鹅LXRα基因的克隆及填饲对其mRNA水平的影响

为了研究填饲对LxRα mRNA表达水平的影响,本试验以四川白鹅和朗德鹅为试验对象,通过RT-PCR方法克隆了鹅肝脏X受体α(LXRα)基因部分序列,并采用SYBR-Green法研究了填饲对LXRα基因在肝脏和脂肪组织中转录水平的影响.结果获得了1005 bp的鹅LXRα部分序列,且与其它物种有较高的相似性,但存在8个氨基酸变异位点.LXRα基因在肝脏、腹脂和皮脂中都有表达,但在肝脏中的表达量最高.填饲引起鹅皮脂、腹脂和肝脏的LXRα mRNA表达丰度的显著增加.对照组中,LXRα在朗德鹅肝中的表达量高于四川白鹅(P<0.05),而在皮脂、腹脂中朗德鹅的表达量低于四川白鹅(P<0.05).填饲组,在肝和腹脂中LXRα的表达量四川白鹅显著高于朗德鹅(P<0.05),皮脂中表达量品种间差异不显著.填饲后LXRα mRNA表达丰度与皮脂、腹脂和肝脏的相对质量呈显著正相关,并且朗德鹅的相关性要强于四川白鹅.结论:填饲引起鹅肝脏和脂肪组织的LXRα mR-NA表达丰度的显著增加,填饲对LXRα mRNA表达的影响存在显著的品种差异.     

鹅Perilipin基因部分片段的克隆、不同品种及填饲对组织mRNA表达水平的影响

本研究旨在克隆鹅围脂滴蛋白(Perilipin)基因,并探讨填饲对其在四川白鹅和朗德鹅肝脏中表达的影响,为从脂滴角度研究鹅肥肝分子机理提供依据。试验选取12只朗德鹅和12只四川白鹅为研究对象,通过RT-PCR方法扩增鹅Perilipin基因部分序列,采用实时定量技术研究了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况,最后检测填饲后两品种鹅肝脏总脂质含量、甘油三酯(TG)水平、肝质量以及Perilipin基因表达变化。结果表明:获得的鹅Perilipin基因序列与原鸡的同源性最高,与哺乳动物的同源性也达到70%以上;从组织表达上看,该基因主要表达于腹脂和皮脂,而在其他组织几乎不表达;填饲引起鹅肝脏Perilipin mRNA表达丰度的极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;此外,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲会引起Perilipin mRNA在鹅肝脏中表达丰度的极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。     

鹅过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR)基因在脂肪肝形成过程中的调控表达

为了研究鹅填饲前后过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR)基因的表达模式,并检测鹅脂肪肝和腹脂中的PPAR表达量,试验测定了填饲前后鹅的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、大脑、胸肌、腿肌和腹脂中的PPAR基因RT-PCR产物,并采用RT-PCR检测了PPAR基因在各组织中的表达量。试验以GAPDH基因的表达量作为对照,应用系统软件Quantity one进行了吸光值分析。结果表明,填饲前,除腹脂中没有检测到PPAR-α的表达外,其余组织中PPAR-α表达量均相对较高;填饲后,PPAR-α在肺脏中的表达量显著增加,在腹脂中也可检测到有PPAR-α表达,在其余组织中呈降低趋势。填饲前,PPAR-γ在肝脏、脾脏、肺脏、小肠和腹脂中的表达量相对较高,在其余组织中PPAR-γ的表达量相对较低;填饲后,PPAR-γ的表达量在肝脏、脾脏、肺脏、胃、肾脏中呈升高趋势,在腹脂中呈降低趋势,在其余组织中无明显改变。PPAR基因的表达具有组织特异性,而且,填饲后,PPAR-α的表达模式与PPAR-γ并不一致。说明填饲后PPAR亚型在不同组织中具有不同的功能。     

填饲对鹅胰岛素样生长因子结合蛋白2基因表达的影响

研究旨在探讨填饲对朗德鹅胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)基因在肝脏、胸肌和腹脂中表达的影响,将30只70日龄朗德鹅分为填饲组(15只)和对照组(15只),分别于77(填饲7 d)、84(填饲14 d)和89(填饲19 d)日龄采集填饲组和对照组的组织样本。采用实时荧光定量PCR法测定朗德鹅不同填饲阶段IGFBP2基因在肝脏、胸肌和腹脂中的表达情况。结果发现:各阶段填饲组肝脏中IGFBP2基因的表达量显著低于对照组(P0.05),且随着填饲时间的延长,表达水平下降趋势更加显著;胸肌中IGFBP2基因的表达量在填饲的第7和19天与对照组相当,而在第14天则显著低于对照组(P0.05);腹脂中IGFBP2基因的表达量在填饲的第7天和第14天显著低于对照组(P0.05),而在填饲第19天时,IGFBP2基因的表达量在填饲组与对照组间差异不显著。结果表明,IGFBP2基因的表达与鹅肥肝的形成密切相关,为深入研究IGFBP2基因在肥肝形成过程中的作用奠定基础。     

填饲后朗德鹅肝脏和小肠组织中MTP基因表达研究

为了探讨填饲对MTP基因表达的影响,本研究采用RT-PCR法检测了填饲后MTP基因在朗德鹅肝脏和小肠组织中的表达情况,并对6种体组成参数和甘油三酯等4种血清生化指标进行了检测.结果表明:填饲后,各体组成参数和血清生化指标的水平都显著升高;MTP基因在朗德鹅的肝脏和小肠组织中都有表达;填饲后肝脏组织中MTP基因的表达无显著性变化(P>0.05),而小肠组织中的MTP基因的表达水平却显著升高(P<0.05).结论:填饲引起MTP基因在小肠和肝脏中的变化差异可能与肝细胞中可利用脂类物质的水平、其它调控因子及填饲的高脂食物有关.     

填饲前后鹅PPARs基因组织表达特性的研究

采用RT-PCR分析填饲前后朗德鹅11种组织PPAR基因的表达差异性,结果显示,除腹脂外,PPAR-α在其他10种组织中都有表达,其中较高表达于心脏、肝脏、肾脏、十二指肠和胸肌;中等程度表达于肌胃、全脑、腿肌;较低表达于脾脏和肺脏.填饲后发现该基因在肾脏中依然高表达,除肺脏中表达量升高外,在其他组织中表达量均下降.PPAR-γ较高表达于肝脏、脾脏、肾脏、十二指肠和腹脂,较低表达于其他组织.填饲后发现该基因在心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌胃中表达量升高,在肝脏、十二指肠、全脑、胸肌、腿肌中表达量基本保持不变,在腹脂中表达量降低.结果表明PPARs风的表达具有组织特异性,填饲前后的表达量变化反映PPARs基因影响鹅肥肝的形成.     

饲养方式对河田鸡脂肪代谢的影响

本文主要研究了饲养方式、性别、日龄对河田鸡脂肪代谢的影响。试验采用28日龄河田鸡,分为笼养组、室内平养组和草地散养组,每组4个重复,笼养组每重复公母各15只鸡,平养组每重复公母各30只鸡,草地散养组每重复公母各50只鸡,公母分开饲养,在第8、12、16周分别进行屠宰分析。结果表明,饲养方式、性别、日龄对脂肪合成关键酶FAS和ME的mRNA水平及其酶活性具有显著影响,散养鸡的肝脏FASmRNA和MEmRNA水平及其酶活性显著低于笼养鸡（P〈0．05）,与之相应的是散养鸡的肌内脂肪、肌间脂肪、皮下脂肪、腹脂率显著低于笼养鸡（P〈0．05）。随着日龄的增加,肝脏FAS、MEmRNA水平及其酶活性会随着增加。母鸡的肝脏FAS、MEmRNA水平及其酶活性显著高于公鸡（P〈0．05）。从酶活性与脂肪沉积的相关性可以看出,FAS活性与腿肌IMF含量、肌间脂肪宽、皮下脂肪、腹脂率呈正相关,并且与皮下脂肪和腹脂率呈显著正相关（P〈0．05）,FAS活性与胸肌IMF呈负相关,但相关性不显著。肝脏ME活性与腿肌IMF、胸肌IMF含量呈显著正相关（P〈0．05）,而与皮下脂肪、腹脂率呈负相关（P〉0．05）。     

鹅ACSL1基因克隆及其在鹅肥肝形成中作用的初步研究

本研究旨在克隆鹅长链酯酰辅酶A合成酶1(ACSL1)基因,并研究其在填饲诱导鹅肥肝形成中的作用,为揭示ACSL1在鹅肥肝形成过程中的作用提供依据。以前期抑制消减杂交文库筛选的部分ESTs序列为基础,通过RT-PCR扩增鹅ACSL1基因CDS、并用实时定量等技术检测该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况及填饲对其在肝脏中表达的影响,同时与填饲后鹅肝脏总脂质、甘油三酯(TG)、肝质量等指标进行相关分析。结果发现:鹅ACSL1基因CDS全长2100bp,编码699个氨基酸。保守结构区预测发现,其蛋白质跟其他物种一样,也存在2个保守功能区(ATP/AMPmotif和FACSmotif)和1个跨膜结构域,它与鸡、牛、人、小鼠ACSL1基因的同源性分别为93%、80.4%、78.5%、77.3%;该基因主要表达于腹脂、皮脂、肝脏,而在其他组织表达相对较低;填饲能引起ACSL1mRNA在鹅肝脏的表达丰度极显著增加(P0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;同时,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P0.05)。结果提示:填饲引起ACSL1mR-NA在鹅肝脏中极显著增加(P0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P0.05)。     

益生素、木聚糖酶和淀粉酶对朗德鹅产肝性能、脂肪沉积及血清生化指标的影响

为了研究益生素、木聚糖酶和淀粉酶对朗德鹅产肝性能、脂肪沉积、内脏器官及血液生化指标的影响,试验选取32只平均体重为(3.43±0.10) kg的健康朗德母鹅,随机分为4个组,每组8个重复,每个重复1只鹅.对照组朗德鹅填喂基础饲粮,木聚糖酶组、益生素组和淀粉酶组朗德鹅的饲粮是在基础饲粮中分别添加100 g/t木聚糖酶、4 000 g/t益生素、200 g/t淀粉酶,填饲期共23 d.结果表明:1)木聚糖酶组、益生素组、淀粉酶组朗德鹅的肥肝重分别比对照组提高了4.96%(P>0.05)、13.08%(P＜0.05)、2.88%(P>0.05);料肝比分别比对照组降低了6.86%(P>0.05)、15.75%(P>0.05)和6.24%(P>0.05).2)各添加剂组朗德鹅的腹脂重、肠脂重、皮下脂肪厚均高于对照组,其中益生素组的腹脂重、肠脂重显著高于对照组(P＜0.05).3)各添加剂组朗德鹅的法氏囊指数、脾脏指数均高于对照组,其中在脾脏指数方面达到了显著水平(P＜0.05);各添加剂组朗德鹅的腺肌胃指数相对于对照组均有降低的趋势(P>0.05),此外,益生素组的胰腺指数显著低于其他各组(P＜0.05).4)益生素组的血清葡萄糖含量最高,甘油三酯和总胆固醇含量最低,而木聚糖酶组和淀粉酶组的血清葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇含量均高于对照组(P>0.05);益生素组的血清总蛋白、白蛋白、尿素氮和尿酸的含量及谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性均显著低于对照组(P＜0.05).可见,添加木聚糖酶、益生素和淀粉酶均能不同程度地提高朗德鹅的产肝性能,促进脂肪代谢,改善机体的消化和免疫状况,其中益生素的添加效果显著.     

填饲对朗德鹅血液指标、组织营养成分以及肝脏组织学的影响

通过对6只110日龄朗德鹅进行高能饲料填饲,测定和观察血清生化指标、肝脏、胸肌和腿肌中营养成分和肝脏组织学变化。结果显示,填饲20d后鹅肝脏重量显著提高(P0.01),血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、甘油三酯、总胆固醇和高密度脂蛋白水平显著增加(P0.01),其中γ-谷氨酰转肽酶在填肥过程中呈现出先升高后降低,与人类肝脏酶学研究结果一致;脂肪主要在肝脏沉积,其他组织无明显差异,蛋白质在肝脏中相对增加;填饲朗德鹅肝脏细胞胀大,肝细胞胞浆中充满大量大小不等的脂肪滴。这些结果为鹅生理和病理研究、肥肝生产及其遗传选育提供基本参考。