烟粉虱基因组DNA快速提取方法

以B型烟粉虱为材料,应用改进的方法-氯仿/异戊醇抽提法提取了高质量单头烟粉虱基因组DNA。该方法不仅可用于成虫基因组DNA的提取,对烟粉虱拟蛹及卵同样具有较高的提取效果;同时,该方法操作简便、快捷,较常用的醋酸钾抽提法节省时间3～4h,提高工作效率2.5倍。     

Sorhum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中7个近似种的种子为试验材料，采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TakaRa dNA提取试剂盒等4种方法提取DNA，并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较。结果表明：采用Moiler方法对其7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法。     

菟丝子属5个种的种子DNA微量提取方法比较

本研究以Cuscuta属中5个种的种子为实验材料,分别采用CTAB、SDS、Moller与TaKaRaDNA提取试剂盒这4种方法提取DNA;并对不同方法所提取DNA的纯度、DNA质量浓度、DNA提取率进行比较分析。结果表明：用SDS的方法对Cuscuta属5个种的种子DNA的提取为最佳方法。     

一种球蚧类蚧虫基因组DNA的提取方法

本研究针对一类虫体膨大,体壁硬化,革质化或木质化的球蚧类蚧虫开展了全基因组提取方法的探讨,特别是在材料的选择和前处理过程两个关键环节进行了新的尝试,并通过目前文献报道的SDS、CTAB、TES、NaCl和TNES法进行了随后的基因组提取,运用1%琼脂糖凝胶电泳、DNA OD值测定和特定基因的PCR扩增对基因组的提取效果进行了检测,结果表明,无论是冷冻保存还是75%酒精固定液-4℃保存的球蚧样本均可用于DNA提取,选择球蚧体壁作为提取材料要比整头虫体效果好,前处理采用在少量提取缓冲液中剪碎样品的方法获得的基因组机率大,纯度高、条带整齐无拖尾,同时也证实CTAB法更适合该类蚧虫基因组的提取。     

桃蚜基因组DNA提取及SSR反应体系优化和应用

针对蚜虫体型微小,体表有外骨骼等特点对改进的醋酸钾（KAC）法作了优化,优化后的方法可在常温条件下更加简易和有效地提取高质量的单头蚜虫基因组DNA,结果表明,DNA样品的A260/280值普遍在1.6～1.9之间,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。同时在20 μL的反应体系中将PCR的5个主要成分分别设定10个浓度梯度,研究了适合桃蚜SSR分子标记的优化体系,结果表明,最适宜的优化浓度分别为：1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,1.0U Taq酶,40 ng/μL模板DNA,25 ng/μL引物。利用甘肃省酒泉地区马铃薯桃蚜来验证此优化体系,30%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物大多在100～300 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。     

一种改进的水稻总DNA的快速提取方法

植物总DNA的提取质量是植物分子生物学操作成败的关键,一个优秀的总DNA提取方法往往可以达到事半功倍的效果.本文以水稻叶片为材料,提出了一种改进的植物叶片总DNA快速提取方法,该方法能在35min之内提取到水稻总DNA.电泳结果表明此改进方法提取的总DNA产量与传统CTAB法相当,PCR扩增结果表明其质量可靠,完全可以满足分子生物学操作的要求.     

改进型线虫分离器分离线虫及计数方法比较

改进型线虫分离器(见参考文献1)集"贝尔曼漏斗法"和"浅盘分离法"的优点于一体,保证了一次分离较大量的样品.当被分离样品内线虫数量较多时,通常采用收集10mL线虫分离液做样品定量计数时会丢失很多线虫.为了在植物线虫检疫的实际工作中更准确分离计数线虫,我们对使用改进型线虫分离器线虫分离计数方法进行了比较试验.以确证分离器的分离效率.     

松材线虫组DNA条形码筛选

本文基于Gen Bank中登录的14种松材线虫组线虫的28S、18S和ITS部分基因DNA序列,利用遗传距离法及分子生物学方法评价其各自作为松材线虫组DNA条形码序列的适用性。结果显示,28S(拟松材线虫不分亚种)、28S(拟松材线虫分亚种)、18S和ITS的基因序列种内成对遗传距离平均值分别为0.0071、0.0030、0.0007、0.0043,种间成对遗传距离平均值分别为0.0476、0.0454、0.0052、0.1556,其中28S、18S基因序列种内及种间距离存在一定程度的重叠,ITS具有一定程度的Barcoding gap。3个基因序列构建的NJ进化树显示,28S、ITS构建的系统进化树具有较高的节点支持率,可以有效将14个松材线虫组线虫分离成独立分支,而且28S可以有效鉴别出拟松材线虫的2个亚种;基于18S基因构建的进化树不能对吉拉尼伞滑刃线虫、日本冷杉伞滑刃线虫、拟松材线虫进行有效区分。因此,28S、ITS区具有一定的遗传距离间隔以及相对较高的物种识别率,可以作为松材线虫组线虫候选条形码基因。     

蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化

为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化。结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择。STE法优化条件为:用30 μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5 μL 20 mg/mL蛋白酶K,于56 ℃水浴1.5 h;再加入0.1 μL 10 mg/L RNA酶,于37 ℃培养1 h,95 ℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20 ℃保存或直接用于PCR扩增。优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法。     

我国南方地区主要根结线虫DNA变异的RAPD分析

 本试验用5组随机引物对来自我国南方地区的30个根结线虫种群进行RAPD分析,并从中筛选出多态性较好的引物12个。共扩增出179条DNA多态带,各供试种群间存在着丰富的遗传多态性。扩增结果表现出种间差异大于种内差异的共同趋势,这表明上述12个引物能够较客观地反映种群间亲缘关系的远近。北方根结线虫与另外3种线虫(南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫)的亲缘关系最远;在3种主要根结线虫中,爪哇根结线虫与南方根结线虫的亲缘关系相对较近。基于种群间的相似系数分析和应用UPGMA法构建的聚类树状图,显示出不同的根结线虫在较低的相似性系数范围聚类,而绝大多数种内的不同种群均以较高的相似性系数聚在一起,这与形态分类基本一致,反映了形态学分类的分子遗传本质,同时也表明了应用RAPD技术进行根结线虫亲缘关系分析和种类鉴定具有合理性和可行性。本文还对RAPD方法对南方根结线虫小种鉴定的可能性进行了初步探讨。     

剪股颖粒线虫幼虫形态与分子检测方法

剪股颖粒线虫(Anguina agrostis)是牧草、草坪上的重要线虫,该线虫在进口草籽中常以幼虫形态出现,与其它粒线虫属幼虫形态相似,很难快速鉴定到种.本实验通过对单条幼虫DNA进行提取和PCR扩增,获得其rDNA的ITS区域,测序后与基因库中的剪股颖粒线虫的rDNA的ITS区域序列进行比较,其结果与基因库中编码为AF396343.1的核酸序列吻合,从而鉴定为剪股颖粒线虫.此外,还使用5种限制性内切酶对PCR产物进行了酶切,获得了剪股颖粒线虫的ITS-RFLP指纹图谱.     

一种提取荒漠拟步甲昆虫基因组DNA的新方法

昆虫基因组DNA的提取是研究昆虫功能基因的关键环节。一些荒漠昆虫个体较小,不易除去的外壳会造成多糖污染,用普通动物组织DNA提取方法效果不佳。通过紫外分光光度测定、凝胶电泳检测、PCR反应及限制性酶切分析表明,CTAB-NaCl法是一种适用于拟步甲科小个体昆虫提取基因组DNA的好方法,蛋白质、多糖及RNA影响很低,完全能够满足后续DNA研究的需求。与传统方法相比简便快速,且成本低,尤其适用于拟步甲科昆虫DNA的分离。     

一种牧草种子中粒线虫虫瘿的快速分离方法

为实现牧草种子中粒线虫虫瘿的快速分离,本文采用一种快速分离法进行分离。结果表明:该快速分离方法与直接挑取虫瘿法相比,虫瘿检出率无明显差异,工作时间由平均25 min降低至5 min,大大节省了虫瘿分离时间。本方法成本低廉,操作简便,适用于牧草种子中粒线虫虫瘿的日常检测。     

甘肃陇南重要生产品种‘中梁27’抗条锈特点分析及其利用价值

运用比较形态学、同工酶和 mtDNA-PCR 对采自海南岛9个市县的南药根结线虫进行种类鉴定,结果发现有南方根结线虫、象耳豆根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫和西班牙根结线虫等5种根结线虫危害海南岛南药。5种根结线虫均能在海巴戟上寄生与危害,而南方根结线虫寄主非常广泛,可危害大多数调查的药用植物。     

北京口岸进境苗木线虫检出分析

近年来,北京口岸多次从进境苗木中检出植物病原线虫。本文对北京口岸线虫检出情况进行分析,总结了线虫疫情的特点,并提出加强进境苗木检疫监管的工作建议。旨在为提高口岸对进境苗木的检疫监管、降低检疫性线虫传入风险提供参考。     

光照对松材线虫病潜育期的影响

应用相关回归方法，分析了黑松接种松材线虫后，病害的潜育期与环境中的日平均温度、日平均日照时数的关系。结果显示，病害潜育期与日平均温度呈显著负相关，与日平均日照时数呈显著负相关。     

山东泰安春秋季节大棚番茄根内根结线虫的发育及动态

于2008年秋季和2009年春季对‘毛粉’和‘金丰盛世’2个番茄品种采用网袋法收集根系,酸性品红-次氯酸钠法染色,体视显微镜下检测,记录根内各龄期根结线虫数量和形成的根结数。结果表明,单位鲜根重线虫数量在2008年温度低时,随番茄生长有下降趋势,2009年春季温度升高时则上升,2个供试品种单位鲜根重线虫数无显著差异(P0.05);2008年秋季J2到J3,J3到J4的发育时间均长于2009年,根部形成根结的数量变化趋势相同;当土壤平均温度为15℃时,根结线虫在番茄根内完成第1个世代需32d,25℃时为24d。     

Molecular diagnostic key for identification of single juveniles of seven common and economically important species of root-knot nematode (Meloidogyne spp.)

A molecular protocol is presented for distinguishing seven of the most common and economically important Meloidogyne spp. DNA was extracted from individual second-stage juvenile (J2) nematodes of Meloidogyne spp. and amplified by PCR (polymerase chain reaction). Fifteen PCRs including amplification of rDNA, specific SCAR (sequence characterized amplified region) and RAPD (random amplified polymorphic DNA) fragments were possible from the extracted DNA. This enabled a molecular diagnostic key for M. incognita , M. javanica , M. arenaria , M. mayaguensis , M. hapla , M. chitwoodi and M. fallax to be designed. The key unifies published methods into a single logical schematic using primer combinations that were previously validated and shown to work reliably and specifically. The protocol can be used with single juvenile or adult nematodes and the schematic can readily be expanded to accommodate more species. The use of RAPD amplification to assist with identification of samples which do not yield diagnostic amplification products after the first three steps of the molecular key is also described.