南方、爪哇和花生根结线虫的快速灵敏的PCR鉴定方法

 为了研制南方、爪哇和花生根结线虫快速灵敏的检测和鉴定方法,分别分离了4个南方根结线虫和3个爪哇根结线虫特异性的随机扩增多态性DNA (RAPD)片段。在这些RAPD标记DNA序列的基础上,设计了多对SCAR PCR引物,并用源于国内外的南方、爪哇、花生、北方和象耳豆根结线虫群体验证其扩增特异性和灵敏度。最终确定了3对高效扩增的SCAR引物,它们组合使用可以可靠灵敏地鉴定南方、爪哇和花生根结线虫。3对引物的扩增灵敏度达1/3条的二龄幼虫、雄虫或雌虫,这表明本研究研制的PCR鉴定法可用于生产实践中土样和根样中3种根结线虫快速灵敏的鉴定。     

根结线虫种群的线粒体DNA分析

 在同工酶和形态学鉴定的基础上,利用引物#C2F3和#1108对42个根结线虫种群线粒体DNA (mtDNA)中的COⅡ和LrRNA间区域进行特异性PCR扩增,35个种群的扩增产物约为1.7kb,其中29个是南方根结线虫,6个是爪哇根结线虫;3个花生根结线虫种群的扩增产物约为1.1kb;1个种群的扩增产物约为0.7kb,为根结线虫属在中国的新记录种;3个北方根结线虫种群的扩增产物约为0.5kb。用单条2龄幼虫提取物作模板得到的结果与大量提取DNA作模板的结果相同。为了区分产生相同大小片段的南方根结线虫和爪哇根结线虫,用限制性内切酶HinfⅠ对扩增产物进行酶切,结果表明:所有供试的南方根结线虫都可以被HinfⅠ酶切,且产生约1.3和0.4kb的2个限制性片段;但供试的爪哇根结线虫种群不能被酶切。由此表明,利用mtDNA PCR及酶切实验可以作为快速而准确地鉴定常见根结线虫的方法。     

4种常见根结线虫基因组DNA的RAPD分析

 用120个随机引物对4种常见根结线虫10个小种和类型进行了全基因组随机扩增DNA多态性(RAPD)分析,筛选出的11个适宜引物共扩增出91条RAPD谱带,86条是多态性谱带,占总谱带的94.5%;OPL12、OPK01对4种根结线虫种及其小种扩增的谱型有明显的特异性。聚类分析显示在种间水平上4种根结线虫中花生根结线虫和爪哇根结线虫亲缘关系最近,遗传距离为0.532,北方根结线虫与另外3种根结线虫的亲缘关系最远,平均遗传距离为0.786;种下水平上同种根结线虫的不同小种和类型间存在不同程度的遗传差异,南方根结线虫4个生理小种间,花生根结线虫2个生理小种间亲缘关系较近,爪哇根结线虫2个酯酶谱带类型间,北方根结线虫2个细胞生物学小种间遗传差异较大。在RAPD技术的基础上探索根结线虫分类鉴定的分子方法有着良好的前景。     

成都平原水旱轮作田常见根结线虫调查

调查四川省成都平原地区水旱轮作田根结线虫发生情况及种类分布,为水旱轮作田根结线虫的防治提供依据。对成都平原15个县(市、区)28个乡(镇)共159块水旱轮作田的土样进行根结线虫普遍率调查,利用线虫ITS通用引物和8对根结线虫特异性引物对其中检出率高的地区重新采集的土样进行根结线虫种类分子鉴定。结果表明,成都平原水旱轮作田根结线虫平均检出率为40.25%。重新采集的土样共鉴定出5种根结线虫:拟禾谷根结线虫Meloidogyne graminicola、花生根结线虫M. arenaria、南方根结线虫M. incognita、北方根结线虫M. hapla和爪哇根结线虫M. javanica,各线虫的检出率分别为40.91%、34.09%、13.64%、13.64%和2.27%,其中29.55%的样品由2种以上根结线虫混合侵染。拟禾谷根结线虫和花生根结线虫为该地区优势种群。     

象耳豆根结线虫的PCR鉴定和检测方法

 象耳豆根结线虫是一种在中国具有潜在经济重要性的农作物病原物。为提供有助于控制象耳豆根结线虫传播扩散的方法,研制了该线虫的快速PCR鉴定和检测法。该方法PCR引物的扩增目标为rDNA-IGS2区域,其设计依据象耳豆根结线虫与南方、爪哇、花生和北方根结线虫在该区域核酸序列的差异。通过对6种近似根结线虫的不同地理群体及自然土壤线虫群体的测试,验证了设计的PCR引物针对象耳豆根结线虫的特异性和可靠性。本方法具有快速灵敏的特点,可用于象耳豆根结线虫单条线虫的直接鉴定以及混合土壤线虫群体中象耳豆根结线虫的检测。     

我国南方地区主要根结线虫DNA变异的RAPD分析

 本试验用5组随机引物对来自我国南方地区的30个根结线虫种群进行RAPD分析,并从中筛选出多态性较好的引物12个。共扩增出179条DNA多态带,各供试种群间存在着丰富的遗传多态性。扩增结果表现出种间差异大于种内差异的共同趋势,这表明上述12个引物能够较客观地反映种群间亲缘关系的远近。北方根结线虫与另外3种线虫(南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫)的亲缘关系最远;在3种主要根结线虫中,爪哇根结线虫与南方根结线虫的亲缘关系相对较近。基于种群间的相似系数分析和应用UPGMA法构建的聚类树状图,显示出不同的根结线虫在较低的相似性系数范围聚类,而绝大多数种内的不同种群均以较高的相似性系数聚在一起,这与形态分类基本一致,反映了形态学分类的分子遗传本质,同时也表明了应用RAPD技术进行根结线虫亲缘关系分析和种类鉴定具有合理性和可行性。本文还对RAPD方法对南方根结线虫小种鉴定的可能性进行了初步探讨。     

芹菜根结线虫病的为害及其防控对策

对福建省龙岩市新罗区芹菜根结线虫病原进行了调查鉴定。结果显示,新罗区芹菜根结线虫包括南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)和花生根结线虫(M.arenaria)。其中,南方根结线虫为优势种群。测定了根结线虫病对产量的影响,根结严重度达4级以上可以引起显著的产量损失;提出了对芹菜根结线虫病的防控对策。     

用PhastSystem电泳仪快速鉴定根结线虫种类

 应用瑞典Pharmacia Biotech.公司开发的全自动快速水平电泳仪(PhastSystem)进行酯酶和苹果酸脱氢酶电泳,对云南省烟草和观赏植物一串红上的根结线虫进行快速鉴定,得出4种根结线虫:花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)、爪哇根结线虫(M.javanica)、南方根结线虫(M.incognita)和北方根结线虫(M.hapla)。文章提供电泳方法,认为PhastSystem电泳仪是根结线虫种类快速鉴定的理想设备。     

西南部分地区荞麦根结线虫种类与地理分布

近年来,随着我国荞麦面积的迅速增加,根结线虫病呈逐年加重趋势,严重影响了荞麦的产量与品质。本研究于2014年对西南10个地区17个乡镇秋播苦荞麦根结线虫的分布、发生种类以及危害程度进行了调查。结果表明,西南地区危害荞麦的根结线虫种类有南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)和花生根结线虫(M.arenaria)3种,其中南方根结线虫为优势种群。田间根结线虫种群大多数为单一种群,23.5%的样品为南方根结线虫与爪哇根结线虫(或花生根结线虫)组成的混合种群。调查发现前作为烟草或马铃薯的地块,荞麦根结线虫发生危害严重,平均被害株率为6.0%~77.5%,病情指数为1.4~26.1,而前作为玉米的荞麦根结线虫则较轻,被害株率最高为16.0%,相应病情指数为2.3。     

海南省蔬菜根结线虫发生种类与分布

2014年-2018年, 对海南省蔬菜根结线虫病害进行了田间随机采样调查和病原种类分子鉴定?结果显示, 蔬菜根结线虫病在海南18市县均有发生, 且大部分旱田连作地块病株率达到80%以上?进一步对采集的295份根结线虫样本种类进行了分子鉴定, 共鉴定出象耳豆根结线虫?南方根结线虫和爪哇根结线虫3种病原种?其中, 象耳豆根结线虫单一检出率达到62.37%, 南方根结线虫单一检出率为23.39%, 爪哇根结线虫的检出率仅为5.76%, 象耳豆根结线虫和南方根结线虫复合侵染检出率为8.47%?除五指山市样本以外, 海南其余17市县样本均检测到象耳豆根结线虫侵染为害?本研究显示象耳豆根结线虫为海南省蔬菜上的优势病原根结线虫种类, 该结果对指导品种布局?制定根结线虫病害的防治策略具有重要意义?     

Distribution analyses of Meloidogyne spp. and Pratylenchus coffeae sensu lato in coffee plots in Costa Rica and Guatemala

The distribution of the plant-parasitic nematodes Pratylenchus coffeae sensu lato and Meloidogyne spp. were studied in two plots, one in Guatemala ( P. coffeae and M. paranaensis ) and the other in Costa Rica ( P. coffeae and M. exigua ). The quantity of nematodes per g fresh weight root were counted for each coffee tree sampled. The distributions were aggregated, and generally fitted well to negative binomial distributions. Population aggregation was greater when a smaller number of nematodes were involved, suggesting that initial colonization develops in foci. Analyses of the relationships between population levels of the species suggested that there was competition between Pratylenchus coffeae and Meloidogyne spp. This competition was expressed differently depending on the relative population density of the different species.     

植物抗根结线虫机制研究进展

近年来,植物抗根结线虫机制研究已成为线虫研究领域的热点之一。本文主要从植物对根结线虫病的抗性结构、抗性基因、坏死反应以及相关酶类等方面的机制研究进展作一综述与展望。     

Screening of common bean (Phaseolus vulgaris) for resistance against temperate root-knot nematodes (Meloidogyne spp.)

BACKGROUND: An important part of the production area of common bean (Phaseolus vulgaris L.) in Belgium is located on the sandy soils of the provinces of Antwerp and Limburg where Meloidogyne chitwoodi (Golden), M. fallax (Karssen) and M. hapla (Chitwood) are present. The host plant status of ten bean cultivars for root‐knot nematodes was determined by evaluating penetration, development and egg mass formation after inoculation with second‐stage juveniles. RESULTS: The tested cultivars were poor to good hosts for M. chitwoodi, non‐hosts or bad hosts for M. fallax and excellent hosts for M. hapla. Significantly fewer M. fallax were found in the roots, and their development was delayed. Penetration of M. hapla took place over a longer period than that of M. chitwoodi and M. fallax. The number of mature females of M. chitwoodi in cv. Polder 6 weeks after inoculation was no different from that in other cultivars, although fewer egg masses were found on this cultivar in the screening test. There was no influence of M. chitwoodi on vegetative growth of cv. Polder. CONCLUSION: The differences found in host plant status of bean cultivars stress the importance of a correct diagnosis of the Meloidogyne species in agricultural fields. Cultivar Polder showed potential as a trap crop for M. chitwoodi. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

粗茎秦艽根结线虫病的病原鉴定

粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.是一种重要的中药材, 近年来根结线虫病发生严重?为明确粗茎秦艽根结线虫病病原种类, 对其病原线虫进行种类鉴定, 以期为该病的防治提供理论依据, 采用雌成虫?2龄幼虫?会阴花纹形态特征及形态测量值进行形态学鉴定, 结合分子鉴定方法(比对rDNA-ITS和mtDNA-COⅠ序列?构建系统进化树, 序列特异性扩增区段比对)对病原线虫进行种类鉴定?结果表明, 该病原线虫雌成虫和2龄幼虫形态特征及测量值与北方根结线虫Meloidogyne hapla极为相似; 该病原线虫rDNA-ITS序列和mtDNA-COⅠ序列均与NCBI数据库中登录的北方根结线虫相似性达100%; 采用北方根结线虫特异性引物, 该病原线虫能扩增出1 500 bp的特异性条带, 与北方根结线虫特异性条带大小相同?上述结果表明, 云南省丽江市鲁甸乡粗茎秦艽根结线虫病的病原为北方根结线虫, 为首次发现北方根结线虫危害粗茎秦艽, 研究结果为进一步制定有效防治策略提供了理论依据?     

九叶青花椒根结线虫病的病原鉴定

为确定四川省蓬溪县九叶青花椒种植区发病植株花椒根结线虫的种类, 进而为九叶青花椒根结线虫病防治提供依据, 本文根据根结线虫雌虫与2龄幼虫的形态特征及雌成虫的会阴花纹、雌虫酯酶同工酶图谱, 并结合特异性扩增及rDNA-ITS扩增, 根据ITS序列构建系统发育树, 对该地区九叶青花椒根结线虫病的病原进行了种类鉴定。结果表明该病原为南方根结线虫Meloidogyne incognita (Kofold & White) Chitwood。这是我国首次在九叶青花椒上发现南方根结线虫。     

云南河口香蕉黄化束顶病研究:Ⅰ.症状与发病规律

 作者通过连续六年的田间定点调查与研究认为发生在云南河口及其邻近县市香蕉上的黄化束顶病不同于已往记载的BBTV所致的香蕉束顶病。病株新抽叶短小、窄、叶缘失绿黄化或整叶白化;假茎外表面紫红色;果穗从假茎中不能或部分抽出;根部着生根结。病株地上部发病高峰表现在植株进入快速生长而原根系已腐烂、新根尚未形成的春季,而夏末秋初为根结形成高峰。健株根围接种根结线虫后表现典型的黄化束顶症状。田间增施氮肥加重发病,香蕉宿根年限越长病情愈重。连作地、熟地、旱作地分别较轮作地、荒地以及低洼稻作地的发病率高。部分病株进入雨季或移植长期隔置的香蕉土壤中能恢复正常生长。病害的自然传播与土壤密切相关。     

U.l.v. Application of Bioresmethrin by Helicopter for Musca Control in Saudi Arabia

Abstract

A six hundred hectare township in Saudi Arabia was sprayed by a Micronair equipped helicopter with approximately 11 g of bioresmethrin in 550 ml solvent per hectare, applied in the early morning, on one occasion only, in order to evaluate the technique for fly control. The kill of caged wild flies (Musca domestica nebulo F.) in the open was complete. However, sticky traps and Scudder grill counts indoors indicated only 69% and 72% reduction of fly density. Although coverage by aerial application was found to be accurate, penetration into such areas as covered markets was poor, and therefore the method can only be recommended as an adjunct to ground based operations.     

生防链霉菌JH108-2的发酵培养基优化

 为了提高链霉菌菌株JH108-2的发酵滤液对植物寄生线虫的毒力,采用正交试验设计,优化其发酵培养基。使用优化培养基[大豆粉20g、(NH₄)₂SO₄ 6g、蛋白胨3g、葡萄糖40g、酵母粉6g,NaCl 2g、K₂HPO₄ 0.6g.CaCO₃ 2g、蒸馏水1000mL、pH 6.0]所得的发酵滤液,稀释10倍,处理南方根结线虫(Meloidogyne incognita)二龄幼虫,24h后校正死亡率达95.4%,比对照培养基的发酵滤液所产生的校正死亡率高6.9%,差异达到极显著水平(P=0.01)。