荧光增白剂对Cry1Ac抗感棉铃虫围食膜的影响及增效作用

为了提高Bt的杀虫活性,运用扫描电镜、SDS-PAGE电泳和生物测定技术,研究了荧光增白剂FB28对棉铃虫Cry1Ac抗性和敏感品系围食膜的影响及对Cry1Ac杀虫蛋白的增效作用。结果表明,正常棉铃虫围食膜表面光滑致密,没有空洞和缝隙。用含1%FB28的人工饲料饲喂刚蜕皮的5龄棉铃虫幼虫2 h后,抗感棉铃虫围食膜表面均出现许多空洞,且敏感棉铃虫的空洞明显大于抗性棉铃虫;随着处理时间的延长,围食膜上的空洞逐渐变小,13 h后恢复正常。用1%FB28离体或活体处理抗、感品系棉铃虫,均可造成围食膜蛋白被降解。用1%FB28与Cry1Ac杀虫蛋白混合饲喂抗、感棉铃虫初孵幼虫,可明显提高棉铃虫的死亡率,且对抗性品系的增效作用明显大于敏感品系,对敏感和抗性品系棉铃虫的增效比分别为2.23和9.34;1%FB28还可以明显增加对抗、感品系3龄棉铃虫幼虫的生长抑制作用。     

荧光增白剂对苏云金芽孢杆菌毒力的增效作用及其缈外防护功效

测试了3种荧光增白剂Tinopal LPW,VBL和JD－3对苏云金杆菌杀虫剂杀棉铃虫初孵幼虫毒力的影响，并检测了荧光增白剂VBL作为佐剂在Bt受紫外线照射的兴保护功效。结果表明，这3种二苯乙烯类光增白剂以10g/kg与Bt复配后的LC50值与不加荧光增白剂的Bt的LC50值相比，其增效比值分别为：1．23、1．49和2．00。说明这3种荧光增白剂对Bt杀铃虫的活性有不同程度的增效作用。而且复混剂（10g/kg荧光增白剂VBL＋Bt）在紫外线处理8h后，其杀虫活性仍保持70％以上，说明了荧光增白剂VBL是Bt一种好的光保护剂，能提高Bt抗紫外线的能力。     

棉铃虫围食膜中Bt抗性相关蛋白的分离与鉴定

棉铃虫是世界性的重要农业害虫。围食膜作为昆虫抵御病原微生物入侵及有害物质的第一道天然保护性屏障,其上可能存在与Bt抗性相关的受体蛋白。本研究以Bt Cry1Ac抗性和敏感品系的棉铃虫围食膜为对象,采用NuPAGE电泳技术、配体杂交、质谱鉴定和生物信息学分析等技术,测定了围食膜蛋白含量,鉴定了蛋白质的组成及与Bt Cry1Ac毒素的结合能力。结果表明敏感品系围食膜中蛋白含量为22.19%,抗性品系围食膜中蛋白含量为26.99%。抗、感品系棉铃虫围食膜上存在与Cry1Ac毒素结合的6个差异蛋白,推测其中棉铃虫羧酸酯酶蛋白和血影蛋白是2个有意义的抗性相关蛋白,2个新蛋白可能参与Bt抗性。研究证明棉铃虫围食膜上存在Bt结合蛋白且与抗性相关,为进一步明确Bt抗性机制、制定合理的Bt抗性治理策略提供了理论依据。     

昆虫病毒重组增效蛋白的广谱增效活性

室内生物测定表明 ,大肠杆菌表达的粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白P96可显著或极显著提高棉铃虫核型多角体病毒、苏云金杆菌和阿维菌素对棉铃虫幼虫的致死率 ,分别提高1 6 9.78%、73.90 %和 36 .0 4 % ;对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒感染甜菜夜蛾幼虫也有明显增效作用。Na2 CO3 溶解的P96对棉铃虫初孵幼虫有一定致死作用。     

几种增效剂的增效作用机理研究

以敏感和抗性棉铃虫为试虫,比较测定了ＤＥＦ、ＰＢＯ、ＳＶ１和Ｓ２对氰戊菊酯的增效作用。结果表明,四种增效剂对抗菊酯类药剂的ＫＱＲ棉铃虫具有明显或显著的增效作用,而对于相对敏感的ＨＤＳ棉铃虫,它们的增效作用均比对抗性棉铃虫的弱,甚至没有增效作用。增效作用强度与棉铃虫抗性水平及主导抗性机制有关。生化分析表明,ＰＢＯ和ＳＶ１是通过直接抑制多功能氧化酶系（ＭＦＯ）的某种单加氧酶（如甲氧试卤灵－Ｏ－脱甲基酶     

Bt与硫丹、氟铃脲对棉铃虫的联合作用

通过室内和田间试验，研究了Bt与硫丹、氟铃脲对棉铃虫的联合作用。结果表明：(1)Bt与硫丹无论以何种比例相混，对敏感品系和氰戌菊脂中抗品系均增效。(2)Bt与氟铃脲只有以1:60相混才明显增效；Bt中加入少量氟铃脲和氟铃脲中加入少量Bt则明显拮抗。（3）Bt与硫丹和氟铃脲混用，明显加快了2龄幼虫的死亡速度，混剂在处理后第3d，死亡率便明显高于Bt，而与硫丹或氟铃脲单用接近。（4）田间试验中，Bt和硫丹的混剂显著增效，Bt与氟铃脲的混剂在药后4d表现出一定的增效作用，但药后7d明显拮抗。     

棉铃虫对久效磷抗性的毒理学机制

就棉铃虫田间种群对久效磷抗性的毒理学机制进行了研究。久效磷对敏感品系和高抗品系的乙酰胆碱酯酶抑制率存在显著差异,在同等剂量浓度下,对敏感品系的抑制率为７３．４８％,对高抗品系的抑制率仅为５９．６７％,说明棉铃虫对久效磷产生高水平抗性与乙酰胆碱酯酶不敏感性有关。在不同田间抗性品系中,ＰＢＯ和ＴＰＰ对久效磷均具有明显的增效作用,增效比分别为５．６～２３．４倍和２．９～４．６倍;而相应地ＢＰＯ和ＴＰＰ对     

棉铃虫抗溴氰菊酯品系选育、生化机理及遗传方式研究

用溴氰菊酯选育抗性水平中等的河北冀县棉铃虫,经5代4次筛选获得一抗性品系(Del—R),抗性倍数由筛选前F_1代的52.8倍上升到筛选后F_5代的585.9倍(与1983年东台敏感品系相比)。利用此抗性品系进行增效剂(PBo、TPP、DEF)的活体增效作用测定和离体的酶活力研究,无论是对田间品系还是实验室选育的抗性品系,PBo对多功能氧化酶(MFO)的抑制作用是明显的,增效比从3.0—16.5不等,DEF、TPP的增效比分别为2.7和1.0。Del—R品系的多功能氧化酶环氧化活力(AE)是敏感品系的1.5倍,而Del—R品系的酯酶活力是敏感品系的1.01倍,因此多功能氧化酶活力增强是棉铃虫对溴氰菊酯产生抗性的原因之一,酯酶和羧酸酯酶在棉铃虫对溴氰菊酯的抗性中无多大作用。采用剂量对数-死亡机率值(LD—P线)分析法,将棉铃虫对溴氰菊酯的抗性品系和室内培育的敏感品系进行正交、反交和回交试验,得到的抗性遗传研究结果表明,棉铃虫对溴氰菊酯的抗性为常染色体多基因不完全显性遗传。     

Bt抗性和敏感棉铃虫钙黏蛋白及氨肽酶N1表达量的比较

棉铃虫体内的钙黏蛋白（CAD）和氨肽酶N1（APN1）是Bt的主要作用靶标,两种受体蛋白的变化也是棉铃虫对Bt产生抗性的主要原因。本文利用实时荧光定量PCR技术比较了Bt抗性和敏感棉铃虫CAD和APN1的表达量变化,分析受体蛋白表达量变化与抗性的关系。结果表明,与敏感品系相比,抗性品系棉铃虫CAD和APN1的表达量明显降低,1、2龄幼虫的差异达到极显著。在敏感品系中,CAD和APN1的表达量随龄期的增加呈现“V”字形变化,1、2龄幼虫的表达量最高,3、4龄时显著降低,到5龄时表达量又有所增加。抗性品系中CAD和APN1的表达量提前降低,与表达量最高的1龄幼虫相比,2、3龄时表达量显著降低,到4、5龄时又略有回升。说明棉铃虫中肠钙黏蛋白、APN1表达量的下降与抗性相关,且不同龄期棉铃虫幼虫表达量不同。     

Bt杀虫蛋白对棉铃虫的抗虫毒力和增效作用

用 Bt杀虫蛋白 (ICP) Cry1A汰选的棉铃虫 (H elicoverpa armigera)抗性种群和同源对照种群分别测定了 4种不同类型 Bt ICP的抗虫毒力。结果表明 :4种杀虫蛋白对对照种群的毒力顺序为 :Cry1Ac>Cry1Ac+ 1C>Cry2 A>Cry1C;对抗性种群的毒力顺序为 :Cry1Ac+ 1C>Cry1Ac>Cry2 A>Cry1C,其中Cry1Ac+ 1C表现出对抗性种群有显著的协同增效作用。采用从 Bt液体发酵上清液中提取的增效粉 ,与Cry1Ac以 1∶ 1和 1∶ 2的比例混合 ,对 Cry1Ac有显著的增效作用 ,用抗性种群测定的增效比值明显大于对照种群 ,处理 5d的增效比值大于 14d的     

利用Bt预处理缓解不同龄期棉铃虫的抗药性

用一定剂量的Ｂｔ制剂处理不同种群,不同发育期的棉铃虫、２４ｈ后测定它们对氰戊菊酯的反应。结果表明,不管是抗性种群还是敏感种群,棉铃虫经Ｂｔ预处理后与未处理对照相比,都表现为２－４龄幼虫的敏感性明显提高,而卵,初卵、１龄末幼虫敏感性变化不明显,ＤＥ－Ｒ种群敏感性变化幅度〉９６ＨＮ－Ｒ种群〉ＹＺ－Ｓ种群;以ＹＺ－Ｓ为第三偌线比较９６ＨＮ－Ｒ种群和ＤＥ－Ｒ种群的抗性倍数变化,发现卵和１龄幼虫经Ｂｔ预自理     

Regional reversion of insecticide resistance in Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae) is associated with the use of Bt cotton in northern China

A continuous programme for monitoring resistance of Helicoverpa armigera (Hubner) to commonly used insecticides was undertaken for assessing the impact of Bt cotton planting on the evolution of the pest resistance from 1994 to 2002 in China. The bioassay results showed that the resistance levels per year in field populations of H armigera to lambda-cyhalothrin, phoxim and endosulfan decreased, respectively, to 9-15-fold, 11-14-fold and 6-8-fold in 2001-2002 from 197-262-fold, 52-74-fold and 18-38-fold before the cultivation of Bt cotton in 1997. This significant increase in susceptibility to insecticides is expected to result in a reduction in insecticide application for H armigera control in Bt cotton. It is concluded that Bt cotton is playing an important role in the long-term management of H armigera by increasing the potential for natural and chemical control of the pest.     

抗Bt棉铃虫种群的交互抗性研究

分别用对CyrlAc抗性达11．6倍的Bt棉叶和Bt粉剂（Btk)汰选棉铃虫（Heliocoverpa armigera)种群（对Btk的抗性指数为5．2倍）,测定了其对不同Bt制剂,Bt毒素,化学农药的交互抗性,结果表明：停止汰选后,Bt棉叶汰选种群对CrylAc的抗性指数为5．9倍,对CrylAc 1C的交互抗性为3．7倍,对Btk的敏感性降低,对Bta,Cry2A无交互抗性,Btk汰选种群对Btk的抗性指数为4．1倍,对Bta,CrylAc,CrylAc 1C的交互抗性为2．3,3．1,2．3倍,对Cry2A无交互抗性,两汰选种群对化学农药灭多威,辛硫磷,氯氰菊酯的敏感性均有所增加。     

棉铃虫抗药性监测及其化学防治

1997～1998年,用浸叶接虫法测定了山西省南部棉区永济县棉铃虫对常用5种农药的抗药性,同时进行了多种农药防治棉铃虫田间药效试验研究。结果表明,永济县棉铃虫对氯氰菊酯已产生了高等水平的抗药性,对久效磷产生了中等水平的抗药性,但对灭多威仍未产生明显的抗药性。水胺硫磷、甲基对硫磷、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、丙·辛乳油和甲对·氯乳油等农药防治永济县二代棉铃虫效果较好     

棉铃虫对Cry1Ac抗性的稳定性及其对适合度的影响

为明确棉铃虫Helicoverpa armigera（Hübner）对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis（Bt）Cry1Ac毒蛋白抗性的稳定性及其适合度变化,利用生物测定的方法研究了Cry1Ac抗性品系棉铃虫转到正常饲料饲养后的抗性衰退及再次筛选后抗性的恢复情况,并比较了敏感、抗性和抗性衰退后各品系间的适合度差异。在失去选择压的情况下,高抗品系棉铃虫对Cry1Ac的抗性迅速衰退,经过4代后抗性水平由最初的3626.67倍下降到1436.67倍;到第12代时抗性水平已低于10倍,随后品系保持较稳定的低抗水平;当重新进行抗性再筛选时,其抗性水平可快速恢复,抗性倍数快速回升,5代后恢复到1123.33倍。与敏感品系相比,高抗棉铃虫品系的适合度明显降低,相对适合度仅为0.33,但转到正常饲料连续饲养14代后,棉铃虫适合度明显上升,相对适合度为0.87,主要表现为卵孵化率和幼虫存活率等显著提高。     

Resistance to synthetic pyrethroids in the bollworm,Heliothis armigera from Andhra Pradesh,India

Helio this armigera collected in October 1987 from Juzzuru in the coastal cotton growing district of Krishna in Andhra Pradesh (Eastern India) were highly resistant to cypermethrin and fenvalerate and moderately resistant to endosulfan. Prior to this, in 1986, H. armigera in the Hyderabad area were resistant to DDT but not to pyrethroids or endosulfan. By late 1987 these latter populations were highly resistant to pyrethroids and mildly resistant to endosulfan. Concurrently, the resistance to DDT increased. It is suggested that resistant moths from the east coast migrated downwind in a northwesterly direction with the prevailing winds which occur at that time of year. The level of pyrethroid resistance in H. armigera infesting pigeon-pea and chick-pea fields around Hyderabad increased steadily up to March 1988. These results are discussed with special reference to the resistance mechanisms likely to be involved.     

棉铃虫Bt毒素受体蛋白—氨肽酶N与抗性的关系

随着我国转基因棉花种植面积的日益增加,主要目标害虫—棉铃虫的抗性问题越来越被大家所关注。氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一类昆虫中肠内Bt毒素的受体蛋白,其结构、结合位点的改变或基因突变可能是昆虫对Bt毒素产生抗性的重要原因。本文通过分析Bt毒素的作用方式,从生化、生理、分子生物学等方面探讨了棉铃虫Bt毒素受体蛋白APN与抗性的关系。