Enpp2基因的分子特征及其在雌性牦牛不同繁殖阶段生殖器官中的表达

为了探讨胞外焦磷酸酶/磷酸酯酶2(Enpp2)基因在母牦牛不同繁殖阶段生殖器官中的表达与定位,对Enpp2基因进行克隆,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测ENPP2在母牦牛生殖器官中的表达与定位.结果显示,Enpp2基因ORF全长2 669 bp,...     

玉米赤霉烯酮对不同时期小鼠子宫细胞凋亡及凋亡因子的影响

本试验旨在研究在饲粮中添加不同水平的玉米赤霉烯酮(ZEA)对发情前期、发情期、产仔后雌性小鼠子宫细胞凋亡及相关因子的影响。选取4周龄昆明雌性小鼠120只,随机分为4组,每组30只。选取雄性小鼠20只,随机分为4组,每组5只。7 d预试期结束后,试验分2个阶段。第1阶段,各组雌鼠分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照)、50、100、150 mg/kg ZEA的饲粮,饲喂时间是20 d。饲养试验结束后的第2、3、4天,通过阴道涂片法每组挑选出发情前期、发情期小鼠各10只,脱椎处死,摘取子宫角,用于子宫细胞凋亡原位末端标记法(TUNEL)染色和凋亡相关因子mRNA表达量的检测。第2阶段,每组剩余雌鼠与雄鼠按2∶1进行合笼,至产仔后,按上述方法采样检测。结果表明:1)发情前期凋亡细胞主要位于子宫内膜间质细胞及上皮细胞;与对照组相比,添加100、150 mg/kg ZEA极显著提高凋亡阳性表达细胞平均光密度值(P<0.01),且极显著上调半胱天冬蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、caspase-9及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2) mRNA相对表达量(P<0.01); 2)发情期细胞凋亡主要集中在子宫内膜间质细胞、子宫内膜上皮细胞及子宫腺上皮细胞;与对照组相比,随着ZEA添加水平的增加,凋亡细胞呈剂量依赖性增加(P<0.01),能够极显著上调凋亡相关基因mRNA相对表达量(P<0.01); 3)产仔后期凋亡细胞分布较为均匀;与对照组相比,添加150 mg/kg ZEA凋亡程度极显著增加(P<0.01);添加100 mg/kg ZEA能够显著上调Bcl-2、caspase-3 mRNA相对表达量(P<0.05),添加150 mg/kg ZEA能够显著上调caspase-8、caspase-9 mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,ZEA能够促进不同时期小鼠子宫细胞凋亡,并且能够上调凋亡相关基因caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bcl-2表达。     

雌性牦牛主要生殖器官中DBI的表达与定位分析

为加深对DBI基因功能的探究,揭示其在牦牛生殖生理过程中的作用.本试验采集健康母牦牛(3～6岁)繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)的卵巢、输卵管和子宫组织,共分为9组,每组设置3个生物学重复.采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白免疫印迹技术(Western blotting,WB)检测牦牛DBI在繁...     

生长激素STH对体外培养猪COCs卵丘细胞影响的研究

试验研究了生长激素（somatotropin,STH）对猪卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的卵丘细胞扩展、凋亡、凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。结果表明,STH能够促进卵丘细胞扩展,抑制卵丘细胞凋亡,抑制凋亡相关基因Bax在卵丘细胞上的表达。     

蒙古绵羊在不同季节的生长过程中Bcl-2与Bax基因在皮肤中的表达

笔者应用免疫组化s-p法,检测个不同月份石蜡包埋组织切块Bcl-2和Bax基因的表达情痀。试验结果：Bcl-2在皮肤细胞内表达情痀各个月份不同,4月和10月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与5,6,8,12月4个月份之间差异显著（P＜0.05）;5,6月和8月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与4,10,12月3个月份之间差异显著（P＜0.05）。皮肤的厚度与Bcl的表达呈正比关系。4月份起开始变薄,5-6月份为最薄。Bax在皮肤细胞内表达4,5;6,8;10,12三组组内不同月份Bax表达差异不显著（P＞0.05）,而组间表达差异均显著（P＜0.05）Bax在5-6月份Bax表达水平急剧上升（7.313%-42.813%）;在8-10月份Bax蛋白的表达水平急剧下降（32.263%-23.00%）。结论：细胞凋亡引起的蒙古锦羊毛的生长和脱落可能与Bcl-2和Bax的表达有关,并且发重要的调控作用。Bax基因表达促进细胞凋亡。     

固始鸡免疫器官内细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的动态表达

应用免疫组织化学技术和Leica 显微图像处理系统,对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在固始鸡免疫器官内的动态表达进行了研究。结果：Bax蛋白在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量不同;Bax蛋白表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜、细胞质和细胞核;Bax蛋白表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布：脾脏内不同部位均有分布,主要在动脉周围淋巴鞘、红髓、淋巴小结边缘、边缘区,很少出现在淋巴小结内;胸腺内主要分布于胸腺小叶的皮质与髓质交界处,其次是胸腺小叶髓质,极少出现于皮质;法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴滤泡间的区域,在淋巴滤泡边缘的少量淋巴细胞也有Bax蛋白表达,淋巴滤泡内极少有阳性细胞。Bcl-2蛋白在固始鸡免疫器官内的表达与Bax相似,但表达量与Bax相比较少。以上结果表明,细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,对免疫器官的稳定发挥重要作用。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体中Bcl-2和Bax表达的影响

为了探讨雌激素对垂体细胞发育和凋亡的影响,利用免疫组化SP法检测摘除卵巢及补充外源性17-β雌二醇后的不同时间大鼠垂体中Bcl-2和Bax表达的变化。结果显示：假去卵巢组（SHAM）Bcl-2和Bax的表达在不同给药时间无显著变化（P〉0.05）;同时间去卵巢（OVX）组与SHAM、去卵巢并注射17-β雌二醇组（OVX＋E2）相比,差异均显著（P〈0.05）;去卵巢给药后6周,OVX组垂体内Bcl-2的表达与之前相比有所增加,而Bax则减少,给药后8周,各组与6周后相比无显著差异（P〉0.05）;同组Bcl-2的表达随时间逐渐减少,4周后最少,Bax的表达则逐渐增加,4周后达到该组的峰值。结果表明,雌激素在垂体的结构维持和功能发挥中起一定的调节作用。     

银杏叶提取物对大鼠脾脏免疫细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

24只SD雌性大鼠随机分为假手术组(A组)、卵巢摘除组(B组)、卵巢摘除并银杏叶提取物(EGb)治疗组(C组),利用免疫组化染色检测脾脏中Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达.结果发现,B组大鼠脾脏内Bcl-2蛋白表达显著减少,而Bax蛋白表达显著增加;C组Bcl-2蛋白表达明显回升(P＜0.01),而Bax蛋白表达明显回落(P＜0.05).表明银杏叶提取物可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,改变Bcl-2与Bax的比值(Bcl-2/Bax)而维护脾脏的免疫自稳状态.     

牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析

试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因,并采用生物信息学软件进行序列分析;利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异。结果表明,牦牛Bcl-2编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高,为99.86%,其次是山羊、绵羊,同源性分别为98.41%、97.97%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。牦牛Bax基因编码区全长579 bp,编码192个氨基酸,与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高,分别为99.83%、99.48%和99.48%,其次是绵羊、马、人,同源性分别为99.14%、95.34%、94.30%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽,均为酸性不稳定的疏水蛋白。Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛（P<0.05;P<0.01）;牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛（P<0.05）,牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛（P<0.01）,子宫和垂体中显著高于黄牛（P<0.05）。表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用,牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关。     

圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表达的影响

为探讨圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织的毒性作用,采用TUNEL法和RT-PCR对染毒后脾脏细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL等凋亡相关基因mRNA表达的影响进行研究。结果表明,随着青霉酸染毒剂量的增加,脾脏组织中细胞凋亡数量逐渐增多。染青霉酸低剂量组脾脏组织中Bcl-2、Fas和FasL的表达增加,Bax表达下降,高剂量组和中剂量组中Bax、Fas和FasL表达增加,Bcl-2表达下降,说明青霉酸可能通过促使Bax、Fas/FasL表达增加和Bcl-2表达降低来诱导小鼠脾脏细胞的凋亡。     

脾虚模型小鼠肾脏中Bcl-2、Bax和Fas蛋白表达研究

目的:采用灌胃法诱导SD清洁级小鼠脾虚动物模型,造模完成后检测小鼠肾脏中Bcl-2、Fas和Bax蛋白表达的改变,并探讨其意义。方法:采用大承气汤诱导小鼠脾虚模型,H.E染色后光镜下观察肾脏局部形态,SP法检测Bcl-2、Fas和Bax蛋白在肾脏细胞中的表达。结果:脾虚组小鼠肾小球部位出现炎症,肾近曲小管和远曲小管部位出现凝固性坏死;肾脏细胞中Bax和Fas蛋白的表达率升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论:脾虚会引发肾脏发生病理变化,同时会使Bax和Fas蛋白的表达升高,Bcl-2蛋白的表达下降,增加了肾脏细胞发生凋亡的机率。     

氟对体外培养绵羊成骨细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的:探讨氟对体外培养成骨细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法:采用酶完全消化法分离2～3月龄胎羊颅盖骨成骨细胞,加入不同浓度(0～10-3mol/L)NaF,作用24h后,提取细胞总RNA并反转录成cDNA,通过实时荧光定量PCR方法,检测成骨细胞Bcl-2和Bax基因表达的变化。结果:1.0×10-5mol/LNaF组Bcl-2基因表达水平较对照组高,其他组Bcl-2表达水平均比对照组低;各NaF浓度组Bax基因表达量均比对照组高,且5.0×10-4mol/L组最高;除1.0×10-5mol/LNaF组外,Bcl-2/Bax比值均比对照组低,且5.0×10-4mol/L组最低。结论:高浓度NaF可能增加成骨细胞线粒体膜的通透性,下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA的表达,可能启动了线粒体凋亡信号转导途径。     

3-甲基-4-硝基酚对大鼠睾丸组织的损伤作用

为从病理学角度探讨3-甲基-4-硝基酚(PNMC)的生殖毒性,采用24只SPF雄性SD大鼠随机分为4组,染毒组分为100 mg/kg体重、10 mg/kg体重和1 mg/kg体重三组,连续5 d皮下注射,对照组皮下注射等量的溶剂(PBS+0.05%tween80)。最后一次染毒后24 h,无痛处死大鼠,称取睾丸湿重并计算其指数。将已固定的睾丸组织进行石蜡切片,采用H.E和免疫组化染色的方法观察PNMC对大鼠睾丸的病理损伤及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。结果显示各个染毒组与对照组相比较,睾丸大体湿重和睾丸指数明显下降(P0.05或P0.01);H.E染色结果显示各试验组睾丸曲细精管生精细胞均有不同程度的空泡变性兼或坏死;免疫组织化学染色观察发现:各实验组睾丸中Bax蛋白表达量显著高于对照组(P0.01),而Bc1-2蛋白表达量却明显低于对照组(P0.01),Bc1-2/Bax也显著低于对照组(P0.01)。研究结果表明,PNMC不仅可引起雄性大鼠睾丸曲细精管生精细胞变性、坏死,还可促进生殖细胞的大量凋亡。     

鸭腔上囊胚胎及胚后发育期凋亡相关蛋白的免疫组化分析

研究天府肉鸭腔上囊胚胎及胚后发育期Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达。将20只天府肉鸭分为4组,即24天胚龄(E24),胚后3、8、29周龄(P3、P8、P29),采用免疫组化技术。结果显示,Bcl-2、Bax、Fas、FasL在各组滤泡淋巴细胞中均有表达,FasL还表达于滤泡间上皮。滤泡皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2阳性率呈递减的变化趋势(髓质P3～8除外);皮质和髓质淋巴细胞Bax阳性率在E24～P8恒定,P29上升;皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2/Bax值呈下降趋势,但皮质在P3～8恒定,髓质在P3～8上升;滤泡皮质和髓质淋巴细胞Fas阳性率在E24～P3上升,P3～8下降,P8～29上升;皮质和髓质淋巴细胞FasL阳性率变化规律与Fas相似,但皮质在P3～8恒定。滤泡皮质淋巴细胞Bcl-2阳性率及Bcl-2/Bax值在E24～P8明显高于髓质,在P29则显著低于髓质;皮质淋巴细胞Bax阳性率在E24～P8与髓质无显著差异,在P29则明显高于髓质;皮质淋巴细胞Fas和FasL阳性率在E24～P8明显低于髓质,在P29则显著高于髓质。结果提示,Bcl-2、Bax、Fas、FasL是鸭腔上囊胚胎及胚...     

西洋参皂苷对新生鼠缺血-再灌注心肌细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨西洋参皂苷对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,及抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:利用原代培养的乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注模型;采用MTT、TUNEL法检测心肌凋亡细胞;Western blot检测caspase-3,caspase-9蛋白的表达。结果:缺血再灌注组出现心肌凋亡细胞;caspase-3,caspase-9的表达缺血再灌注组较对照组明显增加(P0.05),PQS治疗组较缺血再灌注组明显下降(P0.05)。结论:心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,PQS治疗可以显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。PQS通过抑制caspase-3;caspase-9,而抑制心肌细胞凋亡。     

雌激素对去卵巢大鼠大脑皮质和海马中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组织化学超敏SP法检测SD大鼠摘除卵巢及外源性17β-雌二醇治疗后大脑皮质和海马中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果显示,摘除双侧卵巢后,大鼠大脑皮质和海马中Bcl-2不同程度降低,而Bax的表达出现不同程度的上升,17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的表达基本恢复正常.表明雌激素能够不同程度的上调大脑皮质和海马中Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,从而对大脑皮质及海马神经元具有保护作用.     

牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的培养

分离培养牦牛输卵管上皮细胞和卵泡颗粒细胞的目的是克服体外受精中早期胚胎发育阻断,建立有利于牦牛早期胚胎体外发育的共培养体系.采集牦牛输卵管上皮细胞进行原代及传代培养,同时从卵泡液中获取颗粒细胞进行原代培养,培养过程中观察2种细胞的生长方式和形态特点.输卵管上皮细胞贴壁生长时,呈多边形,且呈单层成簇生长.培养144 h～216 h,可形成细胞单层.颗粒细胞贴壁生长时,呈现聚集生长特性,贴壁细胞形状不规则,呈放射状.培养72 h～96 h,形成颗粒细胞单层.     

枸杞多糖对双酚A暴露小鼠生精细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

研究枸杞多糖(LBP)对双酚A(BPA)暴露小鼠睾丸生精细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响.将50只成年雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D、E共5组,每组10只.除正常对照组(A组)注射等量橄榄油外,其余4组小鼠分别腹腔注射20 mg·kg 1的BPA,连续7d,建立生精损伤模型.同时C、D、E组小鼠分别灌服7d不同剂量的LBP(50、100、200 mg·kg-1),正常对照组(A组)和模型组(B组)小鼠灌服等量生理盐水.制备组织切片观察睾丸组织病理学变化,免疫组化法测定睾丸组织Caspase-3、Bax和Bcl-2凋亡蛋白的表达.结果显示,BPA可极显著增加睾丸生精细胞Caspase-3和Bax的阳性细胞数量(P＜0.01),降低Bcl-2的表达(P＜0.05).补充不同剂量LBP后,Caspase-3的阳性表达均极显著低于模型组(P＜0.01).200 mg·kg-1 LBP组生精细胞Bax的阳性细胞数量极显著低于模型组(P＜0.01);Bcl-2的表达随LBP剂量的增加而提高,其中200 mg·kg1LBP组阳性表达极显著高于模型组(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值也随着LBP剂量的增加而上升.结果表明,枸杞多糖通过调节凋亡相关基因的表达,抑制生精细胞凋亡,从而缓解双酚A引起的雄性生殖损伤.     

雌激素对大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

采用免疫组织化学超敏SP法检测摘除卵巢及用外源性17β-雌二醇治疗后SD大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果显示,摘除双侧卵巢后,SD大鼠小脑皮质及深层核团中Bcl-2的表达有不同程度的降低,而Bax的表达出现不同程度的上升;给予外源性17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的比例基本恢复正常.表明,雌激素能够下调小脑皮层及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,对小脑神经元具有保护作用.     

玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢组织Bax和Bcl-2的表达

10周龄SD大鼠单剂量腹腔注射5mg／kg玉米赤霉烯酮玉米油溶液,分别于3、6、12、24、48h时剖杀取卵巢组织,检测不同时间卵巢组织Bax和Bcl-2的表达。结果显示,病理组织学观察发现卵巢组织出现不同程度损伤,卵泡颗粒细胞发生凋亡。免疫组化SP法试验组与对照组卵巢组织中均有Bax和Bcl-2的表达,并且随着时间的推进呈现动态变化。Bax在3、6、12h时表达量上调,表达量与对照组比较差异显著（P〈0．05）,24、48h时表达量下降,与对照组比较差异不显著（P〉O．05）。3～48h卵巢组织中Bcl-2表达量与对照组比较差异不显著（P〉0．05）。结果表明,大鼠玉米赤霉烯酮中毒可引起卵巢组织的病变及颗粒细胞凋亡,且Bax在玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中起着重要作用,Bcl-2的作用不明显。