猪支原体肺炎的临床症状和防治

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引发的一种呼吸系统疾病，该病不仅能够导致患病猪出现咳嗽、气喘和呼吸困难等慢性肺炎症状；还具有较强的传染性和较高的发病率，对我国的养猪业发展也造成严重的制约。因此，本文主要从猪支原体肺炎的病原学、流行病学、病理学、临床症状、诊断、临床防治策略等多个方面对猪支原体肺炎进行综述，期望以此提高兽医对猪支原体肺炎的临床诊断水平的同时，进一步提升我国养猪业针对猪支原体肺炎的防控能力。     

我国市场上猪支原体肺炎疫苗现状及应用效果

目前,市场上猪支原体肺炎疫苗主要为常规的全菌体疫苗,根据我国猪支原体肺炎产品注册情况,本文主要从猪支原体肺炎疫苗的制备技术、免疫程序及免疫效果三个方面对国内报批、销售的猪支原体肺炎疫苗进行比较研究,并简要分析各疫苗产品的特点。     

2018—2019年我国部分地区猪肺炎支原体多位点序列分型

为了解我国猪肺炎支原体种群结构和进化关系，2018—2019年采集山东、广西、河南、江西、云南、天津、湖南等地猪组织样品1 242份，进行猪肺炎支原体荧光定量PCR和巢式PCR检测，并对测序确认的87份阳性样品，采用adk、rpoB、tpiA 3个管家基因作为分型参考进行多位点序列分型（MLST），并对3个管家基因均扩增成功的阳性样品进行p146基因分型，分析我国猪肺炎支原体种群结构，并结合pubmlst数据库公布的151个序列类型（ST）进行eBURST分析。结果显示：有24份阳性样品的3个管家基因全部扩增且测序成功，共分为10个ST，均为国内外首次报道；10个ST分为3个克隆复合体（CC）和4个独特型，其中ST128占41.7%（10/24），样品来自江苏、河南和广西，为本次检测的主要流行型。结果表明，我国猪肺炎支原体分布较广，具有一定的基因型独特性。本研究为我国猪肺炎支原体的流行病学数据库研究提供了新资料，有助于掌握国内猪肺炎支原体基因型分布情况，进一步完善了猪肺炎支原体流行病学数据库。     

两种猪支原体肺炎灭活疫苗的临床效果对比

猪支原体肺炎又名"猪喘气病",对养猪业危害巨大,疫苗免疫是预防该病最有效的方式。为了评估市场上两种猪支原体肺炎疫苗的临床效果,本试验从仔猪日增重、成活率、料肉比以及血液抗体水平等方面进行了对比,结果表明试验组支原体灭活苗的效果要优于对照组。     

猪肺炎支原体检测芯片的研制及初步应用

本研究探索建立一种新的基因芯片方法检测和鉴定猪肺炎支原体。在猪肺炎支原体的16SrRNA、P36和P463个基因内设计3个靶基因片段,用PCR标记Cy3探针,建立了用于检测和鉴定猪肺炎支原体的检测芯片。试验结果显示,猪肺炎支原体与检测芯片的3个靶基因（Mhp-16S、Mhp-P46和Mhp-P36）杂交呈阳性,猪鼻支原体只与Mhp-16S靶基因杂交呈阳性,其它所测细菌和病毒不与检测芯片的靶基因杂交。检测芯片的检测灵敏度和PCR相同,能达到10pg基因组DNA／50μL标记体系或反应体系。用检测芯片鉴定了3株疑似猪肺炎支原体临床分离株,结果有2株为猪肺炎支原体,1株为其它猪支原体。用检测芯片、P36-PCR和分离鉴定分别对45头病猪临床样品选择混合培养物中的猪肺炎支原体进行了检测,结果它们的检出率分别为20％（9／45）、22．2％（10／45）和8．9％（4／45）。检测芯片还检出有26．7％（12／45）的病猪感染了其它猪支原体。试验结果表明,所建立的检测芯片是一种快速检测和鉴定猪肺炎支原体的敏感特异性方法。     

苏淮猪IFNGR1基因多态性及其与猪气喘病抗性的相关分析

猪气喘病是由猪肺炎支原体引起的一种慢性、接触性呼吸道传染病,其流行范围广、难治愈,给养猪业造成了巨大的经济损失。本试验在前期RNA测序结果的基础上,首先选出了差异表达基因干扰素γ受体1(INFGR1),利用PCR扩增和PCR产物直接测序筛查了INFGR1基因外显子区域的SNP位点,进一步在苏淮猪群体开展了基因型分型检测,同时利用实时荧光定量PCR技术检测了苏淮猪群体的猪肺炎支原体感染水平,最后统计分析了INFGR1基因SNP位点不同基因型与苏淮猪群体猪肺炎支原体感染水平的相关。结果发现在苏淮猪IFNGR1基因外显子5上检测到一个SNP(A12557G),苏淮猪群体A等位基因频率为0.555,G等位基因频率为0.445;不同基因型猪肺炎支原体感染量差异极显著(P0.01),GG基因型感染水平显著高于AA基因型,初步推测IFNGR1基因SNP(A12557G)可作为影响苏淮猪气喘病抗性选育潜在的分子遗传标记。     

猪肺炎支原体的研究进展

猪支原体肺炎是一直困扰养猪业发展的重要疾病之一。本文综合国内外对其病原一猪肺炎支原体的最新研究情况，从其对猪生长性能的影响、防治动向、检测、主要抗原的研究、基因工程疫苗研制等五个方面进行讨论。     

“猪地方性肺炎及其防治控制”专栏二：有关猪肺炎支原体感染诊断方法和流行病学的最新观点

猪肺炎支原体是猪地方性肺炎（Enzoodc Pneumonia，EP）的主要病原体，本病是一种主要影响肥育猪的慢性呼吸道疾病。尽管人们在控制猪肺炎支原体感染及其带来的不利影响上花费了大量的精力，但是猪地方性肺炎仍继续给全球养猪生产造成重大的经济损失。猪肺炎支原体通常是通过引进亚临床型感染的动物而侵入猪群的，或通过短距离的空气传播发生感染，但后一种情况较少。一旦侵入猪群，猪肺炎支原体可通过与受感染的母猪直接接触而将病原体传给后代或在同圈猪只之间进行传播。用于诊断猪肺炎支原体感染的“黄金标准”技术——细菌学培养非常费劲，通常很少使用。酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应检测方法以及以屠宰场监测或田间剖解为形式的死后检查，是用于调查猪肺炎支原体是否参与了猪呼吸道疾病的最常用技术。这些技术已被用来监测受猪地方性肺炎影响的猪群猪肺炎支原体的临床型和亚临床型感染猪群、免疫猪群或非免疫猪群以及处于不同的生产条件和管理奈件下的猪群的发生情况。猪场水平上的猪地方性肺炎临床过程差异以及猪肺炎支原体疫苗接种效果的差异表明，猪肺炎支原体的不同田间分离株的传播和毒力特性存在差异。本文综述了猪肺炎支原体感染的流行病学最新知识，包括其传播、感染和血清转化动力学，并且还比较了用来监测猪地方性肺炎的各种流行病学方法。     

有关猪肺炎支原体感染诊断方法和流行病学的最新观点

猪肺炎支原体是猪地方性肺炎(Enzootic Pneumonia,EP)的主要病原体,本病是一种主要影响肥育猪的慢性呼吸道疾病.尽管人们在控制猪肺炎支原体感染及其带来的不利影响上花费了大量的精力,但是猪地方性肺炎仍继续给全球养猪生产造成重大的经济损失.猪肺炎支原体通常是通过引进亚临床型感染的动物而侵入猪群的,或通过短距离的空气传播发生感染,但后一种情况较少.一旦侵入猪群,猪肺炎支原体可通过与受感染的母猪直接接触而将病原体传给后代或在同圈猪只之间进行传播.用于诊断猪肺炎支原体感染的"黄金标准"技术--细菌学培养非常费劲,通常很少使用.酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应检测方法以及以屠宰场监测或田间剖解为形式的死后检查,是用于调查猪肺炎支原体是否参与了猪呼吸道疾病的最常用技术.这些技术已被用来监测受猪地方性肺炎影响的猪群猪肺炎支原体的临床型和亚临床型感染猪群、免疫猪群或非免疫猪群以及处于不同的生产条件和管理条件下的猪群的发生情况.猪场水平上的猪地方性肺炎临床过程差异以及猪肺炎支原体疫苗接种效果的差异表明,猪肺炎支原体的不同田间分离株的传播和毒力特性存在差异.本文综述了猪肺炎支原体感染的流行病学最新知识,包括其传播、感染和血清转化动力学,并且还比较了用来监测猪地方性肺炎的各种流行病学方法.     

猪支原体肺炎的诊断和防治

猪肺炎支原体是支原体科、支原体属的一种。这种病原微生物能够引起猪产生肺炎,该疾病的主要特征为猪发生咳嗽和气喘,因此猪支原体肺炎又被称作猪气喘病。猪支原体肺炎在一年四季均能够发病,但是主要在寒冷、多雨以及潮湿或者气候突然转变的时候发生。猪支原体肺炎一旦暴发,如果不采取合理的控制措施,这种疾病就很难再彻底断绝。因此,该疾病对猪的危害是相当严重的,需要引起养猪人员的重点注意。     

Study on Regulation of Reproductive Hormones in Danzhou Chicken by FSH and LH

To investigate the regulation of reproductive hormones in Danzhou chicken by follicle-stimulating hormone (FSH) and luteotropic hormone (LH),the concentration of FSH and LH in Danzhou chicken blood were changed by different treatments and the concentration of FSH,LH, prolactin (PRL), progesterone (P), and estradiol (E₂) in the blood were determined using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that exogenous FSH and LH could improve the concentrations of FSH and LH,respectively. When one of FSH and LH increased alone,the concentration of PRL was significantly decreased (P < 0.05),while it was significantly increased when FSH and LH were both increased (P < 0.05).The high level of the FSH could result the significant increase of E₂ and P (P < 0.05),and it would expand the increasing effect in cooperation with the high concentration of LH. While the high level of the LH could elevate the concentration of E₂ and P,but effect was not significant (P > 0.05).In conclusion,the study suggested that the increase level of FSH or LH could reduce the concentration of PRL in Danzhou chicken,meanwhile,it could increase the concentration of E₂ and P in varying degrees. However,both of the FSH and LH increase in the blood could result the significant increase of E₂ and P as the synergy. When the concentration of E₂ and P were too high,it could stimulate the release of PRL which could adjust the concentration of FSH and LH,and rebalance the concentrations of E₂ and P in the blood.     

2015年山东省肉鸡饲料原料中重金属污染情况调查及风险评估

本试验旨在调查2015年山东省肉鸡饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的污染情况,评估饲料原料的污染风险。试验收集烟台市莱阳、威海市文登、青岛市莱西、潍坊市诸城、日照市莒县、临沂市沂水、德州市夏津等地不同饲料生产厂家使用的8种饲料原料,包括玉米、豆粕、麸皮、花生粕、棉籽粕、玉米蛋白粉、干酒糟及其可溶物( DDGS)和微量元素预混料,应用电感耦合等离子体原子发射光谱法( ICP-AES)检测镉、铅和铬元素的含量,应用原子荧光光谱法( AFS)检测砷和汞元素的含量,计算检出率、平均含量、超标率、最高含量与平均含量比值( HC/AC)和离散系数。结果表明：饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的检出率分别为32.29%、7.29%、12.50%、100.00%和100.00%;阳性样品中平均含量分别为0.21、1.27、2.12、3.48和0.02 mg/kg,超标率分别为0.00、1.04%、1.19%、54.76%和9.52%;微量元素预混料中砷、铅和镉元素,棉籽粕中铬元素及花生粕中汞元素的HC/AC最大,微量元素预混料中镉元素、花生粕中汞元素、豆粕中砷元素及棉籽粕中铅和铬元素离散系数最大。综上所述,肉鸡饲料原料中铬和汞元素污染严重;微量元素预混料中砷、镉、铬和铅元素、棉籽粕中铬和铅元素、花生粕和豆粕中汞元素易出现严重污染,因此建议制定预混料和饼粕类饲料中多种重金属元素的限量标准。     

Effects of Prostaglandin,N-methyl-D-aspartate and Letrozole on Ewes Plasma Levels of Reproductive Hormones were Evaluated on the Basis of Medroxyprogesterone Acetate Supplementation

This study was aimed to investigate the effects of the different compatibility of medroxyprogesterone acetate (MPA) with prostaglandin(PG), N-methyl-D-aspartate (NMDA) and letrozole (LE) on plasma related hormones levels of reproductive ewes. Thirty-nine and 3-year-old multiparity Suffolk ewes with average weight (75.51+11.55)kg were selected,and assigned into 3 groups,test group Ⅰ:Basis diet+34 mg/d MPA+1 mL/ewe PG, test group Ⅱ:Basis diet+34 mg/d MPA+600 mg/d NMDA, test group Ⅲ:Basis diet+34 mg/d MPA+ 14 mg/d LE, respectively, the trial period lasted for 18 days. The results showed as follows:On the basis of supplemental feeding MPA with PG treated,the levels of FSH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01); Treated with NMDA, the levels of E₂, MLT,FSH and LH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively;Treated with LE, the levels of MLT,LH and T in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively. This study suggested that MPA+NMDA and MPA+LE could be used as medicines for regulate and control oestrus of ewes, and the effect of MPA+NMDA was the best.     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息，本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd，运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明，获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内，与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96．8％，推导氨基酸序列同源性为93．3％。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prod的同源性均为80％，推导的氨基酸序列同源性均为76．3％。氨基酸一级结构分析显示3种Prod编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明，3种Prod编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。     

苜蓿自交不亲和性研究

实验中探讨了苜蓿自交不亲和性和遗传特征。结果得出:1.苜蓿自交结荚百分率为0～92％,平均为27.6％。苜蓿自交不亲和性在群体中呈连续、偏态分布。2.苜蓿自交不亲和性反应主要发生在雌蕊组织下部(子房及子房腔)。3.确定自交不亲和或自交亲和性的判别函数方程为Y=-0.0804x_1—0.5228x_2+0.6117_3。4.苜蓿自交不亲和性受单位点、复等位基因控制,并具有CSI遗传特点。5.S基因与过氧化物同工酶基因(Prxl)为连锁,两者间重组值为27％。6.PSC的遗传力h~2=62％,选择无论对亲和性和不亲和性均为有效。根据本试验结果讨论了苜蓿SI的测度指标、授粉方式及不亲和性的数量差异问题,并探讨了紫花苜蓿与黄花苜蓿种的分类差异,认为两者理应属同一种或种内不同生态型。     

鬼臼多糖对免疫功能低下小鼠自由基产生酶活性的影响

采用环磷酰胺腹腔注射(50mg/kg)小鼠建立免疫抑制模型,观察鬼臼多糖(PEP)不同剂量(50,100,200mg/kg和400mg/kg)配合环磷酰胺应用后,对小鼠脾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)及一氧化氮合成酶(NOS)水平的影响。结果表明,PEP能显著降低免疫抑制小鼠脾脏XOD、MPO的活性;对脾脏总NOS活性无显著影响,但400mg/kg多糖可降低小鼠脾脏诱导型NOS活性,提示PEP可通过降低免疫抑制小鼠体内自由基产生酶水平而起到抗氧化作用。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。     

氨苯磺胺多克隆抗体的制备

采用重氮化法将氨苯磺胺与人血清白蛋白偶联形成免疫原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描分析，免疫原中药物分子与蛋白质分子的偶联比为32：1，改良辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗体，多克隆抗体效价达1：10^5，间接ELISA建立的氨苯磺胺检测的线性范围为1ng／mL～100μ/mL，70％抑制率可检测最低浓度为0．09μ/mL，以抗体与氨苯磺胺的反应率为100％，抗体与其他7种磺胺药交叉反应率很低。结果表明，制备的氨苯磺胺多克隆抗体具有很高的特异性，可用于动物性食品中氨苯磺胺残留的检测。     

Detection and Genetic Evolution of Diarrhea-related Viruses in Chongqing Beef Cattle

In order to investigate the pathogen prevalence of bovine viral diarrhea in Chongqing, this study carried out an investigation of bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine coronavirus (BCV), bovine rotavirus (BRV) and bovine astrovirus (BAstV) on a total of 81 diarrhea samples of beef cattle which were collected from Chongqing by RT-PCR. After the PCR products were sequenced, phylogenetic analysis was performed with Mega 6.0 software. From 81 samples, the positive rate of BRV,BAstV and BVDV were 66.7%,8.6% and 7.4%, respectively,BCV was not detected.Phylogenetic analysis showed that 5 strains of BRV sequences were clustered into a small branch, which had significant genetic distance with other VP6 sequences in GenBank; 5 strains of BVDV, Chinese and Denmark strains were clustered into one branch,genetic relationship were close; 5 strains of BAstV clustered into a branch with Hongkong strain, but there was still an obvious genetic distance. The result showed that calves under the age of half year were the main group of beef cattle with diarrhea in Chongqing. BRV was an important cause of diarrhea in Chongqing, the genetic diversity of BRV,BAstV and BVDV could be reference to further concern.