山东蓬莱葡萄灰霉菌对7种杀菌剂的抗药性检测

为了明确葡萄灰霉菌对啶酰菌胺、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、腐霉利、嘧霉胺的抗药性和对抑霉唑的敏感性,本试验采用菌丝生长速率法和孢子萌发法检测了采自山东蓬莱地区的69株葡萄灰霉菌对上述前6种杀菌剂的抗药性、对抑霉唑的敏感性及抑霉唑与其他6种杀菌剂的交互抗性关系。结果表明,抑霉唑对这69株葡萄灰霉菌的EC_(50)分布在0.403～28.76μg/mL之间,平均值为(9.34±10.34)μg/mL;葡萄灰霉菌菌株中抗啶酰菌胺(BosR)、多菌灵(CarR)、咯菌腈(FluR)、异菌脲(IprR)、嘧霉胺(PyrR)、腐霉利(ProR)的比例分别为100%、100%、9.47%、97.18%、100%、89.20%,测试菌株的抗药性均为多抗类型,没有单抗菌株,其中对3种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、嘧霉胺)、对4种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、异菌脲、嘧霉胺)、对5种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、异菌脲、嘧霉胺、腐霉利或啶酰菌胺、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、嘧霉胺)和对6种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、嘧霉胺、腐霉利)的抗性频率分别为2.33%、9.30%、79.07%、2.33%、6.97%,表明啶酰菌胺、多菌灵、嘧霉胺对测试葡萄菌株完全丧失防效,建议在该葡萄产区停止使用这些药剂,测试菌株对腐霉利、异菌脲的抗性频率高,建议采取限制使用、禁止单独使用等措施,测试菌株对咯菌腈的抗性频率较低,可以继续使用但需按照科学使用规则进行。抑霉唑与其他6种杀菌剂间不存在交互抗性关系,说明其可以和其他药剂同时使用但建议减少使用。     

啶酰菌胺30%悬浮剂高效液相色谱分析

本文采用高效液相色谱法,以甲醇+水为流动相,使用150mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱,内装XDB-C18,5μm填料,二极管阵列检测器,在235nm波长下对啶酰菌胺30%悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明,该分析方法下,啶酰菌胺的线性相关系数为0.999 9;标准偏差为0.10;变异系数为0.32%;平均回收率为99.95%。     

40%甲霜灵·啶酰菌胺可湿性粉剂高效液相色谱分析

建立一种同时分析甲霜灵和啶酰菌胺的高效液相色谱法。采用高效液相色谱法,以甲醇一乙腈一水为流动相,使用ODS—C_(18)色谱柱和紫外检测器,在230nm波长下对试样中的甲霜灵和啶酰菌胺进行液相分离和定量分析。甲霜灵和啶酰菌胺的线性相关系数分别为0.999 7和0.999 7;标准偏差为0.09%和0.06%;变异系数为0.45%和0.30%;回收率为99.4%和99.4%。本方法简便、快速、准确率高,可以满足甲霜灵和啶酰菌胺的定性和定量分析。     

40%啶酰菌胺·咯菌腈悬浮剂高效液相色谱分析方法

本文采用高效液相色谱法,以乙腈加0.8%冰乙酸水溶液为流动相,使用Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱和二极管阵列检测法,在265nm波长下对啶酰菌胺·咯菌腈悬浮剂进行分离和定量检测。结果表明,该分析方法条件下啶酰菌胺和咯菌腈的线性相关系数均为0.999 8和0.999 7,标准偏差分别为0.03和0.01,变异系数分别为0.09%和0.2%,平均回收率分别为99.67%和99.99%。     

山核桃干腐病菌对7种杀菌剂的敏感性比较及其 对苯醚甲环唑敏感基线的建立

测定了甲基硫菌灵、百菌清、腐霉利、戊唑醇、啶酰菌胺、苯醚甲环唑和醚菌酯对山核桃干腐病菌Botryosphaeria dothidea的离体抑菌活性。结果表明,上述7种杀菌剂抑制该病原菌菌丝生长的活性依次为苯醚甲环唑＞戊唑醇＞腐霉利＞甲基硫菌灵＞百菌清＞醚菌酯＞啶酰菌胺。进一步研究表明,苯醚甲环唑对采自安徽和浙江两省从未使用过甾醇脱甲基抑制剂类(DMIs)杀菌剂的150株山核桃干腐病菌菌丝生长的平均EC50值为0.43( ±0.11) μ g/mL,可作为其敏感基线用于以后的抗药性监测。     

福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺敏感基线建立及与不同杀菌剂的交互抗性

为明确中国福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺的敏感性及其与不同杀菌剂的交互抗性，采用菌丝生长速率法测定了106株采自福建省主要番茄产区的番茄灰霉病菌对氟啶胺的敏感性。结果表明，氟啶胺对福建省番茄灰霉病菌菌丝生长的EC50值在0.0037～0.0452 μg/mL之间，平均值为（0.0221 ±0.0098）μg/mL，其敏感性频率分布呈连续单峰曲线，符合正态分布，因此可将该EC50平均值（0.0221±0.0098）μg/mL作为福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺的敏感基线，用于其田间抗药性监测。从106株菌株中选择15株对氟啶胺敏感性不同的菌株，测定了其对嘧霉胺、异菌脲、腐霉利和啶氧菌酯的敏感性。结果表明，供试5种杀菌剂对15株番茄灰霉病菌菌丝生长的平均抑制活性依次为氟啶胺 >异菌脲 >腐霉利 >啶氧菌酯 >嘧霉胺，氟啶胺与异菌脲、腐霉利、啶氧菌酯和嘧霉胺之间均不存在交互抗性。     

油菜菌核病化学防治适期研究

为了明确在油菜不同花期用药对油菜菌核病的防治效果的影响,试验中选用了8种药剂,分别于油菜初花期、盛花期和终花期开展化学防治试验。结果表明在油菜盛花期用药防效最佳,最高防效超80%(啶酰菌胺50%水分散剂86.83%、腐霉利50%可湿性粉剂防效80.75%)。     

N-(2-三氟甲基-4-氯苯基)-2-吡唑酰氨基环己烷基磺酰胺类化合物的合成与杀菌活性

吡唑酰胺类杀菌剂是近年新农药开发的热点。本研究采用EDCI/HOBt酰胺化法合成了14个结构新颖的N-(2-三氟甲基-4-氯苯基)-2-吡唑酰氨基环己烷基磺酰胺类化合物 ( 3a ~ 3n )，其结构均经1H NMR、13C NMR、质谱和元素分析确认，并用X-射线衍射法确定了化合物 3g 的单晶结构和立体构型。菌丝生长速率法试验结果表明，化合物 3a 、 3e 和 3j 对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea KZ-9的EC₅₀值分别为4.28、10.08和11.31 mg/L，抑菌活性不及对照药剂啶酰菌胺和腐霉利；但在孢子萌发试验中，目标化合物表现出与对照药剂相近的抑菌活性，在10 mg/L下有7个化合物对灰霉病菌孢子萌发的抑制率超过了85%；在番茄活体盆栽试验中，化合物 3e 在200 mg/L下对番茄叶片及其花上灰霉病菌的防治效果分别为77.5%和65.2%，高于对照药剂啶酰菌胺 (防效分别为59.8%和30.3%)，有进一步研究的价值。     

黄瓜靶斑病原菌鉴定及室内药剂筛选试验

采用生长速率法测定了34种常见杀菌剂对黄瓜靶斑病菌的抑菌活性。结果表明,不同杀菌剂对棒孢病菌的菌丝生长抑制作用不同。二甲酰亚胺类杀菌剂中腐霉利、异菌脲对棒孢病菌的抑菌率较高,分别为94.69%和84.42%;有机硫类保护性杀菌剂福美双、丙森锌和代森锰锌抑菌率次之,分别为68.14%、66.37%和64.96%;咪唑类杀菌剂中咪鲜胺对棒孢病菌也表现较好的抑菌作用,为61.07%;三唑类与嘧啶类杀菌剂抑菌率一般,抑菌率大部分在50%左右,防治卵菌纲药剂氰霜唑和双炔酰菌胺抑菌率最低,为30%左右。     

啶酰菌胺·咯菌腈30%悬浮剂的高效液相色谱检测方法

本文采用高效液相色谱法,以甲醇+水为流动相,使用Inertsil ODS-SP C185μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在254nm波长下对试样进行分离和定量分析。结果表明啶酰菌胺和咯菌腈的线性相关系数分别为0.999 7、0.999 8;标准偏差分别为0.01、0.01;变异系数分别为0.05、0.10;平均回收率分别为99.8%,99.8%。     

番茄叶霉病菌异菌脲抗药性突变体的诱导与生物学性状

测定了苯并咪唑类杀菌剂敏感-乙霉威抗性(BenS-DieR)、苯并咪唑类杀菌剂抗性-乙霉威敏感(BenR-DieS)和苯并咪唑类杀菌剂抗性-乙霉威抗性(BenR-DieR)3种类型的番茄叶霉病菌Cladosporium fulvum菌株对不同类型药剂的敏感性。结果表明,蕃茄叶霉病菌对供试药剂的敏感性与其对苯并咪唑类杀菌剂及乙霉威的敏感性无关。根据药剂对3类菌株EC50值的平均值, 16种杀菌剂抑制菌丝生长的活性依次为腐霉利＞乙烯菌核利＞异菌脲＞戊唑醇＞百菌清＞嘧霉胺＞醚菌酯＞代森锰锌＞8-羟基喹啉铜＞丙环唑＞苯醚甲环唑＞嘧菌酯＞灭锈胺＞烯酰吗啉＞烟酰胺＞三唑酮;抑制孢子萌发的活性依次为醚菌酯＞腐霉利＞百菌清＞乙烯菌核利＞灭锈胺＞8-羟基喹啉铜＞异菌脲＞代森锰锌＞嘧菌酯＞烟酰胺＞嘧霉胺＞戊唑醇＞丙环唑＞苯醚甲环唑＞三唑酮＞烯酰吗啉。通过紫外诱变共获得17株抗异菌脲突变体,突变频率为4.5×10-7。其中低抗、中抗和高抗菌株分别占 17.65%、70.59%和11.75%。这些突变体对腐霉利和乙烯菌核利表现交互抗性,对苯并咪唑类、脱甲基抑制剂(DMIs)、QoIs等药剂的敏感性与亲本菌株之间没有显著性差异,与亲本菌株在生长、产孢、致病能力等方面也无显著差异,但对渗透胁迫的敏感性要显著高于亲本。     

韭菜灰霉病防治烟剂的筛选与评价

为筛选适合制备安全、高效防治韭菜上灰霉病烟剂的杀菌剂品种,从原药抑菌活性、烟雾毒力作用、成烟率、安全性和田间防效5个方面,对9种常用杀菌剂制备成韭菜灰霉病防治烟剂的可行性进行了评价.室内毒力测定结果表明:氟啶胺、咯菌腈和啶菌噁唑抑制韭菜灰霉病菌菌丝生长的EC50值分别为0.13、0.05和0.12 mg/L;吡唑萘菌胺...     

Activity of carbendazim,dimethachlon, iprodione,procymidone and boscalid against Sclerotinia stem rot in Jiangsu Province of China

Carbendazim (MBC) was widely used to control Sclerotinia stem rot routinely during the 1980s in China, but development of MBC resistance in the causal agent Sclerotinia sclerotiorum led to control failures of this disease. In this study it was found that the MBC resistance in S. sclerotiorum populations was widespread throughout Jiangsu Province with a resistance frequency of 29.54% in the 1786 collected isolates during the growing seasons of 2006 to 2008. The resistance frequencies differed among sampled cities, ranging from 3.1% to 54.9%. The field MBC-resistant isolates showed comparable mycelial growth, sclerotia production and pathogenicity to the wild-type sensitive isolates, which suggested that the field MBC-resistant isolates might have sufficient parasitic fitness to compete with the field MBC-sensitive isolates in the field. In the in vitro sensitivity test, boscalid showed greater activity against S. sclerotiorum than dicarboximide fungicides (dimethachlon, iprodione and procymidone). The treatment 50% boscalid (WG) 125 g a.i. ha⁻¹ was comparable in efficacy to the treatment 50% iprodione (WP) 600 g a.i. ha⁻¹, and better than other treatments of 6% dimethachlon (WP) 690 g a.i. ha⁻¹ and 50% procymidone (WP) 337.5 g a.i. ha⁻¹, whereas MBC failed to control Sclerotinia stem rot (control efficacy only 16.0%). The most active agent for controlling Sclerotinia stem rot was boscalid in our study.     

啶酰菌胺在草莓和土壤中的残留及消解动态

通过两年两地的田间试验,采用分散固相萃取-气相色谱-质谱联用的分析方法,研究了50%啶酰菌胺水分散粒剂在草莓和土壤中的残留及消解动态,并探讨了不同农作物品种、环境气候条件对农药消解速率的可能影响。结果表明:在草莓中添加0.05、0.3和3 mg/kg的啶酰菌胺标准品时,其平均回收率为91%~121%,相对标准偏差(RSD)为5.8%~9.9%;在土壤中分别添加0.1、0.3和3 mg/kg的啶酰菌胺时,其平均回收率为91%~100%,RSD为5.4%~6.5%。草莓和土壤中啶酰菌胺的定量限分别为0.05和0.1 mg/kg。啶酰菌胺在草莓中的消解动态符合准一级动力学方程,半衰期为6.2~11.8 d,但在山东和北京土壤中的消解试验均未拟合出指数方程。试验表明,50%啶酰菌胺水分散粒剂以有效成分337.5 g/hm2的推荐高剂量分别施药3次,采收安全间隔期为3 d时,啶酰菌胺在草莓和土壤中的最大残留量分别为1.97及0.38 mg/kg,最终残留量符合残留要求,可以安全使用。     

吡唑醚菌酯·噁唑菌酮30%水分散粒剂高效液相色谱分析

建立了在同一色谱条件下测定混剂中吡唑醚菌酯和噁唑菌酮含量的方法。采用ODS C18、5μm为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器分离,以甲醇+水(体积比为80∶20)为流动相,在254nm波长下,经保留时间定性确证,峰面积外标法进行定量分析。结果表明:吡唑醚菌酯与噁唑菌酮的线性相关系数分别为0.999 5和0.999 6;变异系数分别为0.68%和0.45%;平均加标回收率分别为100.28%和100.32%。     

腐霉利的光解及水解特性研究

为研究腐霉利的消解特性，采用乙腈提取，弗罗里硅土柱净化，建立了油菜叶片中腐霉利残留的气相色谱-电子捕获检测器 (GC-ECD) 分析方法；并在室内模拟条件下，研究了腐霉利在油菜叶片表面的光解行为，以及不同初始浓度、不同pH值缓冲液、不同浓度Fe2+、Fe3+ 和NO₃–、NO₂– 对水溶液中腐霉利光解的影响；通过气相色谱-电子轰击电离源质谱仪 (GC-EIMS) 鉴定了其在甲醇、丙酮和乙腈溶液中的光解产物；同时研究了不同pH值缓冲液和阴、阳离子表面活性剂对腐霉利水解特性的影响。结果表明:腐霉利添加水平为0.05、0.2、2及12 mg/kg时，其在油菜叶片中的平均回收率为80%~100%，相对标准偏差为2.3%~7.8%。腐霉利在油菜叶片表面的消解动态符合一级动力学方程，紫外灯下的消解半衰期为1.03 h。腐霉利在水溶液中的光解速率随其初始浓度的升高而减慢；其在酸性条件下稳定，碱性条件下易光解；NO₃–、NO₂–、Fe2+ 及Fe3+均可抑制腐霉利在水溶液中的光解，因此可用作为其光猝灭剂。共鉴定出两种腐霉利在甲醇、丙酮和乙腈溶液中的光解产物，分别为其单脱氯化产物C₁₃H₁₂ClNO₂和其脱甲基化产物C₁₂H₉Cl₂NO₂。腐霉利在碱性条件下易水解，酸性条件下水解较慢；阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠 (SDS) 对其水解无影响，而阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB) 则可促进其水解。研究结果可为腐霉利的合理使用及其环境安全性评价提供参考。     

腐霉利和咯菌腈混用对黄瓜灰霉病菌的联合毒力及药剂残留动态

为探究腐霉利和咯菌腈混用对黄瓜灰霉病病原菌灰葡萄孢的联合毒力,进而通过减少用药量及施药后残留动态分析,提升黄瓜中这两种农药的风险防控水平。采用菌丝生长速率法,测得腐霉利和咯菌腈对灰霉病菌菌丝生长的有效抑制中浓度 (EC₅₀) 分别为0.069 mg/L和0.103 mg/L;而将两种农药以质量比1∶1混用时,EC₅₀值为0.016 mg/L,增效系数 (synergistic ratio,SR) 达到5.0,表现为强增效作用。腐霉利和咯菌腈单独处理3 d后的灰霉病菌菌丝经电镜扫描观察,分别表现为菌丝干瘪和胞内物质溢出;而经两种农药以质量比1∶1混合处理后,灰霉病菌同时出现了菌丝干瘪和胞内物质溢出现象,混用对菌丝的损伤符合叠加增强特征。为进一步分析腐霉利和咯菌腈混配施用后的动态残留情况,对可同时检测这两种农药残留的高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS)方法进行了优化。所用方法下,腐霉利和咯菌腈的添加回收率分别为100%~102%和94%~96%,相对标准偏差 (RSD)为1.7%~5.3%和2.8%~3.4%,定量限 (LOQ)为0.01 mg/kg,符合残留检测要求。两种农药以质量比1∶1混配用于田间试验,施药21 d后在黄瓜上的最终残留量比单独使用腐霉利和咯菌腈分别降低了59%和86%;混配施药后腐霉利和 咯菌腈的消解半衰期分别从5.38 d和6.93 d缩短至4.39 d和4.33 d。研究表明,腐霉利和咯菌腈混用切实增强了对黄瓜灰霉病菌的联合毒力,为农药合理减量增效应用提供了依据,同时还可有效降低黄瓜中的农药残留风险。     

韭菜中腐霉利的残留检测及长期膳食暴露评估

建立了一种简便、高效的QuEChERS前处理结合高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS) 检测韭菜中腐霉利残留量的方法。于2019年在中国黑龙江、辽宁、河南、山东、安徽、湖南、广西及福建8地开展了田间规范残留试验,研究了腐霉利在韭菜中的残留风险,并进行了韭菜中腐霉利残留的长期膳食暴露评估。样品采用乙腈提取,N-丙基乙二胺 (PSA) 和石墨化碳黑 (GCB) 净化,HPLC-MS/MS检测,外标法定量。结果表明:在添加水平为0.02~20 mg/kg范围内,腐霉利在韭菜中的回收率为74%~98%,相对标准偏差 (RSD) 为4.6%~9.9%,定量限 (LOQ) 为0.02 mg/kg。50%腐霉利可湿性粉剂以有效成分450 g/hm2的剂量于韭菜灰霉病发病初期或前期施药1次,施药后间隔30 d采样,腐霉利在韭菜中的最终残留量为0.04~1.06 mg/kg。长期膳食暴露评估结果显示:腐霉利的国家估算每日摄入量 (NEDI) 为2.5562 mg,风险商值 (RQ) 为40.6%,表明腐霉利在韭菜中的长期膳食摄入风险较低。     

豆瓣菜中啶酰菌胺残留及膳食摄入风险评估

为评价啶酰菌胺在豆瓣菜生产上应用的安全性，采用QuEChERS方法进行样品前处理，液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 进行定量分析，检测了豆瓣菜中啶酰菌胺的最终残留量，对2种膳食食谱下的长期摄入风险进行了比较分析。结果表明，在添加水平范围内，在豆瓣菜空 白样品中添加啶酰菌胺的平均回收率为89%~100%，相对标准偏差为5%~12%。GAP条件下，最终残留量为0.16~37.1 mg/kg。普通人群啶酰菌胺的国家估计每日摄入量 (NEDI) 为1.215 1 mg/(kg bw)，风险商为48.2%，表明其对一般人群健康产生的风险是可接受的，同时，使用WHO提供的单独每种农产品膳食量进行计算，啶酰菌胺每日摄入量为0.083 0 mg/ (kg bw)，风险商为3.3%。经过对比分析，推荐使用WHO提供的膳食食谱数据进行长期膳食风险评估。