种鹅产蛋数不同选育方法模拟研究

利用连续3个世代鹅的产蛋记录和系谱数据,对鹅产蛋性状不同的选育方法进行了模拟研究。利用系谱数据,G1和G2世代产蛋数据,估计个体育种值,并依据表型和育种值数据,对G2群体按照个体表型、家系表型、个体育种值、家系育种值进行排序,各选择30%个体,寻找其在G3世代中的后代,计算不同选择方法所产生后代的表型和遗传进展,评估不同选择方法对鹅产蛋数选育的最优方法。结果表明:个体育种值选择家系育种值选择家系选择个体表型选择效果;对公鹅的选择效果对母鹅的选择效果。     

利用DDRT-PCR技术分析羊草Na2CO3诱导基因的表达差异

以100mM Na2CO3(pH 10.5)对羊草幼苗进行碱胁迫处理,利用DDRT-PCR技术比较了其在Na2CO3处理48h后和以双蒸水(pH 7.0)作为对照处理的基因表达差异,共分离到22个差异表达的基因片段,其中有14个(9个在根中,5个在叶中)为在Na2CO3胁迫下上调表达的基因(编号为SIGL1～14--Sodium carbonate InducedGene in Leymus chinensis 1～14),8个(5个在根中,3个在叶中)下调表达基因(编号SIGL15～22).对SIGL1进行Northern blot分析证明其为完全受Na2CO3诱导在羊草根中表达,克隆并测序分析表明SIGL1共计466bp,经查询在GenBank中没有与SIGL1同源的基因序列.     

牛IRX3基因启动子转录调控分析

旨在探究牛IRX3基因组织表达规律,并鉴定其启动子区关键转录因子,以期阐明其转录调控机制。本研究采集3头成年公牛心、肝、脾、肺、肾、皮下脂肪、背最长肌、大肠、小肠、网胃、瘤胃、皱胃及睾丸组织,利用荧光定量PCR检测IRX3基因在不同组织中相对表达量。同时克隆牛IRX3基因1.8 kb启动子区序列并构建其启动子6个不同缺失片段的双荧光素酶报告载体,分别转染3T3-L1和C2C12细胞系。进一步利用在线软件预测核心启动子区关键转录因子,借助定点突变及siRNA干扰技术在3T3-L1细胞系内初步鉴定关键转录因子对IRX3基因的转录调控作用。结果表明,IRX3基因在牛13个不同组织中均有表达,且在肺、肾、心、皮下脂肪、背最长肌中高表达(P0.05)。利用双荧光素酶报告载体检测到牛IRX3基因核心区域在-372/-42 bp。结合定点突变及siRNA干扰技术初步鉴定NRF1、KLF4、HOXA5和CREB1转录因子对IRX3基因的转录活性有重要的调控作用。综上表明,牛IRX3基因在背最长肌和脂肪组织中表达量相对较高,其启动子1.8 kb区有8个CpG岛,核心区关键转录因子NRF1、KLF4、HOXA5和CREB1位于CpG岛内且调控IRX3基因转录活性。本研究结果为探究IRX3基因在牛脂肪沉积过程中的分子调控机制奠定了重要理论基础。     

CecA-Mag及其突变体在Pichia pastoris中的表达及抗菌活性试验

参考相关天蚕素类抗菌肽的作用机制及抗菌肽结构与功能关系的假说,设计了杂合肽CecA-mag的3个突变体并利用重组聚合酶链式反应定点诱变技术,使突变体得以合成,利用琼脂孔扩散法检测CecA-mag和其突变体对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等临床分离菌株的抑菌效价.结果显示,3个突变体的抑菌活性比CecA-mag分别提高了1....     

北极狐Wnt3a基因CDS区克隆及生物信息学分析

为了研究北极狐Wnt家族成员3a(Wnt3a)基因的结构和功能,利用RT-PCR的方法对北极狐Wnt3a基因CDS区进行了克隆,并对其测序结果进行了生物信息学分析。结果显示:北极狐Wnt3a基因CDS区长度为1 059 bp,编码352个氨基酸;编码蛋白为碱性不稳定的亲水性蛋白;二级结构以无规卷曲为主,其次是β-片层;该蛋白属于膜外蛋白,主要定位于细胞质、细胞核和线粒体中;该蛋白存在33个蛋白磷酸化位点,且该蛋白还存在信号肽结构;与其他9个物种的同源性和系统发育分析来看,与北极狐Wnt3a基因亲缘关系最近的是澳洲野犬,同源性达到了99.7%。该研究成功克隆了北极狐Wnt3a基因CDS区序列,并对其结构和理化性质进行了分析,为后期研究Wnt3a基因和其相关信号通路提供了理论铺垫。     

猪ALAS1基因的克隆、序列分析及表达模式的研究

目的:首先克隆了猪ALAS1(5-aminolevulinate synthase 1)DNA序列,并对CDS序列进行了序列分析,分析了该基因的表达模式。方法:以4月龄长大母猪的卵巢为材料,运用同源序列克隆技术,对猪ALAS1 DNA序列进行克隆并对其进行生物信息学分析;利用性腺激素处理卵巢颗粒细胞并结合RT-PCR方法分析了猪ALAS1基因的表达模式。结果:克隆得到了猪ALAS1 DNA序列9 137 bp,其中包括53 bp的5'非编码区序列、1 922 bp的CDS序列和2~9内含子序列,共编码640个氨基酸;猪ALAS1蛋白氨基酸序列与人和小鼠的相似性一致(100%);ALAS1蛋白的分子量约为38.0 KDa,等电点为9.07,可能存在10个PKC磷酸化位点、1个CAMP磷酸化位点、4个N-糖基化位点、12个豆蔻酰化位点、3个CKII磷酸化位点和1个酰胺位点,还包含1个天冬酰胺转氨酶超家族(AAT-1)保守结构域;猪ALAS1在性腺激素处理2个卵巢颗粒细胞后,可检测到该基因在卵巢颗粒细胞中的显著性表达,之后其表达量迅速下降,12 h后表达量又提高,之后表达量再次迅速下降。结论:猪ALAS1基因的CDS区在物种间保守性强,推测猪ALAS1基因参与卵泡的发育和排卵及在黄体化过程中发挥一定作用。     

miRNA-148a-3p的生物信息学分析及其在小鼠不同组织中的表达水平检测

旨在研究小鼠不同组织中miR-148a-3p的表达情况,并对其进行生物信息学分析,构建miR-148a-3p基因相关网络,进一步阐明其在机体中的作用.本研究以6周龄雄性C57BL/6 J小鼠胃、肺、脾、皮肤、肝、心和肾7个组织为研究材料,每组3个重复,进行3次平行试验.利用qRT-PCR技术比较小鼠不同组织中miR-1...     

秀丽隐杆线虫去饱合酶FAT1基因密码子优化及真核表达载体构建

ω-3长链多不饱和脂肪酸对人体的营养和健康具有重要意义,一旦缺乏将会引起人类各种疾病。去饱和酶FAT1基因是在线虫中合成ω-3长链多不饱和脂肪酸最关键的基因。为了对FAT1基因的密码子进行优化,并构建一个真核表达载体,利用JCat软件对FAT1基因进行了密码子优化,得到一个优化后的基因FAT1m。设计突变引物,利用重叠PCR法拼接全长FAT1m基因,并连接到pBudCE载体中。结果表明:FAT1m基因的16个密码子被改造,包括Val 2个,Ser 2个,Gln 8个,Leu 4个,但是并没有改变氨基酸序列。并且把FAT1m基因连接到pBudCE载体,成功构建了真核表达载体pBud-FAT1m。     

皖南黄兔IGF1基因扩增及其多态性分析

胰岛素样生长因子1(IGF1)是动物生长发育等生命过程中的重要调节因子,目前关于家兔IGF1基因序列扩增和多态性的研究还很少。该研究以安徽皖南黄兔为试验动物,通过PCR方法扩增其IGF1基因编码区全序列,利用混合DNA池测序和生物信息学方法分析了IGF1基因扩增区域的遗传变异特性。结果获得皖南黄兔IGF1基因包含第1~5外显子的基因组序列5条,长度分别为316、657、691、757和403 bp,与种子序列一致性分别为100%、99.5%、99.9%、99.7%和99.8%;5个外显子组成432 bp的CDS序列,编码143个氨基酸残基组成的蛋白质。测序和生物信息学分析结果则表明,在皖南黄兔IGF1基因内含子1中存在3个多态位点(3056GA、3107TC和3164 GA),3个位点并不位于剪接位点,但分别位于MZF1、ATF4、CEBPA、HLF和NKX2-8顺式作用元件位置,因而可能影响基因表达。该研究成功扩增获得皖南黄兔IGF1基因全部5个外显子序列,拼接获得基因编码区全序列,并利用混合DNA池测序法发现了内含子3个新的SNP位点,研究结果为揭示肉兔IGF1基因功能奠定了基础。