棉花内生真菌CEF-373菌株对棉花黄萎病的防效及其作用机理

为明确棉花内生真菌CEF-373菌株对棉花黄萎病的防效及其作用机理,利用圆盘滤膜法和平板对扣培养法测定菌株CEF-373对大丽轮枝菌Verticillium dahliae菌丝生长的抑制作用,测定其对棉花黄萎病的温室和田间防效,并通过活性氧含量及防御基因表达情况来分析其作用机理。结果表明,菌株CEF-373的挥发性代谢产物和非挥发性代谢产物对大丽轮枝菌菌丝的生长均有显著抑制作用,抑制率最高分别可达37.75%和100.00%。用1×107CFU/mL的菌株CEF-373分生孢子悬浮液灌根后,对棉花黄萎病的温室防效可达71.12%,用质量比为3%的菌株CEF-373固体菌剂拌土栽培后,对棉花黄萎病的温室防效可达62.74%,防治作用显著。菌株CEF-373的发酵液滴灌和微生物肥料处理40 d后,对棉花黄萎病的田间防效达到最大,分别为36.23%和27.71%,而在后期有所降低。菌株CEF-373可以诱导棉花叶片中细胞活性氧的爆发;且菌株CEF-373成功激活了苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、几丁质酶和病程相关蛋白基因PR10的表达,对大丽轮枝菌的侵染具有抵御作用。表明棉花内生真菌CEF-373菌株通过抑制大丽轮枝菌生长以及诱导寄主系统抗病性来有效防治棉花黄萎病,具有较好的生物防治应用前景。     

不同有机改良剂对棉花黄萎病的防病作用及其机制

在盆栽和小区试验条件下研究了8种不同有机改良剂对棉花黄萎病的防治效果。结果表明:盆栽试验中以几丁质对棉花黄萎病的防效较好,在现蕾期和收获期防效分别达80.39％和72.28％;豆秸粉和绿肥次之,两个生育期防效分别为65.19％、60.02％和62.90％、55.67％。小区的试验结果与盆栽试验结果基本一致。有机改良剂处理土壤后,根际微生物数量显著增加,而且对黄萎病菌具有抑制作用的根际真菌和放线菌的比率都明显高于对照。有机改良剂的浸出液对病原菌的微菌核萌发及菌丝生长都有不同程度的抑制作用。     

利用土壤拮抗性微生物防治棉花枯萎病

从棉株根围土壤中分离到２００多株土壤微生物。通过土壤微生物－棉枯萎病菌平板对峙培养,筛选出抑菌效果较好的７个菌株,即绿色木霉Ｔ－０３,芽孢杆菌Ｂ－０１、Ｂ－０３,放线菌Ａ－０３、Ａ－０６、Ａ－０７、Ａ－１９。用上述７个土壤拮抗菌进行棉花枯萎病田间小区防效试验的结果表明,Ｔ－０３对棉花枯萎病的防效最高,达７６．５％;４个放线菌株的防病效果在６０．５％～６５．１％之间,其中Ａ－０３对棉花出苗有一定抑制作用;Ｂ－０１、Ｂ－０３的防效分别是３６．４％和５４．０％。     

棉花GhRAR1基因调控棉花抗黄萎病机理的研究

棉花黄萎病是一种严重影响棉株生长的土传维管束真菌病害。挖掘抗性基因,解析抗病机制,对创制棉花抗病种质防御棉花黄萎病具有重要意义。本研究从抗病棉花品种‘中植棉2号’中获得GhRAR1基因,采用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术、基因过表达及qRT-PCR技术探究GhRAR1介导的棉花抗黄萎病机制。结果表明,GhRAR1的表达受棉花黄萎病菌诱导。GhRAR1沉默棉株对黄萎病菌敏感性增强,表现为植株病情指数升高、叶片萎蔫、茎部维管束组织褐变加重。GhRAR1沉默棉株中活性氧(ROS)生成基因GhRbohD表达量低,H₂O₂积累量少。过表达GhRAR1基因的拟南芥植株对棉花黄萎病抗性增强,AtRbohD表达量高,H₂O₂积累量多,发生过敏反应(HR),菌丝扩散被抑制。推测GhRAR1可能调控ROS积累和HR,从而介导棉花对黄萎病菌的抗性。     

4株拮抗细菌对棉花黄萎病的防治效果及机制

棉花黄萎病严重制约新疆棉花持续高产和稳产,拮抗细菌在棉花黄萎病生物防治中潜力巨大。本研究旨在明确4株拮抗细菌对棉花黄萎病的防治效果及其机制,为棉花黄萎病的生物防治提供理论依据。本文采用共培养法,研究4株拮抗细菌对黄萎病菌分生孢子浓度、菌丝和孢子形态、膜透性和产毒素能力的影响,采用滤液接种法进行盆栽试验验证其对棉花黄萎病的防治效果,采用愈创木酚法和氮蓝四唑光化还原法测定棉株体内防御酶系的活性。结果表明,4株拮抗细菌能够减少黄萎病菌分生孢子浓度,破坏其细胞形态,导致其细胞膜破裂,降低其毒蛋白浓度。接种4株拮抗细菌,能够诱导棉株体内POD酶和SOD酶等防御酶系的积累,提高了棉花的抗病能力,由菌株SHZ-24、SHT-15、SMT-24和BHZ-29处理的棉花,其对棉花黄萎病的最高防治效果分别为73.82%、80.48%、84.91%和84.18%。4株拮抗细菌通过抑制黄萎病菌的生长和诱导植物产生防御反应来提高对棉花黄萎病的抗性,其对棉花黄萎病具有良好的防治效果。     

多元混菌培养对棉花黄萎菌拮抗效果的研究

特基拉芽胞杆菌C-9和鞘氨醇杆菌A1是分离得到的2株对棉花黄萎菌具有较好生防效果的菌株,平板对峙试验测定菌株C-9与A1的抑菌率分别为77.8%和83.3%,根据脂肽类抗生素相关合成基因序列进行PCR扩增,2株生防菌都能检测到surfactin、fengycin和mycosubtilins相关基因片段。通过单因素试验对液体混菌培养体系进行初步筛选,得到对棉花黄萎菌具有较好防效的最佳混菌比例A1：C-9=1：9,在此比例下的混菌培养物对棉花黄萎菌的抑制能力较单菌株A1和C-9提高了131%和36.7%。镜检发现混菌培养物抑制可致黄萎菌菌丝发生膨大畸形。盆栽试验表明,混菌培养物对棉花黄萎病的防治效果可达66.7%,混菌培养物处理的棉花在挑战接种棉花黄萎菌后,棉花体内防御酶系CAT酶活快速响应,在达到峰值时比同时期的CK组增加了135.3%。POD和SOD的基础酶活较CK分别提高22.5%和39.8%,且MDA含量始终低于CK。综合分析表明,混菌发酵可提高菌株对黄萎菌的抑制效果,可通过直接抑制黄萎菌生长和诱导植物产生防御反应来提高对棉花黄萎菌的抗性。     

植物土传病原菌拮抗细菌的筛选与鉴定

从作物根际土壤中分离到1056株细菌，筛选出7个具有较强拮抗活性的菌株。室内测定对水稻纹枯病菌、辣椒疫病菌、瓜果腐霉、油菜菌核病菌、棉花枯萎病菌、茄根腐病菌、棉花黄萎病菌、番茄青枯病菌、甘蓝黑腐病菌等重要土传病原菌有较强拮抗作用；温室盆栽试验对番茄青枯病表现出较好防效，其中以BOH2和OH11效果较为明显，防效分别为90．9％和86．4％。通过形态观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析，确定OH11为产酶溶杆菌。BOH3为荧光假单胞菌，其余5个菌株为不同芽孢杆菌。     

化学农药对棉花黄萎病菌和生防菌的选择毒性

研究了11种化学农药对棉花黄萎病菌和生防菌的选择毒性。对棉花黄萎病菌CV-1的毒力测定结果表明，浓度100μg／g具明显抑制效果的有多菌灵、苯菌灵、甲基硫菌灵和粉锈宁；5000μg／g下具抑制作用的有菌核净和五氯硝基苯。苯并咪唑类杀菌剂对绿色木霉LTR．2的毒性最高，多菌灵、苯菌灵和甲基硫菌灵的EC50值依次为0．7395、1．6784和0．7370μg／g。多菌灵、苯菌灵和甲基硫菌灵对黄萎病菌的最低抑制浓度分别为0．7、2．3、2．6μg／g；对LTR-2最低抑制浓度分别为1．2、3．4、6．4μg／g。多菌灵对几种生防真菌的毒性选择性比值（TSR）介于1～10之间的有LTR-2、2-②、Tc、Tk7a、GLR，分别为4．6、3．1、4．7、1．2和7．3，为正向调控作用；介于10～100之间的有Sxb，其TSR为27．5，为中度选择性；大于1000的有菌株T9，其TSR值为9145．0，为强烈正向调控作用。苯菌灵的TSR值介于1～10之间的有Sxb、2-②、Tc、Tk7a、GLR，依次为2．8、3．9、5．6、4．5和4．7；介于10～100之间的有LTR-2和1、9，其TSR为13．7和66．5；没有大于100的生防菌菌株。     

克萎星对棉花黄萎病的防治效果

克萎星可溶性粉剂是河南省濮阳农业科学研究所研制生产的防治棉花黄萎病的新农药，田间药效试验结果表明：克萎星防治棉花黄萎病，发病初期叶面喷施，防效71．7％～100％，最佳施用浓度500～1000倍液，间隔期7～10d,棉花安全。     

青枯菌无致病力菌株对烟草青枯病的控病作用初步研究

从茄子、番茄、辣椒、烟草青枯病株中分离出116株无致病力青枯菌,室内平板喷雾法拈抗试验结果表明,有21株菌在NA培养基上可明显抑制青枯菌TbRs的生长;烟草MSK326品种温室盆栽控病试验表明,Tnljdl-3和Aujd8—2—1两株菌具有较好控病效果,20d后的相对防效分别为58．4％和97％。