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相似文献
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1.
根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,在PRVgE基因阅读框外的上、下分别设计一对引物P1和P2,在引物的 5’端分别加上 KpnI和 EcoRI位点。以 PRV Fa株的 DNA为模板成功地扩增得到一条长的 1.7kb的片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将此PCR产物经KpnI、EcoRI消化后与同样酶切的PUC18质粒连接、转化,得到了明显大于载体的重组质粒PPgE。重组质粒PPgE经酶切鉴定确定为含有PRV 的 gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。在对 PRV Fa(来自福建)、Rice(来自俄国)、TNL(来自台湾)、Ea(来自武汉)、SH(来自上海)的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这一定程度上也体现gE基因组的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示 Fa、Ea、SH可能是同一毒株。本实验认为 gE序列在 1040- 1410碱基的高同源性区域作为PCR检测或核酸探针是非常有用的。  相似文献   

2.
对含伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PrV)Ea株gD基因部分编码序列,gI、gE和11k基因全序列、28k基因部分序列的质粒pSKB4.5进行亚克隆,构建了只含完整gE基因(长1.78kb)的重组质粒pSDM1.78 ,并采用双脱氧末终止法对全序列进行了分析,发现同国外标准毒株Rice株相比较,在核苷酸和氨基酸水平均存在一定程度的差异。进一步将gE基因克隆到高效真核表达载体pcNDA3.1 的Kpn1和BamH1位点之间,构建了gE基因的真核表达质粒pcDNA-gE。体外转染IBRS-2细胞,经间接免疫荧光法检测证实了gE基因在IBRS-2细胞中得到了表达,表达的蛋白具有生物学活性。  相似文献   

3.
参考GenBank中伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列设计了1对引物,对PRVMin—A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM—TEasy载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性。测序结果表明,目的片段包含1个1740bp的开放性阅读框(ORF),编码由579个氨基酸组成的多肽。同源性分析表明,PRVMin—A株与PRVEa株、SH株PE基因的核菩酸同源性分别为99.2%、98.7%;推导氨基酸的同源性分别为98.6%、97.2%。  相似文献   

4.
伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
参考Genebank发表的伪犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)的gI和gE基因序列,自行设计并合成了两对引物,对PRV上海株(PRV-SH)进行PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,均呈现一条约960bp和1740bp的条带,将其克隆入pGEM-T-easy载体中,进行了序旬测定,将PRV-SH株的gI基因与Rice株gI基因比较发现,核苷酸的同源性为94.7%,氨基酸的同源性为91.3%,证实为gI基因,将PRV-SH gE基因序列与Ea株、Ruce株gE基因序列进行比较,结果显示,该序列与PRV Ea株、Rice株gE基因的同源性分别为98.5%、97.5%;的氨基酸序列与Ea株,Rice株和I型单纯疱疹病毒(HSV-1)17株gE的同源性分别为97.2%、94.8%和15.6%。  相似文献   

5.
伪狂犬病病毒Ea株gD基因的克隆及序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
本研究从含有伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)Ea株gD基因BamHI 6.6Kb片段的重组质粒pUCB7中分别亚克隆gD基因的上,下游片段,并对上游片段进一步改造,去掉gD基因上游的非编码序列,构建了含完整gD基因编码区的重组质粒,pBRgDI,并利用基因内部的限制性内切酶位点,用内切酶KpnI和SalI酶切分析,证实了 gD基因的可靠性和完整性,同时构建了测序质粒pSKgDSB,pSKgDS,并用双脱氧终止法进行测序,将测序结果与国外的Rice毒株进行比较,发现Ea株gD基因核苷酸序列有多处点突变和一处插入突变,在编码氨基酸残苦水平上也有差异。  相似文献   

6.
参考GenBank中伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列设计了1对引物,对PRV粤A株gE基因进行了PCR扩增,PCR产物克隆到PMD18-T载体.对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性,并与2株不同来源的毒株进行了同源性分析和比较.  相似文献   

7.
伪狂犬病病毒广西B、W株gE基因的扩增、克隆及序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
在已鉴定了的伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)11种糖蛋白中,gE是其中十分重要的一种非必需糖蛋白,是伪狂犬病病毒重要的毒力基因,它在介导感染细胞的融合,病毒在细胞间的扩散,病毒粒子的释放等方面均起着十分重要的作用,尤其是在影响伪狂犬病病毒神经嗜性和毒力方面的作用。利用PRV gE基因缺失疫苗,结合血清学方法可以区分疫苗接种猪和野毒感染猪。  相似文献   

8.
参考GenBank中伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列设计了1对引物,对PRV粤A株进行了PCR扩增,PCR产物克隆到pMD18-T载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实已克隆到PRV粤A株的gE全基因。  相似文献   

9.
根据GenBank中已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV) gE、gI基因的序列设计了2对引物,对PRV NP株的gE、gI基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序,测序结果与预期的PRV gE、gI基因片段相符。同源性比对分析结果显示,PRV NP株gE、gI基因推导的氨基酸序列与国内分离的PRV毒株的同源性分别为95.7%~99.8%、89.9%~99.5%。遗传进化树分析和氨基酸序列比对结果发现PRV NP株的gE氨基酸序列发生变化的位点与2012年国内分离到的PRV流行株相同,从而推测NP株为PRV变异毒株,本研究为PRV的流行病学调查分析奠定了基础,也为开发科学、有效的新型猪伪狂犬病(PR)疫苗提供科学依据。  相似文献   

10.
猪伪狂犬病病毒XIN-W株gD和gE基因的克隆及序列分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
根据已发表的PRVgD、gE基因序列 ,设计合成了两对引物 ,对猪伪狂犬病病毒XIN W株相关的毒力基因gD、gE序列进行测定和分析。经PCR扩增分别得到了全长为 12 0 9bp,1 743bp的gD、gE全基因序列 ,将它们克隆到pGEM T Easy载体中 ,并转化JM1 0 9,挑取阳性菌落的质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,与其他参考毒株的gD、gE基因进行比较。结果表明 ,XIN W株与其它毒株相比 ,gD、gE基因核苷酸序列的同源性分别为 97.9%~99.3 % ,98.0 %~ 98.7% ;氨基酸序列的同源性分别为 97.0 %~ 99.3 % ,97.1 %~ 98.1 %。不同的PRV毒株间gD、gE基因在核苷酸水平和氨基酸水平高度保守。遗传进化树显示 ,XIN W株和国内其它毒株起源相同 ,属同一进化分支  相似文献   

11.
参照已发表的扩增伪狂犬病毒gI和gE部分基因的PCR方法,合成了一对引物,以PRV H株细胞毒为模板,扩增出一条约850 bp的片段,并进行克隆和测序。然后与GenBank上国内外其它毒株gE基因进行核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性分析,构建了遗传进化关系图。结果表明,PRV H株与其他15株PRV核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.0%~99.2%和93.2%~98.5%,其中与SH株最近,分别为99.2%和98.5%;进化树分析表明,该毒株与目前国内流行的毒株在同一进化分支内,与国外毒株分属不同分支,说明分离的H毒株与目前国内流行的毒株一致。  相似文献   

12.
用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到pMD18-T载体后,转化大肠杆菌XL1-blue菌株,重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较,确证含有PRV闽A株gE基因的表位抗原编码区,此区段与PRV Rice株相应区段的DNA序列同源性为97.3%,氨基酸序列同源性为94.7%。  相似文献   

13.
根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与身份种真核表达载体pPICZaA、pAcGP67A序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具有不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP67A载体,转化大肠杆菌TOP10菌档及XL1-Blue菌株,获得了含伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的重组质粒pICZaA-FS与pAcGP67A-FS。序测定结果显示两个重组质粒中插入片段的大小与方向均正确。  相似文献   

14.
伪狂犬病病毒gE基因的原核表达及间接ELISA方法的建立   总被引:3,自引:1,他引:2  
以质粒pBV222/gE为模板,经PCR扩增出750 bp的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因片段,克隆入pET-41b质粒中并转化大肠埃希菌TG1。经PCR、酶切鉴定,筛选出阳性重组质粒pET41b/gE后,转化表达菌Balgold,IPTG诱导,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分析检测。以纯化后的目的蛋白作包被原,建立间接gE-ELISA检测方法。结果表明,目的基因在30℃,0.025mmol/LIPTG诱导条件下,可在Balgold中高效表达,目的蛋白大部分以可溶性形式存在,并能被PRV阳性血清所识别,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(800倍)和包被抗原的最佳工作浓度(1 mg/L)。  相似文献   

15.
伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)Rice株的gE基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号肽以外的全部编码区段,并克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌XL1-blue菌株,重组质粒pMD18-T-FL经酶切和PCR鉴定证实后,进行了序列测定。结果表明,重组质粒pMD18-T-FL含有PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号除信号肽以外的全部编码区段,长1674bp。序列比较分析表明,此区段与PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为97.5%,氨基酸序列同源性为94.8%。  相似文献   

16.
为了确诊猪伪狂犬病病毒(PRV)的感染,探讨目前广西猪群中流行的PRVgE基因的变异特征,为更好地防控猪伪狂犬病(PR)提供参考依据,本研究采集了广西陆川某猪场保育猪群发生呼吸道症状的肺脏组织,并用Vero细胞进行病毒分离,应用PCR方法对分离株的gE基因进行克隆和测序,根据测序结果证实分离到1个PRV毒株,命名为GXLC1。分离株在Vero细胞上增殖,细胞出现典型的病变;GXLC1株gE基因与GenBank上20株国内外具有代表性参考毒株的核苷酸序列同源性为97.1%~99.4%,氨基酸同源性为94.3%~99.6%;gE基因的遗传进化分析显示,GXLC1株与2012年的国内流行毒株亲缘关系较近,与欧美分离株亲缘关系较远;氨基酸序列分析显示,GXLC1株gE蛋白主要抗原表位区较之国内经典强毒株有3个氨基酸位点的变异,可能导致gE抗原性发生改变。本研究将分离到的1个PRV毒株进行了gE基因的分析,发现GXLC1株为近年来流行的变异株,gE蛋白在抗原表位区上有3个氨基酸位点的变异,这是否会影响GXLC1株毒力和抗原性的变化,还有待进一步研究;对gE基因变异特征的分析和病毒的分离为进一步丰富广西PRV的分子流行病学和疫苗的研制提供参考依据和重要材料。  相似文献   

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