间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

银加强胶体金探针检测鸡减蛋综合征病毒的研究

本研究首镒报道应用银加强胶体金探针检测减蛋综合征病毒获得成功。经初步提纯后的ＥＤＳ７６病毒免疫制备高免血清，按常规方法提取兔抗ＥＤＳ７６病毒的ＩｇＧ，成功地建立了检测ＥＤＳ７６病毒抗原的银加强胶体金探针法，并确定了操作程序的最佳试验条件为；兔抗ＥＤＳＶＩｇＧ工作浓度为１：４００，金标记羊抗兔ＩｇＧ的工作浓度为１：２０，银染色的时间为１５ｍｉｎ。用该法对提纯的ＥＤＳ７６病毒抗原的最低检出一为０．１１     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

ELISA鉴别检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒抗体水平的研究

猪腹泻症是一类严重影响养猪业发展的疾病 ,其中尤以病毒性腹泻难以防治。引起猪病毒性腹泻的主要病原有 :猪流行性腹泻病毒 (ＰＥＤＶ)、猪传染性胃肠炎病毒 (ＴＧＥＶ)和轮状病毒 (ＲＶ)。在生产实践中 ,这三种病毒往往在同一个猪场混合感染的情况比较多。本研究针对三种病毒混合感染的特点 ,采用ＥＬＩＳＡ检测猪ＰＥＤＶ、ＴＧＥＶ和ＲＶ抗体水平 ,为这三种病的合理预防提供依据。1　材料和方法1 .1　羊抗猪ＩｇＧ酶标记抗体的制备1 .1 .1　猪ＩｇＧ的提取 :采集健康母猪的初奶 1 0 0ｍｌ,按常规方法分离乳清 ,然后结合饱和硫酸铵沉淀法…     

猪流行性腹泻微量血清中和试验的建立和应用

用分离自广东某猪场并适应于传代细胞生长的猪流行性腹泻病毒Ｐ－ＥＤＶＧ１毒株作猪流行性腹泻（ＰＥＤ）微量血清中和试验。检测了五个猪场共１５２份血清，其中未发生过ＰＥＤ的一个猪场３５份血清，抗体滴度≤１：２；三个发生过ＰＥＤ的猪场７７份血清，抗体滴度在１：４～１：５１２；一个接种过ＰＥＤ油佐剂灭活疫苗的猪场４０份血清，抗体滴度在１：８～１：１０２４。猪传染性胃肠炎、伪狂犬病，猪瘟和轮状病毒阳性血清均不     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎抗体的间接ＥＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１：８０，酶结合物，抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母原抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶ Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞和鸡胚神经胶质细胞传代，用盲传至第６代的ＣＥＦ，ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法，确定了待检血清稀释度１：１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释率１：１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＡＩＶ，Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验，证实该法特性强且简单，方便经济，适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０