小鼠2-细胞胚胎细管法和OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究

本试验在室温 (2 0℃和 2 5℃ )条件下 ,利用不同浓度的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠 2 细胞胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻保存。在 2 0℃室温条件下 ,用EFS4 0平衡 1min细管一步法冷冻 ,解冻后囊胚发育率仅为35 .0 % ,和新鲜 2 细胞体外培养的对照组 (6 5 .0 % )的差异极显著 (P <0 .0 1)。当 2 细胞胚胎在 10 %EG +10 %D溶液中预处理 5min ,再移入EDFS中平衡 30s二步法冷冻保存 ,解冻后囊胚发育率达 4 7.8%～ 4 8.8% ;当室温升至2 5℃时 ,二步法冷冻保存后 2 细胞的囊胚发育率达到 5 2 .2 % ,与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。改用OPS二步法EFS30冷冻组保存后的 2 细胞胚胎的囊胚发育率高达 6 2 .2 % ,为试验中的最佳组。用最佳细管法和OPS法冷冻组解冻后培养至囊胚移植给受体母鼠均获得产仔     

影响山羊胚胎冷冻效果因素的研究

分别用浓度为1.5 mol/L的乙二醇(EG),1.5 mol/L 1,2-丙二醇(PROH)和1.5 mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,结果三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5 mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与不添加其他成分的EFS40对胚胎冷冻保护效果的影响,结果表明添加BSA的EFS40的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40,但与添加FCS的EFS40间不存在统计学上的差异。     

小鼠4-细胞胚胎OPS法冷冻保存技术

在25℃室温和37℃恒温台条件下，利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40，对小鼠4-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存．以解冻后培养72h的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标，同时对解冻后培养1～3h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。开放式拉长塑料细管（OPS）二步法冷冻保存，即胚胎首先移入预处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡30s，再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中，分别经35、30或25s后直接投入液氮中冷冻保存。一步法冷冻保存则无需预处理液处理。结果表明，小鼠胚胎4-细胞一步法和二步法冷冻后囊胚最高发育率分别为87．7％和88.6％，与对照组（93.0％）差异不显著（P〉0．05）。利用最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植于12只假妊娠50～60h的受体母鼠，结果有4只妊娠产仔17只，妊娠产仔率为42．5％（17／40），与对照组59．4％（19／32）差并不显著（P〉0.05）。     

山羊胚胎冷冻保存技术研究

本研究探讨了不同抗冻保护剂、不同冷冻方法、玻璃化液(EFS40)中添加FCS和BSA,以及冷冻前细胞松驰素B处理对山羊胚胎冷冻保存效果的影响。结果表明,山羊胚胎常规冷冻时以1.5 mol/L EG为抗冻保护剂的保护效果最好,解冻后胚胎发育率为70.59%,孵化率为58.82%;玻璃化冷冻细管法和OPS法以EFS40为保护液的冷冻效果较好,其解冻后胚胎的发育率分别为67.57%和52.94%;EFS40中添加BSA的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40;山羊胚胎冷冻前用细胞松驰素B处理,能提高冷冻保存的效果。     

水牛卵母细胞冷冻保存初步研究

①用EFS30、EFS40、EDFS30、EDFS40四种玻璃化冷冻液对MⅡ期水牛卵母细胞进行毒性试验,结果表明:试验组卵母细胞形态正常率与对照组均无显著性差异(P>0.05);对卵母细胞孤雌激活后EDFS30、EDFS40组的卵裂率与对照组(75.28%)及EFS30、EFS40组差异显著(P<0.05);利用4种冷冻保护剂采用OPS法冷冻保存MⅡ期水牛卵母细胞,其中以EDFS40作为冷冻液时,卵母细胞冷冻解冻后孤雌激活卵裂率最高,达31.60%;以EDFS40作为冷冻液,比较了GMP法和OPS法的冷冻效果,结果表明GMP法冷冻效果好于OPS法。②采用不同预处理时间和平衡时间使用细管法常规冷冻G V期卵母细胞,结果表明预处理5 min、平衡15min组的形态正常率和极体排出率相对较高,分别为72.73%、27.27%。     

小鼠囊胚和扩张囊胚玻璃化冷冻保存的研究

以6M甘油+6.5%PVP(V1)和8MEG+7%PVP(V2)为玻璃化溶液,采用细管法和OPS一步法对小鼠囊胚进行冷冻。结果表明:胚胎在玻璃化溶液中平衡20S显著高于平衡60S后的存活率(P<0.05);蔗糖四步法解冻后的发育率与蔗糖三步法冷冻解冻后的发育率差异不显著(P>0.0 5);用OPS三步法冷冻后(V2)的小鼠囊胚的体外发育率显著高于细管法和OPS一步法冷冻后的发育率(P<0.01);在OPS三步法冷冻过程中,平衡时间对胚胎冷冻后的发育率有一定的影响。     

小鼠囊胚和扩张囊胚玻璃化冷冻保存的研究

以6M甘油+6.5%PVP(V1)和8MEG+7%PVP(V2)为玻璃化溶液,采用细管法和OPS一步法对小鼠囊胚进行冷冻.结果表明:胚胎在玻璃化溶液中平衡20S显著高于平衡60S后的存活率(P＜0.05);蔗糖四步法解冻后的发育率与蔗糖三步法冷冻解冻后的发育率差异不显著(P＞0.05);用OPS三步法冷冻后(V2)的小鼠囊胚的体外发育率显著高于细管法和OPS一步法冷冻后的发育率(P＜0.01);在OPS三步法冷冻过程中,平衡时间对胚胎冷冻后的发育率有一定的影响.     

冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞发育的影响

比较了不同冷冻方法和冷冻保护液对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精和激活后的发育效果.结果表明,开放式拉长塑料细管(OPS)法的效果好于玻璃化细管法和常规冷冻法;在OPS法中,20%EG 20%DMSO对卵母细胞的冷冻保护效果好于EDFS40,而在玻璃化细管法冷冻中,则是EDFS40好于20%EG 20%DMSO.对于常规冷冻法而言,则是1.5mol/L EG的冷冻效果好于1.5mol/L PROH.     

昆明小鼠成熟卵母细胞冷冻保存方案的优化与改进

5-6周龄雌性昆明小鼠的成熟卵母细胞,在不同前处理液(10% EG或10% EG 10% DMSO)中平衡5 min,然后在冷冻溶液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30 s后进行开放式拉长麦管法(OPS,open pulled straw)和固体表面冷冻法(SSV,solid-surface vitrification)玻璃化冷冻保存研究.试验结果表明:玻璃化冷冻中,多种抗冻保护剂组合使用的效果优于使用单一抗冻保护剂,而且EDFS冷冻液冷冻保存小鼠卵母细胞的效果好于EFS,尤其是EDFS30;SSV法冷冻保存小鼠成熟卵母细胞效果优于OPS法.     

奶牛GV期卵母细胞OPS法和GMP法超低温冷冻效果

采用OPS管和GMP管对GV期的牛的卵母细胞进行玻璃化冷冻.在不同的前处理液中平衡5 min,然后在冷冻液(EFS30,EFS40,EDFS30或EDFS40)中平衡30 s,进行OPS法和GMP法玻璃化冷冻保存.结果显示,OPS法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率为69.6%和76.1%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达19.2%和33.3%,2组差异显著(P<0.05);GMP法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率最高达75.6%和80.8%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达15.6%和34.9%,2组差异显著(P<0.05).而采用EDFS40液,OPS法和GMP法对GV期卵母细胞体外发育的影响差异均不显著,但GMP法的冷冻效率较高.表明采用EDFS40液GMP法对GV期卵母细胞的冷冻效率优于OPS法.     

Calf production from vitrified bovine sexed embryos following in‐straw dilution

The objective of this study was to develop an in‐straw dilution method suitable for direct transfer of vitrified bovine sexed embryos. Embryo sexing was performed by molecular diagnosis. Several sexed and vitrified‐warmed embryos were transferred after evaluation of morphologically embryonic survival at warming and in‐straw dilution (Evaluation group). The other embryos were immediately directly transferred to recipients without first being expelled from the straws after in‐straw dilution (Non‐evaluation group). The pregnancy rates of vitrified sexed embryos were 38.7% and 34.8% in the Evaluation group and Non‐evaluation group, respectively, which were not significantly different. The viability of lower quality embryos before vitrification tended to be lower (P = 0.087) than that of the higher quality embryos regardless of evaluating embryos after warming and in‐straw dilution. The abortion rates were similar, and there was no difference between the two groups (13.9% and 12.5%, respectively). These results demonstrate that vitrified bovine sexed embryos can be vitrified and diluted by the in‐straw method and that the vitrified and warmed sexed embryos can develop to term.     

The effect of artificial insemination prior to transfer of a limited number of vitrified and warmed porcine embryos by open pulled straw (OPS) method on their survival ability for farrowing

Embryo transfer (ET) of 20 porcine expanded blastocysts (ExBs) vitrified and warmed (VW) by open pulled straw (OPS) to a recipient allows stable piglet production. The efficiency of artificial insemination (AI) prior to ET of 10 VW ExBs for piglet production was investigated. For one trial, 10–15 VW ExBs from single donor were assigned, 10 were used for ET and the remains were assessed for their in vitro viability. In the non‐AI/ET group, 10 were transferred to each of five recipients. As AI/ET group, 10 were transferred to each of five recipients after AI. In AI/non‐ET group, only AI was performed to seven gilts. In the non‐AI/ET group, the pregnancy rate was 40%, but none of them farrowed. In the AI/ET group, all recipients produced piglets. Four (80.0%) delivered piglets from transferred VW ExBs. The survival rate of VW ExBs to term was 20.0% (10/50). In the AI/non‐ET group, six of the seven gilts farrowed. There was no difference in in vitro viability between the non‐AI/ET and AI/ ET groups (62.5% and 68.3%, respectively). AI prior to ET can be an appropriate way to maintain pregnancy and assist the development of a low number of VW ExBs to term.     

玉米秸秆青贮饲料和谷草组合效应的研究

本试验利用体外瘤胃发酵技术,研究玉米秸秆青贮饲料(CS)与谷草(MS)的组合效应(AE)。将玉米秸秆青贮饲料与谷草以100∶0,80∶20,60∶40,50∶50,40∶60,20∶80,0∶100的比例进行组合,结合二者之间24 h、48 h、72 h产气量和瘤胃发酵特性及其组合效应,筛选出玉米秸秆青贮饲料与谷草的最优组合(BCM)。结果表明,1)体外发酵同一时间点的不同比例组合中,CS∶MS比例为80∶20的产气量(GP)显著或极显著高于其他比例组合(P0.05或P0.01);发酵24、48和72 h的干物质消失率(DMD)在CS占80%时最高,显著或极显著高于其他组合(P0.05或P0.01);发酵24、48和72 h的氨态氮(NH_3-N)浓度和微生物蛋白(MCP)产量均以CS∶MS为80∶20时最大(P0.05或P0.01),然后随CS比例的减少而逐渐降低。2)发酵24 h、48 h和72 h,乙酸、丙酸和丁酸的浓度均以CS∶MS为80∶20时显著或极显著高于其他组合(P0.05或P0.01)。3)CS∶MS为80∶20时的多项组合效应指数(MFAEI)高于其他比例组合,分别为AE_(24 h)1.09、AE_(48 h)0.95和AE_(72 h)0.68。因此,在本试验条件下,玉米秸秆青贮饲料和谷草比例为80:20的组合最有利于瘤胃发酵。     

微贮秸秆与秸秆育肥羊只的比较试验

秸秆微贮后,秸秆发生了质的变化,这一变化,提高了饲草利用价值和适口性,加快了羊只增重.试验将秸秆微贮技术引入景泰,通过微贮秸秆和未微贮秸秆育肥羊只进行对比,结果表明,在60d育肥期内,秸秆微贮料育肥羊平均日增重44.8g,对照组日增重7.1g,提高5.3倍.     

微贮秸秆与秸秆育肥羊只的比较试验

秸秆微贮后 ,秸秆发生了质的变化 ,这一变化 ,提高了饲草利用价值和适口性 ,加快了羊只增重。试验将秸秆微贮技术引入景泰 ,通过微贮秸秆和未微贮秸秆育肥羊只进行对比 ,结果表明 ,在 6 0 d育肥期内 ,秸秆微贮料育肥羊平均日增重 4 4 .8g,对照组日增重 7.1g,提高 5.3倍     

利用体外法研究精料、玉米秸秆青贮与谷草的组合效应

试验采用体外瘤胃发酵法来研究肉牛日粮中不同比例精料与粗料间的组合效应(AE)。用注射器法将精料与玉米秸秆青贮、谷草以100∶0(CR100),80∶20(CR80),60∶40(CR60),50∶50(CR50),40∶60(CR40),20∶80(CR20),0∶100(CR0)的比例进行组合,分别测定产气量(GP)、干物质消失率(DMD)、氨态氮(NH_3-N)浓度、微生物蛋白(MCP)产量和挥发性脂肪酸(VFA)浓度及其组合效应值,确定最适宜的精粗比。结果表明,1)CR80组合的体外发酵GP最高,组合效应值最大;CR100组合的DMD最高;而CR50组合的单项组合效应值最大,NH_3-N浓度和MCP产量最高,产生了最大正组合效应。2)乙酸浓度随精料比例的降低呈先上升后下降的趋势,丙酸和丁酸浓度则随精料比例的下降而降低。3)综合分析各组合的多项组合效应指数(MFAEI),CR50组合最大(AE_(24h)0.56,AE_(48h)0.67,AE_(72h)1.00)。因此,在本试验条件下精粗比为50∶50的组合最有利于瘤胃发酵。     

玉米秸秆的复合处理

试验旨在探讨玉米秸秆的氨化-碱化-盐化复合处理对其营养价值的影响。试验采用3因素2水平完全交叉实验设计,即尿素的添加量分别为2%和4%,氢氧化钙的添加量为2%和4%,泌乳奶牛生长所必需的7种微量元素添加与不添加。结果表明:与未添加任何物质的对照组相比,复合处理玉米秸秆的NDF和ADF分别下降9～18和8～14个百分点,粗蛋白含量平均提高了一倍,钙、磷含量也有升高的趋势;微量元素对秸秆营养价值无明显影响,但添加微量元素有防止霉变的作用。     

秸秆压块技术的研究

农作物秸秆是牛羊等反刍动物的重要饲料资源,如何开发和利用这一资源,使之饲料化和产业化,是发展国民经济的重大战略措施。１９９６年７月农业部公布了《关于１９９６—２０００年全国秸秆养畜过腹还田项目发展纲要》,这对秸秆资源的开发利用起到了促进作用。但由于农作物秸秆含粗纤维较多,蛋白质少,适口性差,消化率低,并且不利于贮藏、运输和保管,有一定的局限性,这在很大程度上制约了其产业化发展。解决秸秆饲料化和产业化的有效途径之一,是将秸秆压制成块,它具有以下优点：①能最大限度地保存秸秆的营养成分,减少养分流失。…