鸭血清禽流感血凝抑制试验中非特异性因子去除方法研究

近年来,由于禽流感病毒的变异,水禽在病毒的传播过程中所扮演的角色已经发生改变,由不易感但带毒的贮存宿主演变为易感动物,所以鸭禽流感的监测工作具有了更加重要的意义.然而,在鸭禽流感血清抗体的日常监测工作中,经常遇到鸭血清对鸡红细胞悬液的非特异现象,它会造成在血凝抑制试验结果判定时,鸡红细胞不流淌或流淌不完全,给判定造成严重干扰.为寻求能有效去除非特异现象并便于应用的测定方法,试验选取了能够去除水禽血清中非特异性抑制因子的胰酶-高碘酸盐预处理法,选用可以去除血清中非特异性凝集因子的同源红细胞进行直接测定,同时将两种方法加以组合,现报道如下.     

鸭禽流感免疫抗体血凝检测及其应用

鸭是禽流感传播链中的一个重要环节,能否有效防控鸭禽流感的关键之一是使用科学的检测方法.目前,是参照禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验标准(GB/T18936-2003)[1],但是,鸭体内含有非特异性抑制因子,血清中的唾液酸残基会模拟红细胞受体,同红细胞受体竞争与流感病毒血凝素的结合,因而会导致非特异性抑制结果(假阳性)的出现,用鸡红细胞悬液检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象,出现前带和后带现象,有时能严重影响结果的判定.为此,本文采用不同种家禽的红细胞悬液做重复试验,探讨水禽血清的处理方法及不同种的家禽红细胞悬液对水禽禽流感血清抗体检测的影响, 在临床应用中,可为鸭禽流感免疫技术提供参考依据.     

不同种禽红细胞对禽流感血清抗体检测的影响

为摸清不同种禽红细胞对禽流感血清抗体检测结果的影响,本试验通过对经20%鸡红细胞吸附处理后和不进行任何处理的鸡、鸭和鹅的禽流感阳性血清,分别用1%的鸡红细胞、鸭红细胞和鹅红细胞进行血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)。结果发现,用鸡红细胞检测水禽血清会出现非特异性的凝集,经20%鸡红细胞吸附处理后能去除水禽血清中部分的非特异性凝集因子,而选用相应的禽红细胞进行禽流感抗体检测则不存在非特异性的影响。因此,进行禽流感血清抗体检测时应选用各自对应的禽红细胞。     

祛除禽流感HI试验中鹅血清非特异反应现象的研究

目前禽流感抗体水平监测采用GBT18936-2003的方法,此方法中要求采用1%鸡红细胞来进行血凝和血凝抑制试验,以测定禽流感的抗体水平,此方法较适用于免疫鸡相应抗体水平的测定[1-3],用于鹅抗体检测时常出现非特异凝集现象,试验结果很难判定。鉴于此,在利用血凝抑制试验进行血清抗体检测之前,有必要对血清中非特异性血凝抑制因子与非特异性凝集因子(非病毒性凝集因子)加以祛除。本试验对免疫后的鹅血清HI抗体检测方法进行探讨,寻求适合鹅血清HI抗体检测的方法。     

水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨

2003年国家质量监督检验检疫总局出台了<高致病性禽流感诊断技术>(GB/T18936-2003)[1],标准中要求采用鸡红细胞作为血凝与血凝抑制试验的指示细胞监测禽流感抗体,这对于免疫鸡血清中的相应抗体水平监测比较合理[2-4],但对鸭、鹅及其他免疫禽类进行HI抗体水平监测时,常出现非特异性凝集现象[2-3],对检测结果的判定影响较大.有鉴于此,本试验拟对禽流感疫苗免疫后的水禽血清HI抗体检测方法进行探讨,研究适合免疫水禽禽流感HI抗体检测的方法.     

不同种禽类红细胞悬液对HI结果的影响

红细胞凝集抑制试验能够用于监测某些畜禽传染病,如新城疫、禽流感等的抗体水平,由于动物血清中存在某些非特异性血凝物质,致使血凝抑制试验的结果出现非特异性血凝现象。本实验采用鸡、鸭和鹅的红细胞分别与同一份血清进行血凝抑制实验,结果表明,用鸡红细胞来检测鸭、鹅血清抗体效价时,出现非特异性血凝的血清份数较少;而用鸭、鹅红细胞来检测鸡血清的抗体效价时,出现非特异性血凝的血清份数较多。     

不同禽红细胞对水禽禽流感血凝抑制试验结果的影响

禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病,对养禽业及人类健康都会产生严重危害.对家禽进行禽流感疫苗预防接种是我国防治禽流感的主要措施之一.血凝和血凝抑制试验是监测家禽抗体水平、了解家禽免疫效果、建立合理免疫程序的有效方法,由于禽流感病毒具有凝集红细胞的特性,在禽流感血凝抑制试验中,采用鸡红细胞作为检测指示剂.在日常检测中,有许多水禽血清样品需要检测.为了解不同禽红细胞作指示剂对水禽禽流感血凝抑制试验结果的影响,进行了本次试验.……     

用鸭红细胞悬液消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响

禽流感自1878年在意大利首次发生以来,该病不断蔓延。近年来,在许多国家和地区出现暴发和流行,成为严重危害养禽业健康发展的一种主要家禽传染病。加强禽流感的监测是预防和控制禽流感的重要措施。目前,基层单位大都采用微量红细胞血凝抑制试验(简称HI试验)来检测家禽禽流感血清抗体。但在检测过程中,笔者发现依照国标的要求采用鸡红细胞悬液来检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象。本试验用鸭红细胞悬液替代鸡红细胞悬液来检测水禽禽流感血清HI抗体,探讨是否能消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响,现报道如下。1…     

不同家禽红细胞悬液对禽流感血清抗体检测的影响

为探讨不同家禽红细胞对禽流感血清抗体检测的影响，对不同家禽的禽流感阳性血清分别经不同方法处理后，做了一系列对比试验。结果发现，经受体破坏酶(RDE)处理后，虽然可以消除异种家禽血清对异种家禽红细胞的非特异性凝集作用的影响，但因处理复杂，费用高，不宜推广应用；经鸡红细胞吸附处理，可明显降低水禽血清对异种红细胞的非特异性凝集作用，但处理费时；而用水禽红细胞检测同种水禽的禽流感血清抗体，可以有效去除血清非特异性凝集的影响．且更能准确地反映水禽经禽流感疫苗免疫后的抗体水平。因而，应选用与宿主来源相同的红细胞悬液检测水禽禽流感血清抗体。     

不同家禽红细胞悬液检测水禽禽流感抗体对比试验

用同种水禽红细胞及水禽血清经处理后用鸡红细胞检测水禽禽流感抗体,试验结果表明:用鸡的红细胞来检测鹅、鸭的禽流感免疫抗体,比用同种水禽红细胞检测的抗体滴度平均低(2～4)Log2,如果禽流感免疫抗体低于4Log2时.用鸡红细胞基本检测不到Hl抗体.而用同种水禽红细胞对水禽禽流感抗体进行检测,可完全消除j}特异性凝集因子对水禽流感抗体检测的影响.     

不同种家禽红细胞对水禽禽流感抗体效价的影响

为探讨不同种家禽红细胞对禽流感血清抗体效价的影响,对鸭、鹅的禽流感免疫血清分别经不同方法处理后,做了一系列对比试验。结果发现,受体破坏酶(RDE)可以完全去除水禽血清中的非特异性凝集抑制因子,但RDE处理血清的成本较高,在临床中不易广泛使用。用5%或20%鸡红细胞吸附处理,可减少水禽血清中非特异性凝集因子对检测的影响,但吸附不完全,且耗时。因此,做HI试验时最好用同种禽类的红细胞来检测血清的禽流感抗体效价,即鸭禽流感血清用鸭红细胞悬液,鹅禽流感血清用鹅红细胞悬液,这样几乎可完全排除非特异性凝集和非特异性凝集抑制因子对水禽禽流感抗体检测的影响。如果没有鸭、鹅的红细胞也可以使用鸡红细胞代替检测鸭、鹅血清,但鸭、鹅血清必须进行试验前的处理。     

用鸽鸡红细胞进行禽流感血凝抑制试验的比较

分别用1％鸽红细胞和1％鸡红细胞,对经H5亚型禽流感疫苗免疫过的鹅、鸽、鸡的血清,按照不同血清处理方法,进行禽流感血凝抑制试验.结果表明,鸽红细胞作指示细胞,检测鸽免疫血清HI抗体效价效果优于鸡红细胞,但不适于检测鹅、鸡的免疫血清的HI抗体效价.     

水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨

采用不同方法对78份白鸭免疫血清进行H5亚型禽流感血凝抑制试验(HI试验)。试验共分6个组:血清经20%的同源禽种红细胞或鸡红细胞进行吸附处理、或不经吸附处理,再用1%的同源禽种红细胞或鸡红细胞作为指示细胞进行试验。结果表明:进行鸭禽流感HI抗体检测时,可采用1%同源禽种红细胞悬液作指示细胞进行测定,并将结果降低1log2后作为测定结果。此方法可以有效排除血清中非特异性凝集因子对监测结果的影响,提高准确性。     

豚鼠醛化红细胞的制备及其在新城疫和禽流感HA/HI试验中的应用

目前,在新城疫(ND)和高致病性禽流感(HPAI)的疫情免疫监测中,血凝/血凝抑制试验(HA/HI)依然是基层畜牧兽医部分最主要的检测方法,β-微量法以其操作简便、迅速、易判定、能准确表达结果等优点被广泛应用。在HA/HI试验中,需要使用1%鸡新鲜红细胞作指示剂。但鸡新鲜红细胞存在着以下几个缺点:一是健康非免疫公鸡较难获得,尤其是不同鸡或同一羽鸡不同时期采的红细胞,用于实验可能存在较大的差异;二是新鲜鸡红细胞质脆易碎,保存期短,需临用时现采现配;三是新鲜鸡红细胞易吸附免疫球蛋白等物质,洗涤不彻底易影响实验结果。由此导致了血凝/…     

禽流感血凝抑制试验中应注意的一些问题

禽流感病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验(HI)。由于血凝反应可被特异性抗体所抑制，抗体与病毒结合后，血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，因此血凝抑制试验可以用于：①检涮血清中的抗体水平；②鉴定病毒；③辅助诊断病毒性疾病；④作为适时免疫的辅助手段，     

利用不同源红细胞检测鹅禽流感抗体效价的报告

从某一已免疫禽流感的种鹅场采取30份血样，分别以健康鸡红细胞悬液和健康皖西白鹅红细胞悬液为指示剂，对30份血样进行禽流感血凝和血凝抑制试验。结果：用鸡红细胞悬液作指示剂进行血凝试验，测出抗原4HAU为1：32；用鹅红细胞悬液作指示剂进行血凝试验，测出抗原4HAU为1：8以1：32倍数稀释抗原，分别用鸡红细胞和鹅红细胞悬液作指示剂进行血凝抑制试验，测出30份鹅血清禽流感H5免疫抗体效价的平均值分别为2^5.8和2^3.9；以1：8倍数稀释抗原，用鹅红细胞悬液作指示剂进行血凝抑制试验，测出30份鹅血清禽流感免疫抗体的平均效价为2^5.1。     

禽流感HI抗体测定

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的禽类的感染。鸡、火鸡、鸭、鹅和鹌鹑等家禽、野鸟、水禽和海鸟等均可感染,其发病形式多样,可表现为无致病性感染、低致病性感染和高致病性感染。红细胞血凝抑制试验(HI)是监测禽流感免疫状态的一种简便、快速的血清学方法。     

禽流感血凝抑制试验的质量控制

禽流感血凝抑制试验（HI试验）的原理是禽流感病毒在适宜的条件下对鸡的红细胞具有凝集作用,这种凝集作用可被特异性抗体所抑制,抗体与病毒结合后,可使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,红细胞将进行自然下落,利用这种特性检测血清中禽流感抗体的试验就叫禽流感血凝抑制试验。禽流感血凝抑制试验的方法是将受检血清与标定好的抗原发生充分反应,再加入红细胞作用,因为其快捷、成本较低、便于操作、能够处理大量的样品,所以成为基层动物疫病实验室对禽流感诊断及免疫状态监测的重要手段,但禽流感血凝抑制试验能否成功,影响因素很多,如果不加强质量控制,极易造成试验结果偏差,甚至误判,给禽流感的防止工作带来不便。笔者在长期的实验室检测中积累了一些经验,愿与大家分享探讨。 1试验器材的质量控制     

血凝抑制试验影响因素分析

某些病毒(如禽流感病毒和新城疫病毒)能够与禽类的红细胞发生凝集,这种红细胞凝集现象可以被特异性免疫血清所抑制,即红细胞凝集抑制试验(HI).该方法是根据病毒的血凝蛋白具有识别并吸附于红细胞表面受体的生物学特性而建立起来的.由于血凝反应可被特异性抗体所抑制,抗体和病毒结合后,血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,所以血凝抑制试验可用于:发现与鉴定病毒;诊断病毒性疾病;监测机体血清抗体水平;为免疫程序制定提供准确基础数据,防止重复免疫、免疫失败和免疫空档的发生.该方法是一种在基层临床实践中极易推广的检验、检疫手段与诊断方法.目前在血凝抑制试验方面存在一些不规范操作问题,从而影响试验结果的准确性,导致不正确结果的出现.     

水禽禽流感H5N1亚型改良HI抗体检测方法的研究

鉴于在采用1％鸡红细胞悬液作为指示细胞检测水禽血清的HI抗体效价水平过程中常出现非病毒性凝集情况,亟需要建立一种快速简便经济的适合水禽血清抗体效价检测的方法。本研究通过对未经处理与采用不同红细胞吸附处理被检水禽血清以1％鸡、鸭或鹅红细胞悬液进行测定其HI抗体效价的结果对比,结果表明建立采用1％与待检水禽血清同源1％红细胞悬液做指示细胞的改良HI试验比采用鸡红细胞悬液测定结果高1～1．5 log2,且可以有效避免非病毒性凝集情况的出现。