犬弓首蛔虫ITS1基因的克隆及序列分析

通过对国内5个犬弓首蛔虫株(T.canis)即GD株、CQ株、YN株、HN株和GZ株的rDNA的内转录间隔区Ⅰ(ITS1)序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,旨在确定ITS1是否可作为T.canis分子分类的遗传标记。结果显示:GD株、CQ株、YN株、HN株和GZ株的ITS1序列基本一致,仅GD株有2个碱基的差异,HN株和GY株分别有1个碱基的差异;与GenBank中登录的T.canis(序列号为AB110024、AB110026)的ITS1序列同源性高达98.9%～99.4%。结果表明ITS1可作为分子标记用于T.canis与其它蛔虫的种间鉴定,但不适合用于T.canis种内遗传变异的研究,为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。     

犬体表犬弓首蛔虫虫卵的污染调查

对 30只肉用犬和护院犬以及 2 5只伴侣犬体表犬弓首蛔虫虫卵的污染情况进行调查 ,结果表明 ,肉用犬和护院犬的污染率为 30 % ,伴侣犬的污染率为 1 6% ,并以丙硫咪唑对患犬或带虫犬进行了驱虫试验 ,效果为 1 0 0 %。     

犬弓首蛔虫与细小病毒混合感染的诊治

今年 5月 1日 ,我市珊瑚乡一户主购进了 50条 2 5月龄肉种犬 ,7ｄ后 ,犬陆续发病 ,至 5月 2 1日 ,共死亡 1 0条。经诊断为犬弓首蛔虫与细小病毒混合感染 ,现报告如下。1　临诊症状发病初期 ,体温 39 2～ 40 1℃ ,剧烈呕吐 ,排黄色水样粪便。后期 ,粪便呈蕃茄汁样 ,腥臭难闻 ,酱油色。呕吐次数逐渐减少 ,病犬脱水衰竭 ,卧地不起。体温下降 ,36～ 38℃ ,脉搏减慢 ,6 0～ 70次 /ｍｉｎ。2　剖检变化剖检 4条病死犬 ,心肌均松软 ;2只犬肺表面有出血点和暗红色的出血斑 ;胃内空虚 ,胃壁大弯部呈弥漫性出血 ;小肠中后段肠粘膜有大量大小不一的出…     

犬弓首蛔虫卵与狮弓蛔虫卵外壳显微形态比较

收集西宁市野生动物园的雪豹粪便及西宁市宠物交易市场的新鲜犬粪便,获取犬弓首蛔虫卵和狮弓蛔虫卵,采用普通生物显微镜和扫描电镜,比较两种虫卵的外壳表层结构。结果表明,狮弓蛔虫卵外壳表层有许多脊状突起,但突起线不是严格的网状连接。与虫体内虫卵比较,粪便中的犬弓首蛔虫卵网状外膜更加成型规则,这种结构可能有利于虫卵吸附于容器壁。     

犬弓首蛔虫感染比格犬不同阶段肝circRNAs表达模式的分析

旨在探究终末宿主肝环状RNA （circRNAs）在犬弓首蛔虫诱导致病过程中的潜在调控作用。18只6~7周龄的比格犬被平均分为3组（感染后0.5 d组、感染后1 d组和感染后36 d组）,每组包括感染和对照各3只,分别于感染后对应的时间点收集肝样品。提取感染和对照组肝的总RNA,利用高通量RNA测序,构建circRNA文库,对差异表达的circRNAs进行分析,并对差异表达circRNAs的亲本基因进行GO注释和KEGG富集分析。随机选取9个差异表达circRNAs进行实时荧光定量PCR验证。结果显示,与对照组相比,在感染后0.5、1和36 d分别有94、103和84个犬肝的差异表达circRNAs。Venn图显示,3个感染阶段没有共同表达的差异circRNAs;GO和KEGG分析显示,差异表达的circRNAs参与了宿主肝免疫与炎症的相关通路,其中差异表达的circRNA novel_circ_0016108、novel_circ_0016184和novel_circ_0027468与犬弓首蛔虫引起的天然免疫相关;novel_circ_0002212参与了犬弓首蛔虫引起的肝炎症反应;novel_circ_0002212和novel_circ_0019907在宿主肝抵抗犬弓首蛔虫侵袭的过程中发挥作用。RT-qPCR验证结果显示大多数差异表达的circRNAs与高通量测序结果一致。结果表明,肝circRNAs在犬弓首蛔虫感染终末宿主的过程中发挥着重要作用,这为进一步探究犬弓首蛔虫与宿主之间的相互作用提供了新的信息,并且也为促进疾病干预措施的制定提供参考。     

犬弓首蛔虫与狮弓蛔虫混合感染的诊治

犬蛔虫病是犬的一种常见肠道寄生虫病,其病原包括犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫,主要寄生于犬及犬科动物的小肠中。犬蛔虫感染常导致犬发育不良、生长缓慢、呕吐、下痢等,严重时可导致死亡。2013年12月份,江苏农牧科技职业学院实验动物房饲养的1只中华田园犬出现消瘦、呕吐、消化不良等症状,经诊断为犬弓首蛔虫与狮弓蛔虫混合感染。1病原弓首蛔虫,雄虫长50-110 mm,     

RNA干扰abcg-5基因对犬弓首蛔虫感染性的影响

为研究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)腺苷三磷酸结合盒G5基因(ATP-binding cassette G5,ab-cg-5)的功能,通过体外合成Tc-abcg-5基因的特异性siRNA,利用RNAi技术对T.canis的成虫和虫卵进行干扰。结果显示,干扰24、48h后siRNA-744组Tc-abcg-5的相对表达量比siRNA-1020组和siRNA-432组显著性降低,表明siRNA-744有较高的沉默效率。采用电穿孔法和浸泡法对siRNA-744的递送效率进行比较,结果显示浸泡法更有利于将siRNA-744导入到T.canis虫卵内。用siRNA-744经浸泡法干扰T.canis感染性虫卵,经口灌服小鼠,感染后第7天对小鼠的脑、肝和肺组织进行病理学研究,结果显示RNA干扰使T.canis感染性虫卵的感染力下降,从而降低了肺、肝的病变程度。研究表明Tc-abcg-5基因可能通过影响虫卵的发育从而参与T.canis的生长、发育过程。     

狼仔犬细小病毒与犬弓首蛔虫混合感染的治疗

2005年6月末,黑龙江省佳木斯市水源山公园的5只77日龄狼仔陆续发病,通过临床症状观察和实验室检查,确诊为犬细小病毒与犬弓首蛔虫混合感染,通过采用注射高免血清、对症治疗、支持疗法及药物驱虫等综合防治措施,所有狼仔恢复了健康.现将治疗情况报道如下.     

犬弓首蛔虫卵黄原蛋白基因的克隆及表达分析

为克隆犬弓首蛔虫(T.canis)的卵黄原蛋白(YP)基因,本研究根据T.canis cDNA文库中的EST数据,采用RT-PCR方法扩增T.canis的YP基因(TcF-YP),并克隆至pGEM-T载体中进行测序。测序结果表明,TcF-YP基因片段大小为492 bp,编码163个氨基酸残基。同源分析显示,TcF-YP基因与猪蛔虫的卵黄原蛋白基因同源性最高,为78%。同时对该基因在T.canis雌虫、雄虫和雌虫各组织的表达谱进行研究,结果显示TcF-YP基因只在T.canis雌虫中高量表达,是雌虫特异的基因。对雌虫各组织的基因表达谱分析显示TcF-YP基因在子宫和肠中高量表达,在卵巢中有极微量的表达。本实验为TcF-YP基因的功能研究奠定了基础。     

新疆石河子市犬蛔虫感染调查及虫卵体外发育形态观察

为初步了解石河子市犬蛔虫感染状况,对石河子市136份家养犬及流浪犬粪便样品进行蛔虫卵大小、形态鉴定及虫卵计数,确定蛔虫种类、感染率及感染强度,同时对检出的蛔虫卵进行体外发育形态观察.结果显示:犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫感染率分别为3.68％(5/136)、8.82％(12/136),两种蛔虫混合感染率为3.68％(5/136...     

犬弓首蛔虫与细小病毒混合感染的诊治

20 0 0年 5月 1日 ,我市珊瑚乡一户主从徐州沛县购进了 50只 2 .5月龄肉种犬 ,7天后 ,肉犬陆续发病 ,至 5月 2 1日 ,共死亡 1 0只 ,根据临床症状观察、病理剖检变化及实验室检验 ,诊断为犬弓首蛔虫与细小病毒混合感染 ,报告如下。1　临床症状　发病犬初期体温在 39.2～ 40 .1℃之间 ,剧烈呕吐 ,排黄色水样粪便。后期粪便呈番茄汁样 ,腥臭难闻 ,酱油色 ,呕吐次数逐渐减少 ,病犬脱水衰竭 ,卧地不起 ,体温下降 ,在 36～ 38℃之间 ,脉搏下降 ,在 60～ 70次 /min之间。2　剖检变化　剖检 4只病死犬 ,心肌均松软 ;2只犬肺表面有出血点和暗红色的出…     

犬弓首蛔虫西宁株线粒体基因ND1和ND4序列分析

为了解犬弓首蛔虫在国内外的进化特点,从位于青藏高原的青海省西宁市城区流浪犬及宠物犬粪便中获取虫体,针对不确定性因素影响,采用降落PCR并作出相应调整,扩增出西宁株ND1和ND4基因片段,经DNAstar软件包比对序列同源性和进化关系分析发现,犬弓首蛔虫西宁株线粒体基因ND1和ND4大小分别为360、400 bp。与在线BLAST检索收集的国内外6条弓首属不同种基因序列进行序列同源性和进化关系比对发现:ND1基因片段与我国广东犬分离株的序列同源性最高,为99.5%;与日本犬分离株的同源性最低,为82.6%,甚至低于伊朗的猫分离株(88%)。进化关系上,ND1基因与广东珠处于进化树的同一分支上,ND4基因仅与广东犬分离株高度同源(99.5%),而与其他序列的同源性都很低。两个基因的进化树分析结果与序列同源性分析结果基本一致。不同种的序列在进化上不在同一分支,表明种属和地域差异可影响犬弓首蛔虫的进化特点。本研究证实,西宁株犬弓首蛔虫属于我国大陆流行的遗传分支,并非独立株。这为进一步针对青藏高原区域犬弓首蛔虫的分子遗传学和分子诊断学研究奠定了基础,同时为公共卫生防治提供了依据。     

犬弓首蛔虫TcCPG1的表达及其与几丁质的结合特性

为探讨犬弓首蛔虫（Toxocara canis,T.canis）软骨素蛋白多糖TcCPG1的表达特征及其与几丁质的结合方式,为犬弓首蛔虫软骨素蛋白多糖的功能研究提供依据,笔者克隆T.canis软骨素蛋白多糖1基因（Tc-cpg-1）并原核表达重组蛋白TcCPG1,采用镍柱亲和层析技术对重组蛋白进行纯化,并与几丁质进行结合试验;采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）进行Tc-cpg-1基因的转录水平的性别和组织差异表达分析。结果显示：Tc-cpg-1基因编码区（coding sequence,CDS）的长度为1 251 bp,共编码417个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果显示重组蛋白TcCPG1以包涵体形式存在,相对分子质量大小约为70 ku;对表达条件进行优化后,以0.8 mmol·L^-1 IPTG于16℃诱导14 h时可获得大量目的蛋白;利用镍柱亲和层析纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白,与几丁质进行结合试验,验证了重组蛋白TcCPG1能够与几丁质结合;通过qRT-PCR对Tc-cpg-1基因转录水平的组织差异性进行分析,发现Tc-cpg-1在雌虫中高量表达,尤其在雌虫的生殖组织中表达量最高,表明Tc-cpg-1可能参与了T.canis雌虫的生殖过程,推测TcCPG1可能通过与卵壳中几丁质的相互作用从而影响T.canis的胚胎和生殖发育过程。     

犬弓首蛔虫线粒体cox1基因的克隆及序列分析

本研究旨在阐明我国犬弓首蛔虫(Toxocara canis)湖南分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用其与其它弓首蛔虫的pcox1序列构建进化关系。应用PCR扩增犬弓首蛔虫虫株的pcox1,将所获得的序列应用Mafft 7.122程序进行比对,然后用Phy ML 3.1程序ML法绘制种系发育树。本实验扩增所获得的pcox1序列长度一致,均为394 bp,种内变异在0~2.5%之间,种间差异为8.2%~11.6%。种系发育分析结果表明,12个犬弓首蛔虫分离株位于同一分支。由于犬弓首蛔虫pcox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间鉴定检测研究的遗传标记,本研究结果为犬弓首蛔虫的分类、鉴定和群体遗传结构奠定了基础。     

犬弓首蛔虫雄虫cDNA文库构建及EST分析

为构建T.canis雄虫cDNA文库,采用Trizol法提取T.canis雄虫的总RNA,合成cDNA,连接到λTripEx2载体上,通过包装蛋白对连接产物的包装,接种到大肠杆菌XL-1-Blue中进行原始文库和扩增文库的滴度测定.经质量鉴定表明:初始文库的滴度为5.25×106 pfu·mL-1,扩增后文库的滴度为6.90×109 pfu ·mL-1.文库的插入片段大小在500～2 000 bp,平均片段大小为1 000 bp,重组率为99.47％.所有指标均显示已成功构建了T.canis雄虫的cDNA文库.利用该文库获得了189条5'有效表达序列标签(EST).对ESTs拼接后代表了101个Unigenes,含有27个Contigs和74个Singletons.其Unigenes在GenBank中的序列号为HO348195～HO348295.同源性分析检索到有56个Unigenes与已知基因同源,其中具有已知或推测功能的基因有40个,未知功能基因有16个,未比对上的基因45个.未比对上的基因与NR数据库中的蛋白序列没有任何意义的匹配,为研究中发现的新基因.这些结果为进一步开展犬弓首蛔虫功能基因及分子机制研究奠定了基础.     

左旋咪唑与槟榔粉合用驱除犬弓首蛔虫和泡状带绦虫效果观察

在本市犬寄生虫调查中发现,犬弓首蛔虫和犬泡状带绦虫的感染率都较高,这两种寄生虫可引起犬体消瘦、贫血、甚则死亡,更为严重的是犬弓首蛔虫为人畜共患病,可造成儿童幼虫移行症.犬泡状带绦虫可造成牛、羊、猪等的细颈囊尾蚴病,引起肝炎、腹膜炎、生长缓慢致使大量脏器废弃.左咪唑是驱除线虫的药物,槟榔是驱除绦虫的中药,二者合用一次驱除犬弓首蛔虫和泡状带绦虫还未见报道,其效果、最佳有效剂量、毒性等需进一步探讨.2003年6月至2004年3月间,笔者进行了此项驱虫试验,现将试验情况报告如下.     

苦楝皮驱除犬蛔虫试验效果研究

为了研究苦楝皮驱除犬蛔虫的试验效果,采用云南当地苦楝皮,将20只京巴犬分为4组,分别为对照组、低剂量组(5mL/kg)、中剂量组(15mL/kg)、高剂量组(25mL/kg)。以7d为1个投药周期,将炮制好的苦楝皮饲喂病犬,连续给药3个周期。通过采集粪便和实验室观察,计算出给药后虫卵转阴率,并确定最佳疗程及剂量。试验结果表明,3个剂量的苦楝皮对犬蛔虫都有驱除效力,但高剂量组综合效力最好,虫卵转阴率可以达到96.5%,且以7d为1个周期,连续用药3周可以达到对犬蛔虫病的基本治愈。