真菌性乳房炎病原菌的分离鉴定及其致病性研究

本研究针对天津地区使用多种常规药物治疗均无效的乳房炎患牛,无菌采集奶样进行真菌病原分离鉴定及致病性试验, 经鉴定其病原菌为白色念珠菌和新型隐球菌,其对试验动物具有较强的致病力。本研究结果为更好地了解天津市及周边地区奶牛感染真菌的情况,进而采取有效的防治措施提供了一定的理论依据。     

奶牛真菌陛乳房炎病原菌的分离鉴定及其致病性研究

本研究针对天津地区使用多种常规药物治疗均无效的乳房炎患奶牛,无菌采集其奶样进行真菌病原分离鉴定及其致病性试验,经鉴定其病原茵为白色念珠菌和新型隐球菌,其对实验动物具有较强的致病力.本文的研究结果为更好地了解天津市及周边地区奶牛场真菌的感染情况,进而采取有效的防治措施提供了一定的理论依据.     

微卫星引物PCR快速鉴定兔皮肤病原真菌方法的建立及应用

本研究旨在借助微卫星引物PCR和聚类分析软件,建立一种快速准确鉴定兔皮肤病原真菌的分子生物学方法.本试验以寡核苷酸重复序列(GACA)4为引物,首先对3种常见兔皮肤病原真菌(须癣毛癣菌、犬小孢子菌和石膏样小孢子菌)标准菌株的DNA进行扩增,然后用NTSYS-pc2.10软件分析其DNA指纹的多态性,并根据其多态性的差异进行鉴定分析.最后,用上述方法对临床上的分离株进行鉴定分析,并与传统的形态学鉴定方法进行比较.结果表明,3种不同的兔皮肤病原真菌均呈现不同的DNA指纹,且条带差异明显;聚类分析图显示,同种病原真菌的DNA指纹有很高的相似性(90％～100％);该方法对分离株的鉴定结果与形态学鉴定结果一致.可见,通过微卫星引物PCR结合聚类分析软件可以准确、快速地鉴定兔皮肤病原真菌.     

养鸡场供水线真菌的分离鉴定及毒性试验

为调查养鸡场供水线真菌污染状况,对哈尔滨市周边15家养鸡场供水线可疑采样进行真菌的分离、纯化,采用病原形态学法对其进行鉴定,同时测定所分离真菌的毒性。结果显示,从30份可疑采样中共分离到6株真菌,分别鉴定为黑曲霉、菌核曲霉、淡紫青霉、鲜绿青霉、扩展青霉和圆弧青霉;毒性试验提示6株霉菌均有弱毒性。     

养鸡场供水线真菌的分离鉴定及毒性试验

为调查养鸡场供水线真菌污染状况,对哈尔滨市周边15家养鸡场供水线可疑采样进行真菌的分离、纯化,采用病原形态学法对其进行鉴定,同时测定所分离真菌的毒性。结果显示,从30份可疑采样中共分离到6株真菌,分别鉴定为黑曲霉、菌核曲霉、淡紫青霉、鲜绿青霉、扩展青霉和圆弧青霉;毒性试验提示6株霉菌均有弱毒性。     

小花棘豆产苦马豆素内生真菌的筛选与鉴定

通过对小花棘豆内生真菌的分离纯化,筛选产苦马豆素内生真菌,探讨小花棘豆内生真菌与其毒性成分苦马豆素的相互关系。本研究对采自内蒙古西部草地的6份小花棘豆样品进行内生真菌分离纯化,采用薄层色谱和气相色谱技术对内生真菌发酵液进行苦马豆素定性、定量检测,筛选产苦马豆素内生真菌;结合形态学和分子生物学方法进行内生真菌种属鉴定。从小花棘豆样品中分离得到6株内生真菌。经筛选,其中有2株产苦马豆素,编号为XJ-J-I和XJ-H-1,其发酵液中苦马豆素产量分别为4.209 2mg.L-1和16.733 8mg.L-1。鉴定结果表明,这2株内生真菌虽然形态学存在差异,但基因型相同,同属镰刀属内生真菌—层出镰刀菌(Fusarium prolifera-tum)。小花棘豆中存在产苦马豆素内生真菌。     

真菌性乳房炎病原菌的分离鉴定与流行病学调查

本研究对山东省济南、泰安、临沂三地区共386份乳房炎奶样进行了真菌的分离鉴定与流行情况调查。经鉴定其病原为白色念珠菌。调查结果表明真菌性乳房炎在不同地区均有发生。个体养殖户奶牛奶样的真菌阳性率（19．3％）明显高于规模化养殖场（7．62％）；临床型乳房炎的真菌阳性率（13．11％）高于隐型乳房炎（3．75％）。本文的调查结果为更好地了解真菌在我国奶牛业的感染情况和采取有效的防治措施提供了一定的依据。     

奶牛疣状毛癣菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解奶牛皮肤真菌病的病原及其对常见抗真菌药物的敏感性,给临床治疗提供依据,从具有皮肤真菌病症状奶牛病灶处的皮屑样品中,使用沙氏培养基分离病原真菌,通过核糖体r DNA ITS序列对其分析鉴定。使用ATB FUNGUS 3真菌药敏试纸条测定5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑及伏立康唑对所分离病原真菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,在沙氏培养基上分离到的10株中心蜡状成堆、边缘"杉树状"的真菌,经ITS序列分析,鉴定为人兽共患性致病真菌——疣状毛癣菌;所分离的疣状毛癣菌对伏立康唑、伊曲康唑均为敏感,对氟康唑均为中介,而对两性霉素B及5氟胞嘧啶均为耐药;ITS序列分析可实现对真菌的快速、准确鉴定;伏立康唑、伊曲康唑对本研究中分离的疣状毛癣菌具有良好的体外抗菌活性。     

产苦马豆素真菌的筛选与鉴定

为探明青海及内蒙古多种疯草类植物及其根际土壤中是否存在产生苦马豆素的真菌,并对其种属进行鉴定,同时测定其苦马豆素产率。本试验拟对采自内蒙古和青海的疯草样品中的内生真菌及根际土壤真菌进行分离;应用薄层色谱和气相色谱法分别检测菌丝及发酵液中苦马豆素含量,筛选可产生苦马豆素的真菌;运用形态学和分子生物学方法对其属种进行鉴定。从青海采集的疯草样品中分离并筛选出2株可产苦马豆素真菌,一株为土壤真菌,一株为内生真菌,分别命名为FS-5和EFG-7;菌丝中苦马豆素含量分别为0.773和0.11 mg.g-1,结合形态学和分子生物学试验结果,确定这2株真菌分别为裂褶菌属真菌和镰孢菌(霉)属三线镰刀菌。结果显示,我国青海疯草及根际土壤中存在可产生苦马豆素的真菌。     

一株布顿大麦内生真菌的分类鉴定及生物学和生理特性研究

对来自新疆温宿县的布顿大麦采用PDA分离内生真菌,纯化后获得一株内生真菌菌株将其编号为WS1,对此菌株进行分类鉴定、生物学和生理特性研究。研究结果表明,此布顿大麦内生真菌最适生长pH范围为7～9。菌株对9种碳源利用能力不同,菌株在淀粉、甘露醇、蔗糖、山梨醇、乳糖、麦芽糖、果糖碳源上生长速度显著高于基本培养基,乳糖中孢子长宽最长(P0.05),其产孢量最多。对5种供试氮源利用能力均显著高于对照组,其中在酵母提取物和脯氨酸氮源上长势最好。在燕麦粉培养基(OMA)和海水培养基(SNA)上生长最快,在布顿大麦草粉琼脂培养基(HMA)中产孢最多。通过形态和分子的分类鉴定,此WS1菌株属于禾草内生真菌的Epichloёbromicola。     

宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离及鉴定

对宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌进行分离和鉴定,为进一步研究疯草内生真菌合成苦马豆素的分子调控机理提供菌种和奠定基础。分离并纯化黄花棘豆植物组织中的真菌,采用气相色谱质谱联用法对各菌株菌丝中的苦马豆素进行分析,筛选能产生苦马豆素的内生真菌;紫外线照射和黑暗交替培养诱导内生真菌产孢;提取真菌DNA,扩增和测定真菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GPD）、内部转录间隔区（internal transcribed space,ITS）和线粒体核糖体小亚基（mitochondrial small subunit,mt SSU）基因序列,进行同源性比对和遗传进化分析,对其进行种属分类和命名。本研究从宁夏黄花棘豆中共分离到5株真菌,其中菌株NX-FEL001菌丝中含有苦马豆素,经诱导培养,该菌株能产生分生孢子及分生孢子梗等结构;序列同源性和系统发育分析结果表明,该菌株与Undifilum真菌的亲缘关系最近,根据形态结构和分子进化分析结果将菌株NX-FEL001鉴定为Undifilum oxytropis。     

罗汉松内生真菌的抑菌活性研究

为了研究药用植物内生真菌的次生代谢产物是否具有抑菌活性,以96株罗汉松内生真菌为研究材料,将菌丝及其培养液经氯仿-甲醇抽提后,采用杯碟法测定了全部菌株的抑菌活性。罗汉松内生真菌中49%的菌株具有抑菌作用,其中菌株LHS18、LHS42、LHS67、LHS92和LHS93抽提物经100倍稀释后对金黄色葡萄球菌仍有强的抑菌作用,菌株LHS30抽提物的100倍稀释溶液对大肠杆菌的生长有强烈的抑制作用。对抑菌活性较强的6株菌根据其ITS序列相似性进行了分子鉴定。菌株LHS18和LHS42鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）,LHS92为四孢脉孢菌（Neurospora tetrasperma）,LHS30为丝枝霉（Aphanocladium sp.）,LHS67为拟茎点霉（Phomopsis liquidambari）,LHS93未能鉴定出种属。研究结果提示,罗汉松内生真菌中49%菌株具有抑菌活性,其中6株菌对动物和人类的病原菌有强列的抑制作用,是挖掘高效抑菌物质的重要资源。     

青阳参内生真菌分离与鉴定

目的:从云南民间药用植物青阳参的根、茎和叶中分离内生真菌,并进行分类鉴定。方法:利用平板分离法分离内生真菌。通过显微形态观察分类鉴定。结果:从植物根、茎和叶中共分离获得34株内生真菌,其中25株真菌经鉴定归属为5目,7科,12个属。结论:结果表明青阳参植物内生真菌存在多样性,不同部位内生真菌的数量、组成与种群分布存有差异。     

兔皮肤病原真菌的分离及其ITS序列的分析鉴定

【目的】分离发病兔场皮肤真菌病的病原,并对其ITS序列进行分析鉴定。【方法】采集病兔患病部位的皮屑、结痂进行培养,并根据形态学的特点进行鉴定;然后采用真菌ITS区通用引物对其ITS区进行PCR扩增测序,并将其ITS区序列与Gen Bank中的核酸数据库进行比对分析,确定病原真菌的生物学分类,最后对其亲缘关系进行系统发育分析。【结果】分离得到的病原真菌经形态学初步鉴定为小孢子菌属;序列比对和系统发育分析表明,该菌与Microsporum gypseum strain WCH-MG001(序列号:GU348990.1)的ITS序列具有99%的同源性,在系统发育树上也属于同一分支,从而确定该菌为石膏样小孢子菌。     

兔皮肤病原真菌的分离及其ITS序列的分析鉴定

本试验的目的是分离发病兔场皮肤真菌病的病原,并对其ITS序列进行分析鉴定。采集病兔患病部位的皮屑、结痂进行培养,并根据形态学的特点进行鉴定;然后采用真菌ITS区通用引物对其ITS区进行PCR扩增测序,并将其ITS区序列与GenBank中的核酸数据库进行比对分析,确定病原真菌的生物学分类,最后对其亲缘关系进行系统发育分析。结果显示:分离得到的病原真菌经形态学初步鉴定为小孢子菌属;序列比对和系统发育分析表明,该菌与Microsporum gypseum strain WCH-MG001(序列号:GU348990.1)的ITS序列具有99%的同源性,在系统发育树上也属于同一分支,从而确定该菌为石膏样小孢子菌。     

奶牛乳房炎白色念珠菌的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在了解宁夏地区奶牛真菌性乳房炎的发生情况,为诊断和治疗真菌性奶牛乳房炎提供有效依据。采集宁夏周边地区各奶牛场使用抗生素治疗无效的乳房炎奶样,对奶样中的真菌进行分离鉴定,并对分离菌进行生物学特性研究。通过选择性培养基从乳房炎奶样中获得真菌,进一步应用生物化学和分子生物学手段鉴定出样品中的真菌为白色念珠菌。通过溶血性、磷脂酶活性及产膜等方面的研究,证实其具有不同毒力,分离菌株对试验动物有较强的致病性。同时,采用药敏纸片法对分离株进行药敏试验,结果显示,菌株对临床常用抗生素耐药,对临床常用抗真菌药物敏感。结果表明,宁夏地区真菌性乳房炎奶样中分离出的致病菌均为白色念珠菌,感染率为43%,分离株具有较强的毒力,对常用抗生素耐药,对抗真菌药物和中药敏感。     

露蕊乌头内生真菌的分离与鉴定

为探明甘肃露蕊乌头内生真菌的种类与种群分布情况,对甘肃天祝的露蕊乌头样品采用表面消毒法进行内生真菌分离,用形态学和ITS序列分析技术对分离得到的菌株进行种属鉴定,并通过MEGA5.05软件进行系统进化分析。结果表明,露蕊乌头内存在丰富的内生真菌,从其茎、叶、根、花和种子中分离得到的内生真菌共33株,经过鉴定,分别属于2纲、3目、3科、4属;总相对分离频率为93.94%;内生真菌对叶的侵染频率最高,茎次之,种子最少;青霉属(Penicillium sp.)在露蕊乌头植株内相对分离频率最高,是露蕊乌头内生真菌的优势菌种,且在上述组织内均存在,分布最广泛;将所得到的菌株使用MEGA 5.05软件作系统进化分析,可根据亲缘关系远近分为种群Ⅰ、种群Ⅱ和种群Ⅲ。试验结果可丰富乌头属植物内生真菌的种群多样性,也为后续露蕊乌头内生真菌的次生代谢产物研究奠定基础。     

土传病原真菌及其生防细菌的分离鉴定

采用平板稀释涂抹法从甘肃农业大学草坪实训基地土壤分离得到18株真菌分离物,按照菌落形态特征将其归类为5种真菌并编号为GSAF1、2、3、4和5,通过黑麦草离体组织和皿内幼苗接种土传真菌分离物,明确了3种土传病原真菌GSAF1,4和5,根据其形态特征将它们分别鉴定为链格孢属(Alternaria sp.)、立枯丝核菌(Rhizotonia solani)和镰孢属(Fusarium sp.)。共从土壤中分离得到12株细菌分离物,编号为ZSR20-ZSR32,采用皿内拮抗法筛选到3株拮抗细菌,分别为ZSR26,30和32菌株,其中菌株ZSR30的抑菌能力略高于菌株ZSR32,对3种土传病原真菌的抑菌率均高于30%,对立枯丝核菌的抑菌率达36.2%;ZSR32菌株对3种病原真菌也有一定的抑菌作用;ZSR26对3种土传病原真菌的拮抗抑菌作用较低,抑菌率均小于20%。结合形态学和16SrDNA分子鉴定方法,初步将ZSR26,30和32均鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。     

ITS序列分析在常见动物皮肤癣菌分类鉴定中的应用

皮肤癣菌病是一种常见于动物的浅表性真菌性皮肤病,其病原真菌种类繁多,在兽医临床中对病原真菌进行准确的种属鉴定具有重要意义.内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)作为非编码区域,一般在种内高度保守,在不同真菌种间则具有序列多态性.分析ITS序列可将真菌鉴定到种水平,在动物皮肤癣菌的...     

草坪草真菌病害的研究进展

综述了国内外主要草坪草上的真菌病害的种类及在我国发生的真菌病害数量、真菌鉴定的方法、病原与寄主互作及病害预测预报,及国内外对草坪草真菌病害防治方法的研究进展,并提出草坪草真菌病害研究存在的一些问题。