奶牛大肠杆菌性乳腺炎耐药性试验

为了研究山东省临朐县奶牛大肠杆菌耐药性情况,采集了5个奶牛规模场总共60份临床型乳腺炎患牛奶样,进行了培养和细菌分离鉴定,对分离的大肠杆菌进行分离纯化和药敏试验,表明该县奶牛主要致病菌为大肠杆菌和链球菌;大肠杆菌对多种抗生素具有耐药性但对头孢噻呋仍敏感。     

贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的污染及耐药情况,采集散养奶牛牛奶样本26份,运用细菌分离培养技术对样本进行细菌分离;PCR鉴定后测序;细菌药敏试验。结果:共分离鉴定沙门氏菌3株,分离率为11.5%(3/26);3株沙门氏菌对庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、阿莫西林(AMC)等耐药,对四环素(TET)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)等较为敏感。     

牛乳源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性分析及快速鉴定方法的建立

为了解福建省南坪地区某规模化奶牛场乳源致病性大肠杆菌的耐药性，本研究采用K-B纸片扩散法药敏试验分析了牛乳源大肠杆菌的耐药性，并针对大肠杆菌PhoA基因设计特异性扩增引物，通过特异性和灵敏检测，建立牛乳源致病性大肠杆菌的快速鉴定方法。结果显示，75份隐性乳房炎牛乳样本中，共分离出9株致病性大肠杆菌，分离率为12%；所有菌株对β-内酰胺类、四环素类和糖肽类共6种抗菌药物具有较强的耐药性，对氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物高度敏感；PhoA基因特异性引物能准确鉴定出致病性大肠杆菌，最低检定DNA浓度为0.5ng/μL。综上，本研究建议使用庆大霉素和环丙沙星对该场奶牛进行隐性乳房炎治疗，同时建立了牛乳源致病性大肠杆菌的快速鉴定方法。     

鸡舍环境中病源性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

目的:从鸡舍的地表面分离大肠杆菌,试验研究大肠杆菌分离株的特征及其耐药性,为棚养鸡舍环境中大肠杆菌病的预防、控制和治疗提供资料。方法:从鸡舍表面和鸡舍地表下10cm土壤采集样本,采用分离培养、选择性培养、生化鉴定等方法,对分离的大肠杆菌进行鉴定;并通过药敏试验,了解大肠杆菌分离株对药物的耐药性。结果:本次从鸡舍表面和鸡舍地表下10cm土壤中采集的样本分离到的大肠杆菌对诺氟沙星、多种氨基甙类抗生素、红霉素、阿奇霉素和司帕霉素敏感,但对β内酰胺类的青霉素、甚至头孢唑啉、头孢哌酮却极不敏感。结论:从棚养鸡舍分离到的大肠杆菌,已对部分常规使用的药物产生了耐药性。     

生鲜牛乳中病原菌的分离鉴定与药物敏感性分析

为了检测生鲜牛乳中病原菌种类及其对药物的敏感程度,从郑州市附近奶牛场采集5个生鲜牛乳样本,通过细菌形态、培养特性、生化试验进行鉴定,采用微量液体二倍稀释法测定了24种临床常用抗菌药物对临床分离菌的抗菌活性。结果表明:5个牛奶样本分离出了赫尔曼埃希菌、铜绿假单胞菌、耶尔森菌及屎肠球菌,这些细菌仅对氟喹诺酮类(盐酸环丙沙星和恩诺沙星)、氯霉素类(氯霉素和氟苯尼考)敏感,盐酸环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC值)低至0.5μg/m L。说明这些分离菌交叉耐药和多重耐药情况较严重,不仅对β-内酰胺类药物存在耐药性,而且对其他抗菌药物(如氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类)存在多重耐药的情况。     

大肠杆菌分离鉴定及其耐药性试验

为了确定采集自内蒙古地区某牧场的病料内的病原菌,对其进行细菌的分离培养。将分离培养出的2株病原菌进行16S rDNA扩增、细菌生化鉴定、致病性试验以及细菌耐药性试验。结果表明,分离菌在伊红美蓝琼脂培养基上可生长出暗红色或黑色并且带有金属光泽的菌落;镜检可见,分离菌为革兰阴性杆菌;分离菌生化鉴定结果与大肠杆菌标准菌株ATCC 25922测定的结果相一致;分离菌的16S rDNA与大肠杆菌标准菌株16S rDNA PCR扩增结果相一致;分离到的2株大肠杆菌均具有致病性,对多种抗生素均有耐药性。结果提示,该次分离得到的病原菌主要为具有多重耐药性的致病性大肠杆菌。     

犬源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了研究临床犬致病性大肠杆菌的耐药性,为临床用药提供参考,笔者从本地动物医院就诊的5只腹泻病犬采集5份排泄物样本,进行细菌的分离、培养和生化鉴定,并对分离的菌株进行药物敏感性试验。试验共分离到5株大肠杆菌;分离株对临床上应用较早的药物,如氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明等具有较强的耐药性;对阿米卡星、氯霉素、磷霉素比较敏感。笔者建议临床选用这3种药物对患有大肠杆菌病的腹泻犬进行治疗。     

毛皮动物大肠杆菌对氟喹诺酮类药物及中药的耐药性研究

本试验旨在了解毛皮动物源大肠杆菌的耐药性,有效控制毛皮动物细菌病的发生.针对14株分离自毛皮动物的大肠杆菌,采用PCR方法检测氟喹诺酮类耐药基因gyrA的携带情况,并对扩增得到的gyrA基因进行克隆测序和同源性分析;进一步针对gyrA基因制备地高辛标记的核酸探针,使用斑点杂交检测大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药情况;使用牛津杯法检测了大肠杆菌分离株对复方中药的敏感性.结果显示,PCR检出gyrA基因的阳性携带率为57.1%,斑点杂交检出耐氟喹诺酮类大肠杆菌的阳性率为50.0%,对复方中药的耐药率为28.6%.结果表明,毛皮动物对氟喹诺酮类药物的耐药性非常严重,对中药表现较高的敏感性,研究结果将为临床毛皮动物大肠杆菌病的防制提供依据.     

猪场环境大肠杆菌qnrA和aac(6’)-Ib基因检测

为了解质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr在猪场环境大肠杆菌的流行分布及变异情况,从贵州省规模养猪场空气、污水、粪便和土壤样本中分离、鉴定大肠杆菌57株,PCR检测qnrA和aac(6’)-Ib基因,测序分析aac(6’)-Ib-cr基因变异体,并用药敏纸片琼脂扩散法测其对喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药性。结果表明:57株大肠杆菌均未携带qnrA基因;8株检出aac(6’)-Ib基因,分别来自污水、粪便和土壤样本,且介导对喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素的广泛耐药性。E.coli3和E.coli4在第75(A)、76(G)或488位(A)碱基缺失;E.coli5在第222位(A→T)变异,E.coli1、E.coli2、E.coli3、E.coli4、E.coli5、E.coli7和E.coli8在223位(T→C)和454位(G→T)变异;E.coli3、E.coli4在第492位有A、C碱基增添。说明贵州省规模养猪场肠杆菌科细菌qnrA基因携带率较低,但存在aac(6’)-Ib-cr基因。     

一株肉鸡源大肠杆菌的分离鉴定与致病性分析

为了解规模化肉鸡养殖场致病性大肠杆菌的耐药性与致病性,并为规模化养殖场提供大肠杆菌病的防治参考。从山西省某规模化肉鸡养殖场采集病死鸡病料,进行大肠杆菌的分离培养、生化鉴定、药敏试验、致病性试验。结果表明:分离到1株血清型为O2的致病性大肠杆菌,分离菌对头孢类、喹诺酮类等8种药物耐药,对妥布霉素、阿米卡星高敏,对强力霉素、氧氟沙星中敏。结论:分离株肉鸡源大肠杆菌具有多重耐药性和较强的致病性,季节交替要加强鸡场饲养管理。     

庆大霉素与左氧氟沙星联用对禽大肠杆菌体外活性的影响

随着抗生素的广泛使用,各种细菌的耐药性也逐渐加强。本试验主要研究庆大霉素与左氧氟沙星(氟喹诺酮类药物)联合应用对大肠杆菌体外抗菌活性的影响。采集鸡粪便分离培养大肠杆菌,自制药敏纸片并应用药敏纸片扩散实验法进行联合药敏检测。结果显示,联用效果明显好于单独使用的效果(P<0.01),证明了庆大霉素与氟喹诺酮类药物联用比单独使用庆大霉素或氟喹诺酮类药物更能有效抵抗大肠杆菌。本试验为临床合理用药,减少细菌耐药性提供了参考依据。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

河北省鸡源大肠杆菌分离鉴定及药敏实验分析

从河北省五个市多家养鸡场分离到156株大肠杆菌,进行了生化鉴定和药敏实验,并对药敏实验结果做了分析。河北省鸡源大肠杆菌耐药性严重,对喹诺酮类抗菌药耐药最为普遍,磺胺类次之,对氨基糖苷类和黏菌素最为敏感。大肠杆菌耐药谱复杂,多重耐药性、交叉耐药性严重。     

四川省部分地区大肠杆菌的耐药性监测

采用常规方法对87份采集于四川省部分地区规模化养猪场病料样品(51份),健康鸡(28份)和野生白鹭(8份)粪便样品进行大肠杆菌分离鉴定,并采用K irby-Bauer法对大肠杆菌分离株的26种抗菌药物耐药性进行检测。结果表明,分离鉴定的51株猪源大肠杆菌、28株鸡源大肠杆菌和8株白鹭源大肠杆菌均存在不同程度多重耐药性,3重及3重以上耐药菌株占总菌株数88.51%:其中对青霉素G(100%)、强力霉素(89.66%)、复方阿莫西林(85.20%)、四环素(82.76%)、头孢氨苄(63.22%)、头孢噻吩(52.87%),氨苄青霉素和复方新诺明(51.72%)的耐药性较强;8株野生白鹭大肠杆菌多重耐药性远低于猪源和鸡源大肠杆菌分离株多重耐药性,对受试喹诺酮类、复方新诺明等多种药物高度敏感。     

上海市猪源大肠杆菌耐药性监测

目的了解上海市猪场大肠杆菌耐药情况及耐药规律。方法按照常规方法分离培养细菌,应用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪以及API20E鉴定系统进行了鉴定细菌,采用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪测定了大肠杆菌对24种抗菌药耐药情况。结论本地区猪源大肠杆菌耐药性严重,其中对阿米卡星、多黏菌素敏感率高,对氨苄西林、卡那霉素、四环素、甲氧苄啶耐药性较高,耐药谱复杂,多重耐药性、交叉耐药性严重。     

克氏原鳌虾产ESBLs大肠杆菌的分离鉴定与耐药研究

为了解克氏原螯虾产ESBLs大肠杆菌的耐药流行情况,采集来自山东、江苏、浙江、湖北和辽宁五省共计198份活体克氏原螯虾肠道样品,采用头孢噻肟抗性选择性培养基培养、PCR方法和BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定/药敏系统筛选、鉴定产ESBLs大肠杆菌并检测其药物敏感性。结果显示,从198份克氏原螯虾样品中共分离获得107株产ESBLs大肠杆菌,分离率为54.0%。所有分离菌株对青霉素类、一代头孢和部分三代头孢菌素均耐药;对四环素类、氟喹诺酮类、氯霉素类和磺胺类药物的耐药率均在60%以上(65株);对氨基糖苷类药物耐药率较低;多重耐药(R≥3类)菌株所占比例为86.7%(96/107),且以5类(30%,31/107)和6类耐药(28%,30/107)为主。通过试验初步获得了克氏原螯虾产ESBLs大肠杆菌耐药水平的基础数据,为克氏原螯虾细菌耐药性防控和水产品公共卫生监测奠定基础。     

不同规模猪场腹泻仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测

从湖南不同地区9个猪场采集腹泻仔猪的肛门拭子,利用麦康凯平板、革兰氏染色镜检和PCR方法共鉴定499株大肠杆菌。并通过K-B法检测各猪场分离的大肠杆菌对5类抗生素(四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、头孢类)中的9种药物的耐药性。结果显示:各猪场分离的大肠杆菌群体上对头孢噻吩、头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星的耐药性较低,对氧氟沙星、氟苯尼考、强力霉素、复方新诺明、链霉素的耐药性较高。     

山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品,采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定,用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性,采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示,从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌;大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%,多重耐药率为15.5%,其中对多黏菌素耐药率为52.2%,对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%,而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示,β-内酰胺类耐药基因中blaTEM基因携带率为100%,其中全部为blaTEM-1基因,blaCTX-M基因携带率为32.4%,其中主要为blaCTX-M-15基因,没有检测到blaSHV、blaOXA基因;多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%;喹诺酮类耐药基因中aac(6’)-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%,qnrB基因携带率为20.8%,没有检测到qnrA和qnrC耐药基因;对8种毒力基因检测分析结果显示,仅Hly毒力基因没有被检出,Ecs3703、Irp2基因的检出率较高,分别为90.1%和63.4%,71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子,检出率为15.5%,11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构,最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明,山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重,携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌,Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用,可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。     

上海市鸡源大肠杆菌分离鉴定及药敏分析

为了掌握上海市鸡源大肠杆菌耐药情况以及耐药规律,按照常规方法分离培养大肠杆菌,应用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪以及API 20E鉴定系统进行了细菌鉴定,采用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪测定了大肠杆菌对24种抗菌药的耐药情况,并结合菌株来源对菌株耐药性变化及耐药性产生的相关性进行了较全面统计分析.结果表明,上海地区鸡源大肠杆菌耐药性严重,对阿米卡星、多黏菌素耐药性低,对氨苄西林、四环素、复方新诺明、奈定酸、利福平耐药性高.仔鸡大肠杆菌对氟苯尼考、庆大霉素、氯霉素、氨苄西林耐药性强于雏鸡大肠杆菌.耐药谱复杂,多重耐药性、交叉耐药性严重.     

四川省凉山州健康奶牛粪便源细菌的分离及耐药性检测

为调查四川省凉山州健康奶牛肠道不同细菌的耐药情况,课题组成员从2013年起采集不同奶牛场健康奶牛粪便样本,按细菌常规分离、鉴定方法对粪便样本中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌进行了分离、纯化及鉴定,采用纸片扩散法测定各分离菌对不同抗菌药物的敏感性。结果表明:从198份粪便样本中共获得294株菌株,其中大肠杆菌138株、金黄色葡萄球菌51株、肠球菌105株;分离菌株中大肠杆菌、肠球菌对多数抗菌药物呈低水平耐药(耐药率低于30%);金黄色葡萄球菌则表现出较高的耐药性。说明凉山州健康奶牛胃肠道主要的共生菌(大肠杆菌、肠球菌)耐药情况不严重,但金黄色葡萄球菌的耐药状况比较严重,应加强对金黄色葡萄球菌耐药性监测,奶牛养殖业应谨慎使用抗菌药物。