杀虫安对小鼠脑组织内神经递质的影响

研究了杀虫安经灌胃给药后对小鼠脑组织内多巴胺及氨基酸含量的影响。将60只ICR (美国癌症研究所)小鼠随机分为空白对照、杀虫安低剂量(200 mg/kg bw)及高剂量(300 mg/kg bw) 3个处理组,于灌胃后出现惊厥时断头取脑,采用高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)检测法测定了鼠脑组织内多巴胺(DA)及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量,采用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定了氨基酸的含量。结果发现,两个剂量处理组鼠脑组织内DA及氨基酸含量与对照相比均有显著性差异。其中:DA比对照分别升高25.25%和31.93%(PPPPγ-氨基丁酸(GABA)含量比对照降低32.55% (PP<0.05)。表明杀虫安导致惊厥时伴有鼠脑内多巴胺和氨基酸含量的变化。     

转cry1Ab/cry2Aj、cry1Ab/vip3DA玉米对棉铃虫、甜菜夜蛾和斜纹夜蛾的抗虫性评价

为评估转cry1Ab/cry2Aj、cry1Ab/vip3DA玉米对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)、甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)和斜纹夜蛾Prodenia litura(Fabricius)的抗虫性,在室内测定了3个转cry1Ab/cry2Aj玉米品系和1个转cry1Ab/vip3DA玉米品系对3种害虫幼虫存活和生长发育的影响,研究了该系列Bt玉米不同组织器官对害虫的杀虫活性和控制效果。结果显示,棉铃虫初孵幼虫取食各品系Bt玉米叶片96h后死亡率为87.50%~90.00%,取食花丝和雌穗的幼虫96h后几乎全部死亡;甜菜夜蛾初孵幼虫取食各品系Bt玉米叶片、花丝和雌穗168h后死亡率为22.50%~68.33%,幼虫的生长发育受到明显抑制,体重抑制率达85.00%~95.00%;斜纹夜蛾初孵幼虫取食各品系Bt玉米叶片、花丝和雌穗96 h后死亡率显著高于非转基因亲本对照,168h后幼虫死亡率达90.00%以上。研究表明,转cry1Ab/cry2Aj和cry1Ab/vip3DA玉米品系对棉铃虫和斜纹夜蛾的初孵幼虫表现出较好的抗性,可以作为转多基因抗虫玉米育种的备选材料。     

辣椒碱对斜纹夜蛾细胞增殖及凋亡的影响

采用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)检测法、荧光显微镜细胞形态观察法和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)技术,研究了辣椒碱对离体培养斜纹夜蛾Spodopt-era litura(SL)细胞增殖及凋亡的影响。结果表明:辣椒碱对SL细胞24 h的IC50值为46.89μg/mL,与鱼藤酮差异不显著。40μg/mL辣椒碱处理SL细胞24h后,细胞形态明显不规则,呈现出凋亡的典型症状。10、20和40μg/mL辣椒碱处理SL细胞48h后,细胞早期凋亡率分别为13.56%、18.61%和3.81%,而晚期凋亡和坏死率分别为23.78%、34.28%和61.72%。辣椒碱处理细胞48h后,细胞周期变化明显,细胞生长阻滞于G2/M期。表明辣椒碱对斜纹夜蛾细胞具有良好的抑制作用,能致细胞凋亡并有一定的浓度依赖性。     

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法分析甘蓝和土壤中的鱼藤酮

采用QuEChERS-液相色谱-串联质谱法(QuEChERS and LC-MS/MS)建立了鱼藤酮在甘蓝及土壤中的残留检测方法。样品前处理采用以乙腈作提取剂、PSA(primary sec-ondary amine,N-丙基乙二胺)为分散净化剂的QuEChERS方法,利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)在多反应离子检测模式下进行检测。在甘蓝和土壤中的添加水平为0.002-0.1mg/kg条件下,鱼藤酮在甘蓝中的添加回收率为78.36%～88.16%(相对标准偏差为6.05%～13.38%),在土壤中的添加回收率为77.94%～89.50%(相对标准偏差为4.70%～12.35%)。鱼藤酮在甘蓝和土壤中的最低检测浓度为0.002mg/kg,最小检出量为1.0×10-11g。该方法样品前处理简单、快速,准确度、精密度和灵敏度均符合农药残留检测要求,适用于甘蓝和土壤中鱼藤酮残留的检测。     

鱼藤酮水基纳米悬浮剂的特性及对松材线虫的杀虫作用

为改善鱼藤酮制剂的分散性,提高其悬浮率、稳定性及生物活性,制备了鱼藤酮纳米悬浮剂。该剂型为水基剂型,环境扫描电子显微镜和高效液相色谱检测结果显示,在鱼藤酮的水基纳米悬浮剂中,鱼藤酮悬浮颗粒的平均粒径为127.1 nm±31.8 nm,鱼藤酮的包封率为81.7%±3.5%,该制剂悬浮率高达99.23%±0.49%,抗光照分解的稳定性增强,36 h紫外光照射后鱼藤酮纳米悬浮剂中残存的鱼藤酮浓度比鱼藤酮丙酮溶液提高68.9%。以LC50表示的24 h对松材线虫的毒力鱼藤酮纳米悬浮剂是鱼藤酮丙酮溶液的7.5倍。     

食蚊鱼Gambusia affinis脑乙酰胆碱酯对杀螟松的反应及恢复

在静水系统中用不同浓度的杀螟松处理食蚊鱼 96 h分别于第 2 4、4 8和 96 h测定脑乙酰胆碱酯酶(ACh E)的活性。另一些鱼在接触杀螟松之前分别用胡椒基丁醚 (PBO)和磷酚三苯酯 (TPP)做预处理。结果表明 ,在 0 .4 mg/ L和 1.3mg/ L的亚致死浓度下 ,杀螟松对 ACh E活性的抑制率分别为 4 4 .2 %和 6 5.7%与用杀螟松单独处理的鱼相比 ,TPP预处理的鱼 ACh E活性更低 ,而 PBO处理后的鱼 ACh E活性较高。本项研究还测定了鱼经过 96 h杀螟松处理再移到清水中之后 ACh E的恢复情况。经过 8d的恢复期 ,用杀螟松单独处理和经 TPP处理的鱼 ,其 ACh E仍低于对照。     

蜕皮激素对黑化黏虫体液免疫的影响

为揭示蜕皮激素(MH)对黑化黏虫免疫能力的影响, 本试验对被球孢白僵菌侵染后的黏虫体内MH含量的动态变化进行了分析比较, 并对被侵染的黑化黏虫注射20-羟基蜕皮酮(20E), 分析比较其注射20E后的死亡率以及酚氧化酶(PO)和溶菌酶活性的变化?结果表明:被白僵菌侵染后, 黑化黏虫6龄幼虫的MH含量在侵染后8 h( P <0.05)?72 h( P <0.05)和96 h( P <0.05)均显著高于对照(注射吐温-80)?注射球孢白僵菌后立即注射5 μg/μL的20E稀释液, 黑化黏虫的死亡率显著低于对照组(注射球孢白僵菌后注射无水乙醇)( P <0.05), 其原因是注射5 μg/μL 20E稀释液后, 被球孢白僵菌侵染后8 h和24 h的黑化黏虫体内PO和溶菌酶活性均显著高于对照组(注射球孢白僵菌后注射无水乙醇)( P <0.05)?试验结果表明MH在黏虫体液免疫反应中起到重要的调节作用?     

鱼藤酮多克隆抗体的制备和残留分析方法

为建立鱼藤酮免疫分析方法,以鱼藤酮为原料合成4-{2-[(2R,6as,12as)-1,2,6,6a,12,12a-六羟基-2-异丙烯基-8,9-二甲氧基色烯(3,4-b)喃(2,3-h)色烯-6-亚基]肼基}-4-丁酸(简称鱼藤酮腙琥珀酸半酯,RH-HS)半抗原,通过碳化二亚胺法(EDC)、活酯法(AE)将半抗原与牛血清蛋白(BSA)偶联制备免疫原Ⅰ、Ⅱ.将免疫原分别免疫BALB/c鼠获得相应的抗体Ⅰ和抗体Ⅱ,测定抗体冻干粉效价,分别为4.10×105和8.29×105.并进行抗原抗体的竞争抑制能力、特异性和鱼藤酮的添加回收试验.结果表明:抗体Ⅰ、Ⅱ对鱼藤酮最低检测限(IC20)分别为0.440μg/mL和0.437μg/mL.两抗体对吡蚜酮、克百威的交叉反应率均小于1.1%,抗体Ⅰ对4个与鱼藤酮结构相类似化合物的交叉反应率均高于56%,较抗体Ⅱ高.鱼藤酮的免疫分析技术(EUSA)与HPLC检测手段相比,在检测线性范围和灵敏度方面,两者差异不明显;在样品前处理方面,ELISA显示出快速、简单、有效的优点.     

鱼藤酮在3种土壤中的吸附-解吸附特性

为了综合评价鱼藤酮在土壤环境中的吸附-解吸附特性,采用批量平衡法,系统研究了鱼藤酮在砂壤土、黏壤土及壤土3种农业土壤中的吸附-解吸附行为。结果表明,鱼藤酮在3种土壤中的吸附-解吸附行为符合Freundlich模型 (R2≥0.946 8),吸附常数 (K_f-ads) 在1.52~11.39之间,吸附能力为:黏壤土 > 砂壤土 > 壤土;而解吸附常数 (K_f-des) 在1.02~4.55之间,解吸附强弱次序为壤土 > 黏壤土 > 砂壤土。鱼藤酮在砂壤土、黏壤土和壤土3种土壤中有机碳吸附常数 (K_OC) 分别为982、101 7和219,而滞后系数 (H) 分别为0.687 3、0.556 9和0.892 3,表明鱼藤酮在黏壤土及砂壤土中移动性较弱,有正迟滞作用,而在壤土中移动性较强,无迟滞作用。该研究将对鱼藤酮的环境风险评估具有一定的理论指导意义。     

基于介孔二氧化硅的鱼藤酮纳米颗粒的制备及其性能研究

纳米材料作为农药载体可提高农药稳定性和调控农药释放速率，是提高农药利用率的重要手段。介孔二氧化硅纳米粒子 (MSNs) 是一种具高比表面积、粒径与孔径可调节和生物相容性良好的纳米载体。鱼藤酮是非内吸性植物源杀虫剂，在环境中易降解。本研究先通过改良的软模板法制备出粒径均一的MSNs，再通过溶剂挥发法将鱼藤酮负载到MSNs中，制备得到载鱼藤酮MSNs (Rot@MSNs)，其载药率达31.6%，具有良好的缓释特性，缓释时间可达288 h以上；施药处理3 d后在番茄的上部叶片和下部叶片中均检测到了鱼藤酮，表明纳米载体MSNs提高了鱼藤酮在番茄植株中的内吸和传导能力。该研究对于减少农药使用量、降低环境污染等具有重要意义。     

丁香假单胞菌发酵液中的冠菌素含量测定方法及其应用

为了辅助提高工程菌种改良的效率，建立了一种简单、快速、高效的分散液-液微萃取-高效液相色谱检测丁香假单胞菌发酵液中冠菌素的分析方法。优化了蛋白沉淀法、萃取剂的种类和体积、分散剂的种类和体积、萃取时间和离心强度等对萃取率的影响。确定最优萃取条件为:以2.0 mL丙酮作为分散剂，以400 μL氯苯为萃取剂，萃取5 min，在5 000 r/min下离心5 min。高效液相色谱的检测条件为:流动相为V (甲醇) : V (0.5%乙酸水溶液) = 70 : 30，等梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长220 nm。在3.2~100 mg/L范围内，冠菌素的峰面积与其质量浓度间呈良好的线性关系，相关系数 (r) 为0.999 8。方法的检出限为2.1 mg/L，定量限为6.5 mg/L。在6.5、25和100 mg/L添加水平下，冠菌素在丁香假单胞菌发酵液中的回收率在95%~98%之间，相对标准偏差 (n = 5) 在2.7%~5.1%之间。该方法可用于丁香假单胞菌发酵液中冠菌素含量的测定。     

非洲山毛豆中鱼藤酮的超临界流体萃取技术研究

采用超临界流体萃取-反相高效液相色谱法,以鱼藤酮萃取率和萃取产物总得率为评价指标,研究提出非洲山毛豆Tephrosia vogelii Hook.f中鱼藤酮的超临界流体萃取较优工艺条件为:萃取物料粒径30目,静态萃取20 min,萃取温度45℃,压力27.58 MPa,流体总流量30 mL/g,萃取前向萃取池中加入3 mL甲醇作夹带剂。采用该法对非洲山毛豆中鱼藤酮的萃取率(质量分数)达0.41%,相当于氯仿浸提法的98%;萃取产物总得率(质量分数)为16.62%,高于氯仿浸提法。与常规溶剂法相比,该方法具有萃取效率高、精确、无毒、经济、操作简便、选择性可调等优点。     

解淀粉芽胞杆菌DP03-4发酵条件研究

前期在苹果心室拮抗菌中筛选出一株解淀粉芽胞杆菌DP03-4,该菌株在平板试验中对多种苹果病原菌表现明显拮抗作用,田间也表现较好的防治效果。本试验以菌体生长量和抑菌圈大小为指标,应用多因素正交试验和发酵条件单因素筛选对该菌株的培养基成分配比及培养条件进行优化。得到最适培养基配方为酵母浸粉 15 g,NaCl 2.5 g,葡萄糖10 g,H₂O 1000 mL;最适的培养条件为温度30℃~35℃,摇瓶装液量75 mL/250 mL,摇床转速210 r/min,初始pH值6,接种量4%。发酵条件优化后的发酵液较优化前LB发酵液菌体量提高43.7%,抑菌活性提高51.4%。为该菌株的进一步开发利用提供了基础数据。     

甲磺隆水解酶酶促反应体系的建立与特性研究

在室内控制条件下对甲磺隆降解菌S113(Methylopila sp.)的水解酶进行了研究,发现该酶为胞内酶、非诱导酶。建立了甲磺隆水解酶的酶促反应体系:2 830 μL Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液(0.2 mol/L,pH 7.0),150 μL甲磺隆(1 000 mg/L),20 μL粗酶液(约1.2 μg粗蛋白),30℃水浴30 min。甲磺隆水解酶pH值稳定范围为6~9,最适pH值为8.0。水解酶热不稳定,45℃处理30 min,酶活下降59.22%,70℃处理30 min可完全灭活。测定了8种金属离子对水解酶的作用,发现 1 mmol/L 的Ca2+对酶活有促进作用。     

高效液相色谱法测定复方陆朴微乳剂中厚朴酚与和厚朴酚的含量

建立了高效液相色谱法(HPLC)测定复方陆朴微乳剂中厚朴酚与和厚朴酚含量的方法。样品经85℃水浴去除溶剂后,加入甲醇溶解超声处理30 min、过滤,取滤液,测定其中厚朴酚与和厚朴酚的含量。色谱条件:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5%磷酸-甲醇、流速为0.70 mL/min、检测波长为294 nm、柱温30℃,进样量10μL。结果表明:厚朴酚在0.074~0.518μg/mL(r=0.999 7)、和厚朴酚在0.152~1.064μg/mL(r=0.999 8)范围内,其质量浓度和峰面积之间均呈良好的线性关系;厚朴酚的添加回收率在98.8%~100.2%之间,相对标准偏差(RSD)为0.70%~1.0%(n=6);和厚朴酚的添加回收率在98.5%~99.5%之间,RSD为0.90%~1.1%(n=6),5个不同批次的复方陆朴微乳剂中厚朴酚、和厚朴酚的平均含量分别为2.692 4和1.216 5 mg/mL。该方法操作简便、准确度高、重现性好,可作为复方陆朴微乳剂中厚朴酚与和厚朴酚含量的测定方法。     

稻谷中噁霉灵残留气相色谱检测方法研究

稻壳中残留的噁霉灵用丙酮溶液提取,浓缩至干用乙酸乙酯定容,用配有NP检测器的气相色谱测定。糙米残留的噁霉灵用丙酮溶液提取,浓缩,经乙酸乙酯萃取,用进配有NP检测器的气相色谱测定,DB-FFAP色谱柱;温度（℃）：进样口：230;柱温：200;检测器：230;气体流量（mL/min）：氮气：2;氢气：3.5;空气：50;尾吹：5。进样量：1μL;外标法定量,方法简单、准确,精密度和重现性良好,回收率范围为80.43～103.18%,变异系数2.27～4.05%,     

鱼藤酮微胶囊化参数的确定

采用界面聚合法以甲苯-2,4-二异氰酸酯(toluene-2,4-di-isocyanate,TDI)-乙二胺(TDI-乙二胺)为成囊单体制备鱼藤酮微囊悬浮剂,对乳化剂配比、TDI-乙二胺、囊壁-囊芯、分散剂用量、反应pH值、乳化机转速、交联度等因子进行3水平正交优化试验,获得具有高成囊率和较佳恒定释放天数的鱼藤酮微囊悬浮剂制备工艺参数为:乳化剂1210-0204C质量比1∶ 2,成囊单体TDI -乙二胺摩尔比2.5∶ 1,囊壁-囊芯质量比1∶ 1,聚乙烯醇(PVA)在水相中的含量为2.5 mg/g,pH值7.2,转速1 200 r/min、交联度10%。对制备的2.49 mg/g鱼藤酮微囊悬浮剂的成囊率、平均粒径和囊壁厚度、光解稳定性、热贮与低温稳定性及释放速率进行测定,结果表明,以所选定技术参数制备的鱼藤酮微囊悬浮剂具有良好的光解稳定性和优异的控释作用。经125 W人工紫外光照6 d,鱼藤酮微囊悬浮剂的降解率为35.74%,而鱼藤酮乳油则完全降解,鱼藤酮微囊悬浮剂抗光降解性能显著增强;其恒定释放天数为22 d,具有优异的控释作用。     

六种手性三唑类杀菌剂对映体的超临界流体色谱法分离

采用超临界流体色谱,以超临界二氧化碳(CO2)作为流动相,研究了6种手性三唑类杀菌剂(苄氯三唑醇、联苯三唑醇、叶菌唑、乙环唑、糠菌唑和醚唑)在Chiralcel OD-H手性色谱柱上的对映体分离。考察了不同改性剂种类(甲醇、乙醇、异丙醇)、体积分数(0~15%)以及系统背压(13~17 MPa)对分离效果的影响,并与其在Sino-Chiral OJ和Chiralpak IB手性色谱柱上的分离效果进行了比较。结果表明:单独以超临界CO2为流动相时,6种三唑类杀菌剂的保留时间均大于60 min,而添加了醇类改性剂后其在40 min内均得到了洗脱。苄氯三唑醇、联苯三唑醇、叶菌唑和糠菌唑在柱温为34℃、系统背压为15 MPa、流动相流速为2 m L/min时,在20 min内均实现了基线分离(Rs≥1.5);优化改性剂(体积分数)分别为3%乙醇、13%乙醇、6%甲醇和7%乙醇。Chiralcel OD-H柱对6种供试杀菌剂的手性识别效果优于Sino-Chiral OJ和Chiralpak IB柱,但对映体分离时间要长10~20 min。     

生防多粘类芽胞杆菌P1悬浮剂的研制

本研究通过流点法、生物相容性、正交试验等方法,对多粘类芽胞杆菌Paenibacillus polymyxa P1悬浮剂（P1-SC）的配方所添加的助剂进行了筛选。结果表明,当P1-SC的配方为：P1菌粉为10%（≥10.18 lg cfu/g）、润湿分散剂500^#和MOA-7均为2.5%、增稠剂硅酸镁铝和黄原胶分别为0.75%和0.15%、防腐剂万立净C25 0.20%、防冻剂丙三醇3%、消泡剂0.3%、并用软水补足至100%时,所制得的P1-SC中的活菌数≥9.18 lg cfu/mL、细度（通过75μm筛）≥95%、pH在5.0～8.0、持久起泡量（1 min后）≤30 mL、倾倒后残余物质量≤5.0%、洗涤后残余物质量≤0.5%、悬浮率≥90%,达到了企业对悬浮剂的检测标准。同时,对P1-SC中P1芽胞在不同温度条件下的货架期进行了测定。6个月的贮存测试结果表明,45℃活菌数下降了6%,而在4℃和25℃ P1的活菌数没有发生明显变化。