红茂草生物碱处理的黏虫卵孵化率及初孵幼虫存活率,并设对照处理组（CK）。结果显示,除50 mg/L处理组外,其余各处理组的卵孵化率均显著低于对照组（P〈0.05）;在设定的处理浓度范围内,所有处理组的初孵幼虫存活率均显著低于对照组（P〈0.05）,表明红茂草生物碱对黏虫卵具有显著的杀灭作用。     

天然植物饲料添加剂总成分(大类化合物)检测方法

1、总生物碱1.1比色法用比色法测定总生物碱一般有下列3种方法: (1)根据生物碱本身的性质或分子中所含的功能基团与试剂反应而生成的颜色进行比色。(2)酸性染料比色法,即在一定pH介质下,生物碱RH 阳离子与酸性染料阴离子In-结合成有色化合物RH ·In-,经有机溶剂定量提取,再经碱化后即定量放出染料而比色。(3)与生物碱沉淀试剂产生有色沉淀,将沉淀定量分出后,用适当溶剂溶解而比色。     

红茂草生物碱正交提取工艺模式优化及清除自由基作用的研究

为研究红茂草(Dicranostigma leptodum(Maxim.)Fedde)生物碱的正交提取工艺条件及其清除自由基作用。采用单因素水平测定,从10种相关因素中筛选出乙醇体积分数、超声波作用时间、液料比、回流时间、浸提液pH值、浸泡时间共6种主要影响因素,按照L25(56)正交表进行正交试验,用SPSS 17.0软件进行统计分析,优选出最佳正交提取工艺模式;将正交提取浓缩液进行HPLC检测,并测定其对羟自由基(·OH)和氧自由基(O₂^·-)的清除作用。结果表明:红茂草生物碱最佳提取工艺条件为乙醇体积分数65%、超声波作用时间20min、液料比15:1、回流时间2.5h、浸提液pH=8、浸泡时间4h;在最佳提取工艺条件下红茂草提取液中生物碱的含量为9.2794%;红茂草生物碱在25.0和1.8mg·mL^-1时,对·OHH和O₂^·-清除效果显著,其清除率为58.70%和49.26%,IC₅₀为23.50和1.75mg·mL^-1。该工艺方法简便、可靠、提取率高,提取液清除自由基作用显著。     

红茂草中黄酮类提取工艺优化及体外抑菌研究

以红茂草为研究对象,在单因素水平筛选测定的基础上,通过响应面法优化其提取工艺。提取物采用Diamonsil C18(4.6mm×150mm,1.8μm)色谱柱为固定相,甲醇-0.2%磷酸(65∶35,v/v)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长280nm;并对提取物进行抑菌活性测定,以大肠埃希氏杆菌和金黄色葡萄球菌为供试菌,进行体外抑菌活性研究和透射电镜观察。结果显示,红茂草中黄酮类化合物最佳提取工艺条件为:液料比15mL/g、超声时间35min、回流时间2.5h、乙醇体积分数65%,在此工艺下红茂草中黄酮类化合物含量为2.60%,HPLC检测重现性好;其提取物对大肠埃希氏杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为0.28g/mL和0.20g/mL,MBC为0.26g/mL和0.10g/mL,IC50为0.2162g/mL和0.1805g/mL,在透射电镜下观察抑菌效果显著。研究表明,响应面法对红茂草中黄酮类化合物提取工艺的优化比较合理。     

红茂草生物碱对小鼠毒性实验研究

考察红茂草药物的安全性,将不同剂量红茂草生物碱提取物肌肉注射BALB/c小鼠,后在不同时间采集小鼠心、肝、脾、肺、肾和注射部位肌肉组织,制作切片,用H.E染色法进行染色后镜检,未发现典型性病理变化。进行小鼠半数致死量测定,其LD50为（16.39±0.04）g/kg、FL为14.51-18.93 g/kg。结果表明,红茂草生物碱具有良好的安全性。     

红茂草中精油成分分析及抑菌活性的研究

为红茂草药物的进一步开发和利用,本试验以甘肃平凉地区野生药用植物红茂草为研究对象,采用水蒸气提取、蒸馏萃取（SDE）提取、超临界CO₂萃取等3种方法,分别提取红茂草中的精油成分;以GC-MS对其精油进行化学成分分析,并将超临界CO₂萃取的红茂草精油采用平板菌落计数法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌进行抑菌活性测定。结果显示,三种提取方法中,水蒸气提取法和蒸馏萃取提取法所得精油为橙黄色,有浑浊,超临界CO₂萃取法所得精油为淡黄色,澄清液体。3种方法所得精油均含有24种共同成分,以超临界CO₂萃取法最优,其提取率为2.1220%,水蒸气提取法最低,提取率为1.7870%;将超临界CO₂萃取的红茂草精油作用于3种供试菌,测定其最小抑菌浓度（MIC）分别为：金黄色葡萄球菌0.2500 g/mL、大肠杆菌0.3000 g/mL,绿脓杆菌0.2600 g/mL,抑菌效果显著。研究结果表明,超临界CO₂萃取是提取红茂草精油的最佳方法,通过超临界CO₂萃取法提取的红茂草精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有良好的抑菌效果。     

红茂草中精油成分分析及抑菌活性的研究

为红茂草药物的进一步开发和利用,本试验以甘肃平凉地区野生药用植物红茂草为研究对象,采用水蒸气提取、蒸馏萃取(SDE)提取、超临界CO_2萃取等3种方法,分别提取红茂草中的精油成分;以GC-MS对其精油进行化学成分分析,并将超临界CO_2萃取的红茂草精油采用平板菌落计数法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌进行抑菌活性测定。结果显示,三种提取方法中,水蒸气提取法和蒸馏萃取提取法所得精油为橙黄色,有浑浊,超临界CO_2萃取法所得精油为淡黄色,澄清液体。3种方法所得精油均含有24种共同成分,以超临界CO_2萃取法最优,其提取率为2.1220%,水蒸气提取法最低,提取率为1.7870%;将超临界CO_2萃取的红茂草精油作用于3种供试菌,测定其最小抑菌浓度(MIC)分别为:金黄色葡萄球菌0.2500 g/mL、大肠杆菌0.3000 g/mL,绿脓杆菌0.2600 g/mL,抑菌效果显著。研究结果表明,超临界CO_2萃取是提取红茂草精油的最佳方法,通过超临界CO_2萃取法提取的红茂草精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有良好的抑菌效果。     

复方苦豆子灌注液总生物碱含量测定方法的建立

为建立复方苦豆子灌注液总生物碱含量的测定方法,采用酸性染料比色法,以氧化苦参碱为对照品进行含量测定,检测波长420 nm 的吸光度。结果显示,氧化苦参碱在2．0μg／mL～10μg／mL 范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程为 A＝0．0058C＋0．1116,r＝0．9992,氧化苦参碱的平均回收率为99．6％,RSD＝2．20％（n＝5）。该方法简便灵敏、准确可靠,可作为复方苦豆子灌注液的质量控制方法。     

不同溶剂提取的钩吻粗提物中成分含量的测定

钩吻为马钱科钩吻属常绿藤本植物,具有抗肿瘤、免疫调节、促生长等功效,研究表明其主要活性和毒性成分均为吲哚类生物碱。钩吻的药效剂量与中毒剂量十分接近,且致死量低,为给钩吻广泛的临床应用提供理论依据,分别采用酸性染料比色法、苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法对3种不同溶剂工业化提取的钩吻粗取物中生物碱、多糖、蛋白质进行含量测定。结果显示,钩吻醇提(950 mL/L乙醇)、酸水提(5 mL/L H2SO4)、水提物中生物总碱含量分别为64.4g/L、21.5g/L和5.7g/L,糖含量分别为264.1g/L、89.6g/L和9.3g/L,蛋白含量分别为44.7g/L、12.7g/L和34.6g/L。     

红茂草生物碱提取方法及指纹检测技术建立的研究

红茂草[Dicranostigma leptopodum（Maxim．）Fedde]又名秃疮花、秃子花、勒马回，系罂粟科红茂草属植物。主要分布在甘肃、陕西、河南和山西等省（区）低山平川地带。红茂草中含有异紫堇碱（laooorvdine）、原阿片碱（Protopine）、紫堇碱（Corvdine）、异紫堇啡碱及木兰碱（Magnoflorine）等生物碱，其中异紫堇碱具有明显的镇痛、镇静、解除平滑肌痉挛等作用，已经制定了中药材地方标准。     

紫外分光光度法测定盐穗木生物碱含量

探讨盐穗木中有效成分生物碱含量测定方法,用紫外分光光度法测定盐穗木中生物碱的含量,选定波长为280 nm。结果显示,测定在0.079-0.573 mg/mL范围内线性关系良好,回归方程为A=69.20 C＋0.019,R=0.999（n=5）。采用紫外分光光度法测定盐穗木中生物碱含量具有精度高、稳定性好、操作简便的特点,是提取盐穗木全草生物碱的有效测定方法。     

博落回生物碱对烟草黑胫病的抑制作用

为了研究博落回总生物碱、总生物碱盐、血根碱、白屈菜红碱对烟草黑胫病菌的抑制效果,试验分别用博落回总生物碱、总生物碱盐、血根碱对烟草黑胫病菌处理5d。结果表明:博落回总生物碱、总生物碱盐、血根碱的半数效应浓度分别为22.49,16.22,21.38μg/mL;博落回总生物碱、总生物碱盐320μg/mL药液抑制率分别为77.42%、86.54%,血根碱、白屈菜红碱40μg/mL药液抑制率分别为62.54%、32.60%。说明博落回总生物碱、总生物碱盐对烟草黑胫病菌抑制效果较明显,血根碱一般,白屈菜红碱较差。