生防菌株HL29的鉴定及其抑菌活性研究

 从形态、生理生化、16S rRNA三个方面确定了HL29的分类地位。光学显微镜下观察到菌体为杆状细胞,革兰氏染色均匀,并可见芽孢染成蓝紫色。扫描电子显微镜进一步观察到细胞壁外带有厚薄均一的黏质层,可见椭圆型芽孢,无伴胞晶体。生理生化测定结果表明,HL29在各项测试中与枯草芽孢杆菌的标准菌株表现一致;16S rRNA基因序列测序结果表明,HL29与Bacillus subtilis的同源性达到99.52%。抑菌活性测定结果表明,HL29菌株及代谢产物对包括三个亚门真菌10个属的14种植物病原真菌,以及4个重要属的代表性植物病原细菌均有不同程度的抑菌作用,表明HL29菌株的菌体和代谢产物具有较高的抑菌活性和较广抑菌谱。     

蓖麻枯萎病菌高效生防菌株LX1的筛选与鉴定

为筛选对蓖麻枯萎病菌Fusarium oxysporum Schl.具有抑制活性的生防菌株,本研究利用利福平选择性培养法,从花生根际土壤中筛选了一株对蓖麻枯萎病菌具有显著抑制活性的菌株 LX1。菌株 LX1在对峙培养中出现了明显的抑菌圈,孢子萌发试验显示孢子萌发抑制率为55%～78%,普通光学显微镜观察显示,菌株LX1可显著抑制F. oxysporum菌丝生长,明显造成菌丝分支增加,部分菌丝顶端和中央膨大,随着时间的延长,畸变结构和程度加剧。通过对菌株LX1的形态特征、染色反应、培养性状、生理生化测试以及16S rDNA分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。本研究结果为菌株LX1应用于蓖麻枯萎病菌的生物防治及生物制剂的开发提供了依据。     

一株多粘类芽孢杆菌的鉴定及其生防促生效果初步测定

菌株CF05是从浙江天目山柳杉中分离得到的1株细菌,经形态、16S rDNA序列、生理生化指标检测,鉴定为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa。平板拮抗结果表明,该菌对9种植物病原真菌和3种病原细菌具有显著拮抗效果。室内生测结果表明,发酵液和菌悬液对番茄幼苗均具有明显的促生效果,其中发酵液处理最佳,鲜重增长272.0%,干重增长266.7%。菌株CF05接种27 d后,番茄根际细菌浓度仍很高。种子萌发测定结果表明,菌株CF05处理后发芽率提高11.7%,番茄猝倒病防治测定结果显示,发病率降低38.6%,效果均优于Bacillus subtilis 168处理。综上结果,表明P.polymyxa CF05是1株生防性状优良的促生细菌。     

菜心内生细菌CX-PA的鉴定及生防作用

从菜心植株内分离到一株具有生防活性的细菌CX-PA,通过对其形态特征和生理生化特性测定,16S rDNA部分序列同源性分析,鉴定为多粘类芽孢杆菌。采用浸种、喷雾接种处理,CX-PA可进入小白菜、大白菜和菜心体内定殖。培养基平板对峙测定,CX-PA对菜心炭疽病菌等7种病原菌有较强的拮抗作用。盆栽防治试验表明,CX-PA对菜心炭疽病和霜霉病的防治效果分别为70.8%和64.8%。     

生防细菌BRF-1和BRF-2鉴定及生物学特征

BRF-1和BRF-2是从大豆根际土壤中筛选得到的两株革兰氏阳性生防细菌,平板对峙培养表明它们对7种植物病原真菌具有拮抗作用。BRF-1芽孢球型中生,无鞭毛;而BRF-2芽孢球型端生,周生鞭毛。部分生物学特征研究表明,两菌株之间存在较大的差异。采用Biolog微生物自动鉴定仪鉴定和对两菌株的16S rDNA基因序列分析表明,菌株BRF-1和BRF-2分别与多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌亲缘关系最近,故把菌株BRF-1和BRF-2分别定为多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。     

生防菌株BL-21的鉴定及其活性产物

为了明确生防菌株BL-21的分类地位和发酵液中的有效成分,对其进行了鉴定,并对其发酵液的抑菌谱和稳定性进行了测定。结果表明,该菌株为侧孢芽孢杆菌Bacillus laterosporus;其发酵液对全部供试植物病原真菌均有抗菌活性;发酵液中的抗菌活性物质对热和蛋白酶敏感,100℃10min、酶解37℃120min活性丧失;从菌株BL-21的发酵液中分离得到四种抗菌物质,均具有抗革兰氏阳性菌的活性,其中A组分和B组分还对植物病原真菌有抑制作用。     

香蕉枯萎病生防细菌的筛选、鉴定及其抑菌作用

采用平板对峙法,从香蕉根部土样中分离到1株枯萎病拮抗芽孢杆菌XY-10。根据形态特征及16S rDNA分析将其鉴定为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa。拮抗试验表明菌株XY-10不同浓度的发酵滤液均可抑制病原菌孢子萌发和生长,当发酵滤液浓度分别为10%、30%和50%时,其在高度抑制水平上的抑制率分别为7%、23%和40%。经发酵滤液处理,病原菌菌丝末端膨大成球状、菌丝破裂、消解,菌丝体分枝增多。     

青枯病生防菌的筛选、鉴定及其活性物质特性

从发生青枯病的土壤中分离得到4株对植物青枯病病原菌青枯劳尔氏菌具有较强拮抗活性的菌株，其中菌株HY96-2的拮抗活性最强。该菌对其他5种危害严重的植物病原真菌均具很强的拮抗作用。通过对HY96-2的形态、生理生化特征、16S rDNA序列等进行分析，鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌。在此基础上，通过盐析等方法得到HY96-2产生的对青枯病病原菌具有拮抗活性的粗提物，检测了温度和pH对粗提物活性的影响。当温度高于40℃、pH低于4．3或高于8．2时，活性很弱；蛋白酶K作用容易失活；超滤结果表明，该粗提物可能是分子量低于5kD的混合物。     

青稞散黑穗病拮抗菌LN-176的分离鉴定、发酵条件及发酵产物的研究

从西藏佩古错湖湖边的土壤中分离到一株对青稞散黑穗病菌具有较强抑制作用的细菌,经鉴定为多粘芽孢杆菌,命名为LN-176。该菌株对多种植物病原真菌、部分革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌有较好的拮抗作用。以10%的接种量将该菌接种到初始pH7.0的发酵培养基中,28℃旋转培养,发酵液在84h时抗菌活性达到最高,且具有较好的热稳定性和pH稳定性,对蛋白酶K有一定的耐受性。LN-176菌株的发酵液在260nm和280nm下进行吸光度测定,结果表明发酵液中蛋白质含量明显升高;发酵液经硫酸铵盐析后,取上清液和沉淀物分别做抗菌试验,发现沉淀物对青稞散黑穗病菌有拮抗活性而上清液无活性。     

CP7菌株的抗菌活性及菌种鉴定

经分离、筛选获得一株高效分泌抗菌物质的CP7菌株,从该菌株中提取的抗菌产物,对大肠杆菌标准株、金黄色葡萄球菌标准株、苏云金杆菌等细菌;瓜类炭疽病菌、水稻纹枯病菌等真菌有较好的抑菌作用。用16S rDNA序列分析法进行生物分子的分类,该菌株16S rDNA序列与类芽孢杆菌属的34个细菌的同源性为96%~99%,与多粘类芽孢杆菌的同源性为99%。用传统细菌学的方法对CP7菌株进行鉴定,其形态特征、生理生化特性与多粘类芽孢杆菌的特征特性相一致。表明CP7菌株属于多粘类芽孢杆菌。