产抗菌蛋白芽孢杆菌的筛选及抗菌蛋白性质

对小麦赤霉病菌（ＪＦ－１２）有拮抗作用的７６个芽孢杆菌菌株中有３０个能产生抗菌物质。根据无细胞培养滤液对氯仿和热处理的稳定性将３０个菌株分成三类。属于类型Ｉ的１４个菌株中，Ｂ３、Ａｎｔ－２７和Ａｎｔ－６４的抗菌物质可以被８０％饱和度硫酸铵沉淀，不能通过透析膜。Ｂ３的粗提抗菌蛋白对胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和ＲＮＡ酶均不敏感；在ｐＨ５．０￣１０．０范围内，抑菌活性与对照无显著差别；热处理（６０℃／３０ｍｉｎ     

抗不同生化型青枯菌的生防菌筛选鉴定及其活性分析

为更好地利用生防菌控制青枯病危害,从不同地区的土壤中分离到569株细菌菌株,筛选到3株对5种不同生化型青枯劳尔氏菌Ralstonia solanacearum具有较强拮抗活性的菌株,其中菌株BS2004的拮抗活性最强。以BS2004的菌悬液为对照,分别测定无菌滤液、蛋白酶K及高温热处理后拮抗物质抑菌活性的变化。结果显示,蛋白酶K及高温热处理后,该菌的抑菌活性显著降低,表明其主要抑菌成分为蛋白类物质。在设施栽培条件下用生防菌BS2004菌悬液处理番茄植株,能有效控制番茄青枯病的发生,防治效果达66.75%,同时还发现,重新分离得到的青枯菌菌体数明显受到生防菌的抑制。通过对BS2004的形态、生理生化特征、脂肪酸鉴定、16S rDNA序列等进行分析,该菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。     

解淀粉芽胞杆菌MH71抗菌物质理化特性及对番茄灰霉病菌的抑菌活性

解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens MH71是一株高效广谱拮抗活性菌株,明确该菌株发酵液中活性物质的理化特性和抑菌活性,为解淀粉芽胞杆菌生物农药开发应用奠定坚实的基础。本研究在对菌株MH71抑菌活性物质理化特性研究的基础上,以番茄灰霉病菌为供试致病菌,探究了抗菌活性物质对番茄灰霉病菌的抑菌作用;采用酸沉淀和硫酸铵沉淀分别获得脂肽类和蛋白类活性物质,SDS–PAGE电泳和HPLC分别对活性物质进行检测。该菌活性物质具有较强的耐热性和pH适应性,100 ℃处理60 min和121 ℃处理30 min后抑菌活性分别为原有活性的88.98%和79.60%,在pH 3～11时均有抑菌活性,且对紫外线、蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶不敏感。该抗菌活性物质对番茄灰霉病菌菌丝的毒力测定结果表明,不同浓度发酵液处理的番茄灰霉病菌菌丝呈现出较多局部膨大或溢缩等异常菌丝。其发酵液经酸沉淀法得到抗菌脂肽类活性物质,经硫酸铵沉淀法得到抗菌蛋白,脂肽类的抑菌活性高于抗菌蛋白类物质,SDS–PAGE电泳检测,得到约40 kD的蛋白条带,HPLC检测表明该抗菌物质中有surfactin存在。     

青稞散黑穗病拮抗菌LN-176的分离鉴定、发酵条件及发酵产物的研究

从西藏佩古错湖湖边的土壤中分离到一株对青稞散黑穗病菌具有较强抑制作用的细菌,经鉴定为多粘芽孢杆菌,命名为LN-176。该菌株对多种植物病原真菌、部分革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌有较好的拮抗作用。以10%的接种量将该菌接种到初始pH7.0的发酵培养基中,28℃旋转培养,发酵液在84h时抗菌活性达到最高,且具有较好的热稳定性和pH稳定性,对蛋白酶K有一定的耐受性。LN-176菌株的发酵液在260nm和280nm下进行吸光度测定,结果表明发酵液中蛋白质含量明显升高;发酵液经硫酸铵盐析后,取上清液和沉淀物分别做抗菌试验,发现沉淀物对青稞散黑穗病菌有拮抗活性而上清液无活性。     

拮抗菌B-FS06的鉴定及其发酵产物对黄曲霉的抑制作用

从油菜地分离到一株细菌B-FS06，其表现出对黄曲霉的拮抗作用。根据该细菌的理化性质、微观结构及16SrDNA序列的进化树分析，鉴定菌株B-FS06为枯草芽孢杆菌。细菌发酵液经20％、40％、60％、80％硫酸铵饱和度分级沉淀均表现出抑制黄曲霉活性。采用96孔板法测得该菌胞外蛋白粗提液对黄曲霉的最低抑菌浓度为31．2μg／ml。蛋白粗提液经121℃高压灭菌20min后对黄曲霉抑制率为91．3％。     

短短芽孢杆菌A57菌株对棉花主要病原真菌的拮抗作用及其最佳液体发酵条件

研究了分离自棉花根际土壤的短短芽孢杆菌A57菌株对棉花立枯病菌、枯萎病菌和黄萎病菌的拮抗作用,在PDA平板上对峙培养,平均抑制率分别是33.5%、39.5%、29.5%。通过显微镜观察,发现拮抗细菌的主要拮抗机理是通过产生拮抗物质能够造成病原真菌菌丝体断裂、扭曲、畸形,抑制分生孢子的萌发,造成孢子畸形。以枯萎病菌为指示菌,研究了该菌株表现最佳拮抗活性时的菌液发酵条件,结果表明,A57适宜培养基为LB培养基,pH8,好气条件下抑菌活性最好。用硫酸铵沉淀法提取A57菌株的粗提蛋白,对供试的病原菌仍具有较高的拮抗活性,70%浓度时其拮抗活性最大,A57粗提蛋白对枯萎病原菌的最大抑制率为23.7%,同时该菌经硫酸铵沉淀后获得的粗体蛋白的上清液对病原指示菌仍具有一定的拮抗活性,说明A57拮抗细菌起拮抗作用的不仅有大分子蛋白类物质还有小分子拮抗物质。     

拮抗芒果炭疽病菌的红树内生细菌筛选及AiL3菌株抗菌物质研究

采用对峙生长法测定了24株红树内生细菌对芒果炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides不同菌株的拮抗作用,其中来自老鼠簕Acanthus ilicifolius叶片的菌株AiL3拮抗效果较好,对芒果炭疽菌3个菌株的抑菌带均大于10mm。该菌株对辣椒疫霉Phytophthora capsici、黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum等8种植物病原菌亦有较强的拮抗作用。菌株培养滤液经有机溶剂萃取和硫酸铵沉淀分析发现,硫酸铵沉淀物具有抑菌活性;沉淀物经蛋白酶K和胃蛋白酶作用后,拮抗作用消失,说明菌株AiL3产生的抗菌物质是蛋白类物质。该蛋白对热和酸碱稳定、对紫外线不敏感。     

禾谷镰刀菌拮抗菌Bacillus amyloliquefaciens AX-3的分离鉴定及拮抗物质的鉴定

禾谷镰刀菌Fusarium graminearum可引起小麦赤霉病，该病严重威胁我国小麦的质量安全。本研究从生物防治的角度出发，分离筛选拮抗菌，研究拮抗菌的拮抗特性和拮抗能力。试验采用系列稀释法和平板对峙法从小麦样品中分离筛选获得禾谷镰刀菌拮抗菌AX-3，根据16S rDNA基因、gyrB基因序列构建的系统发育进化树以及生理生化特性结果，菌株AX-3被鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。通过平板对峙法测定拮抗谱，结果显示AX-3对多种镰刀菌属病原真菌都具有良好的拮抗特性，抑菌圈半径为17~32 mm，表明AX-3具有广谱的拮抗性能。采用柱层析及制备液相色谱法对AX-3中的拮抗物质进行分离纯化，然后使用高分辨质谱及核磁共振的方法对拮抗物质进行结构鉴定表明，解淀粉芽胞杆菌AX-3产生的一种抗菌物质为macrolactin A。     

一种促进植物根系生长的极细链格孢菌蛋白质分离、纯化和生物功能

通过硫酸铵沉淀、有机溶剂沉淀、离子交换和分子筛连用的方法，从极细链格孢菌JH505菌株中分离纯化到分子量约为35kD的植物激发子。利用固相梯度凝胶双向电泳方法测定了该蛋白的等电点为4．22。将该纯化蛋白稀释液浸泡小麦种子8h，7d后小麦根系琥珀酸脱氢酶活性提高65．27％，经蛋白处理的小麦根长比对照提高13．1％。     

拮抗细菌菌株BC98-I对青椒枯萎病菌的抑制作用

拮抗细菌菌株BC98-I是从沤肥浸渍液中分离筛选到的一株对青椒枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum具有强烈抑制作用的蜡质芽孢杆菌。菌含量为5.0×108 cfu/mL的该拮抗菌发酵液在平皿上对青椒枯萎病菌的抑制率为91.7% ±0.5%;该发酵液经高温高压灭活后对青椒枯萎病菌仍有抑制作用,抑制率为58.3% ±2.2%。经硫酸铵沉淀从发酵液中粗提到对青椒枯萎病菌具有抑制作用的拮抗蛋白粗提物,经孔碟法试验表明,浓度从5 ~60 mg/mL的粗提物对病原菌的抑菌圈直径达12 ~27 mm。显微观察显示:拮抗蛋白粗提物可造成青椒枯萎病菌菌丝异常;对孢子的抑制作用主要表现为孢子萌发产生的芽管短,部分芽管膨大形成大泡囊。该拮抗蛋白对热、蛋白酶、氯仿稳定;耐酸碱,对紫外线和离子强度部分敏感。     

委内瑞拉链霉菌RL-2活性产物对植物病原真菌的抑制作用及其作用机制

为了探明委内瑞拉链霉菌RL-2在植物病害生物防治中的应用价值,在离体条件下采用生长速率法、活体条件下采用盆栽法研究了RL-2活性产物对多种植物病原真菌的抑制作用。结果表明:在离体条件下,RL-2活性产物对供试的7种病原真菌均有较强的抑制作用,其中对稻瘟病菌的抑制作用最强,EC50为5.35mg/L;在活体条件下,不仅能阻止专性寄生的黄瓜霜霉病病原菌菌丝入侵,而且对已侵入的菌丝有很好的治疗效果。电镜观察结果显示,RL-2活性产物强烈抑制病原菌菌丝生长和孢子萌发,引起菌丝膨大和畸形、孢子萌发率降低、萌发孢子芽管畸形。此外,经RL-2活性物质处理的病原菌接种寄主植物后,其致病性减弱、病斑扩展减慢。     

两株对辣椒疫霉菌有拮抗作用的拮抗菌分泌蛋白的研究

用平板对峙生长法筛选到两株对辣椒疫霉菌具有较强拮抗作用的细菌,经鉴定为芽孢杆菌属。测定了无菌滤液的抑菌活性及两菌产生拮抗物的热稳定性。用硫酸铵沉淀法提取到对辣椒疫霉菌有拮抗作用的抗菌蛋白。发酵条件的研究表明,用Ｇ培养基、ｐＨ７、培养３２小时,ＸＡ１、ＸＦ１能产生具有较强拮抗作用的拮抗物。     

抑制镰刀菌生长的土壤拮抗菌的筛选

通过对不同作物根际土壤的处理，分离纯化出９２株细菌，从平板对峙培养和菌液对致病镰刀菌的抗生作用实验结果中，进一步筛选出１２株对三种致病镰刀菌生长有抑制作用的拮抗菌。     

园林菟丝子生防真菌的筛选研究

首次从大花菟丝子感病藤茎上分离到半裸镰孢、腐皮镰孢、细交链孢和茶褐斑拟盘多毛孢等４种病原真菌。室内致病性试验结果表明这４种真菌均能使日本菟丝子和大花菟丝子感病而死,致病力由强到弱的顺序是：腐皮镰孢、半裸镰孢、茶褐斑拟盘多毛孢和细交链孢。     

梨火疫病菌拮抗细菌FX1培养基及摇瓶发酵条件优化

贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis FX1是从新疆库尔勒香梨生产区果蔬天然酵素发酵液中分离筛选出的对梨火疫病菌Erwinia amylovora具有较强拮抗作用的菌株。为提高其抑菌活性物质的产量和防病效果，本研究以平板抑菌活性和发酵液活菌浓度作为检测指标，采用单因素试验、Plackett-Burman试验和响应曲面法对培养基成分（碳源、氮源、无机盐）及摇瓶发酵条件（温度、转速以及初始pH）进行筛选和优化，确定FX1菌株的最适培养基和发酵条件。结果表明，FX1的最适培养基为：玉米淀粉10.0 g/L，酵母膏25.1 g/L，KH₂PO₄0.5 g/L，MnSO₄0.001 g/L；最适发酵条件为初始pH 7.0，转速150 r/min，温度30.9 ℃，装液量100 mL/500 mL，培养时间48 h。优化后FX1菌株活菌数可达1.53×10⁹ CFU/mL，抑菌圈直径可达26.6 mm，相比优化前分别增加了3.10倍和1.32倍。苹果离体花序的防效试验结果显示，喷施FX1菌体发酵液、无菌发酵滤液和脂肽类物质粗提取液能显著降低花腐率（P＜0.05），对梨火疫病的保护性防效分别可达68.53%、71.47%和76.30%，均高于优化前。研究结果为贝莱斯芽孢杆菌FX1菌剂的开发及其在梨火疫病生物防治中的应用提供了依据。     

杀菌剂对水稻种子表面拮抗细菌的影响

从水稻种子表面分离获得２７０个细菌分离物,其中９２个菌株对水稻恶苗病病原菌具有拮抗作用。用拮抗菌Ｐ－９１和Ｂ－９１６处理水稻种子,秧苗株高比对照有明显的增高。通过杀菌剂和拮抗细菌对水稻恶苗病防治作用结果的比较,表明施保克、浸种灵和Ｂ－９１６对恶苗病有较好的防效;菌虫清不仅防效差,而且对水稻种子表面的拮抗细菌有破坏作用。     

蕃茄根土区系中拮抗性细菌的分布与青枯病发生的关系

对番茄植株根土区系中桔抗菌数量的研究表明，重病田健株根土区系中拮抗菌数量占总分离菌数的比例最大，为８．２％，其中根围拮抗菌的分离频率高于根际与根表，但多数来源于根围的菌株其拮抗作用易丧失，而报表来源的菌株拮抗作用不易丧失。所分离的拮抗菌（９３．２％）属于产芽孢的细菌。     

生物防治水仙叶大褐斑病拮抗菌株的鉴定

从福建漳州湖乡水仙大田水仙根际分离并筛选到对水仙叶大褐斑病有明显拮抗作用的菌株ＣＳ５、ＣＳ５１、ＣＳ１２１。通过个体形态、培养特征、生理生化特性研究,将它们分别鉴定为拮草芽孢杆菌（ＣＳ５）、蜡质芽孢杆菌（ＣＳ５１）,荧光假单孢菌（ＣＳ１２１）、３朱细胞的ＤＮＡ Ｇ＋Ｃ摩尔百分比分别为４３．７％、３９．１％、和６６．８％。     

灰葡萄孢拮抗细菌的筛选

采集扬州、淮阴两地１６种常见植物根部土壤、根和叶片样本１８２份,分离纯化后得到细菌６３２株,抑菌圈法测定对灰葡萄孢有拮抗性的５８株,拮抗性稳定的１３株。其中拮抗性最强的Ｙ２－１１－１菌株为芽孢杆菌,抑菌圈直径达２９．７ｍｍ。接种试验表明,Ｙ２－１１－１以番茄叶片和果实灰霉病的防效分别达６８．７％和７５．０％。部分菌株对其他重要植物病原真菌也有一定的拮抗作用。