转基因康乃馨两种类黄酮-3',5'-羟化酶基因检测方法的建立

康乃馨（Dianthus caryophyllus L.）是全球贸易量最大的鲜切花之一。转基因康乃馨因颜色新奇、花型丰富、插瓶期长等特点深受消费者喜爱。现有19个转基因康乃馨品系列入全球商业化种植，其中18个品系因转入了类黄酮-3’,5’-羟化酶（flavonoid-3’,5’-hydroxylase,F3’5’H）基因而产生了蓝紫色花瓣的性状。18个品系转入的F3’5’H基因中11个来源于大花三色堇（bp40基因），还有7个来源于矮牵牛（hf1基因）。我国目前没有批准转基因康乃馨进口，更缺乏相关检测方法。建立转基因康乃馨外源基因筛查方法，用以防范转基因康乃馨种苗、鲜切花等非法进入我国显得至关重要。本研究针对转基因康乃馨中最常见的两种不同来源F3’5’H基因，建立了普通PCR和实时荧光PCR检测方法，构建了适于两个基因检测的质粒分子，并将这两种方法应用于进境产品检测。结果表明，建立的bp40基因和hf1基因检测方法均具有特异性，普通PCR方法的检测下限（LOD）可分别达到25拷贝和12.5拷贝，实时荧光PCR方法的LOD均为10拷贝，在进境康乃馨种苗等样品中未检出该基因。综上，本研究建...     

水果转基因及检测技术进展

本文综述了近几年来转基因技术在水果作物上的应用，包括使水果延缓成熟的转基因工程，抗病毒转基因工程，抗真菌和细菌病害转基因工程及抗虫转基因工程等。同时也阐述了近几年发展起来的转基因产品检测方法。     

转基因检测数据库概述

转基因检测方法和标准物质是转基因生物安全管理的技术支撑,本文对国内外转基因作物信息数据库、转基因检测方法数据库、筛选检测在线分析工具和转基因标准物质库进行了整理;并分析了各数据库的特点,以期为转基因检测的信息获取提供指引,为我国转基因检测信息平台的建设提供思路。     

杜松烯合成酶作为转基因棉花PCR检测的内参照基因

根据棉属植物中棉酚合成的关键酶之一杜松烯合成酶[（＋）-d-cadinene syhnthase]基因序列，设计合成了该酶的实时荧光PCR的引物和TaqMan探针，经研究发现，此套引物探针能特异性检测海岛棉和陆地棉，有较高的检测灵敏度。同马铃薯、大椒、茄子、烟草、番茄、玉米、大豆、小麦、水稻和其它转基因作物无非特异性反应，可以作为转基因棉花检测的内参照。     

转基因植物的检测策略和检测技术

目前转基因植物的安全性在全球范围内引起激烈的争论与普遍关注。一些国家正在努力制定相应的法律和法规,对转基因产品实行标识制度,加强对转基因植物及其产品的管理。为了在世界贸易活动中保证本国经济利益不受侵害,加强转基因植物及其产品的检测技术研究是必不可少的。转基因植物的检测主要有两种方法:一种是DNA水平上的检测,另一种是蛋白质水平上的检测。     

数字PCR在转基因植物检测中的应用

随着转基因植物种植规模不断扩大，对其中转基因成分检测也提出了新的要求。近年来，数字PCR作为一种新兴的分子生物学技术在其检测方面得到了广泛应用。本文主要介绍了数字PCR的原理及数字PCR在转基因检测中的应用优势，并对转基因植物检测中的转基因成分定量检测、标准物质制备与定值及外源基因拷贝数鉴定等应用进行了总结。     

转基因延熟番茄"华番一号"的品系特异性检测方法

本文使用反向PCR方法克隆了转基因延熟番茄"华番一号"(Bioscein)的外源基因和番茄基因组之间的一段边界序列,并依据此段序列设计了具有品系特异性的引物和荧光探针,以实时荧光PCR技术建立了华番一号的品系鉴定检测方法,扩增片段长108bp,横跨在Nos启动子和番茄基因组之间.以转基因大豆(RR)、转基因玉米(Mon810)、转基因抗草甘膦油菜、转基因棉花(保龄棉)、非转基因番茄、马铃薯、茄子、大椒、大米、小麦、烟草等为试材,证明本方法同其它转基因作物及其它蔬菜无非特异性反应.本方法在检测华番一号番茄时,相对检测灵敏度可达到0.1%,绝对灵敏度达到20个拷贝.由于本方法的PCR扩增产物长度只有108bp,因此该方法也可以用于检测加工产品中的转基因成分,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法.     

微流控芯片检测技术及其在植物检疫领域的应用前景展望

微流控芯片（Microfluidic chip）技术是一种可精确操控微小通道中纳升至微升级尺度液滴进入反应区,开展高通量检测的现代生物技术。本文简要介绍了微流控芯片材料和加工技术的发展及优势,重点阐述了该技术与重组酶聚合酶扩增（RPA）、环介导等温扩增（LAMP）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）等技术的融合,及其在微生物及转基因高通量检测中的原理及应用案例,探讨了该技术在植物检疫领域针对危险性有害生物开展检测鉴定的应用前景。综合分析认为,微流控芯片技术具有试剂消耗少、检测速度快、检测通量高、操作简便等优势,针对某类危险性有害生物以及某种植物或植物产品上的所有危险性有害生物开展高通量检测,均有十分广阔的发展空间和应用前景。     

五氯酚及其钠盐的样品前处理方法和残留检测技术研究进展

五氯酚作为一种持久性有机污染物,曾被用作杀虫剂、抗菌剂和防腐剂等,其性质稳定且不易降解。残留于环境中的五氯酚及其钠盐五氯酚钠（统称 PCPs）可以通过生物富集作用进入食物链,进而残留于动物性食品中。本文综述了国内外PCPs的相关标准和法律规定,并比较了中国关于PCPs的不同标准,分析了不同基质中PCPs的样品前处理方法和常用检测技术,对食品中PCPs的残留检测技术研究和应用前景进行了展望。     

转基因大豆外源基因的漂移风险

转基因作物外源基因的漂移已为国内外学者所证实。我国每年进口转基因大豆的数量巨大,转基因大豆外源基因的漂移对我国传统的大豆作物和生态环境是一个潜在威胁。本文论述了转基因大豆的概况和外源基因漂移的风险,并对进境转基因大豆的检测监管进行了思考。     

基于RNA干扰原理抗病毒转基因作物的应用及安全性

基因沉默是广泛存在于各种生物中的一种古老现象,是生物抵抗外来入侵者的保护机制。RNA干扰（RNA interference,RNAi）则是近年来发现的一种重要基因沉默现象。此策略已在植物抗病毒育种等研究中应用,如对水稻、大麦、大豆、玉米、马铃薯、番茄、辣椒、木瓜、南瓜、李、烟草等的抗病毒研究。在转基因抗病毒展现出诱人的前景时,对转基因抗病毒植物释放的安全性问题的关注也越来越多。本文介绍了RNAi的作用机制,在转基因抗病毒育种中的应用,并探讨了以RNAi为基础的转基因抗病毒作物的食用安全性和环境安全性等问题。     

转苏云金杆菌毒蛋白基因水稻抗螟性的离体叶片测定法

提出了转苏云金杆菌ｃｒｙｌＡｂ基因水稻抗螟性的快速离体叶片测定法,并用该方法评价了转ｃｒｙ１／Ａｂ基因水稻对二化螟、三化螟和大螟的抗性程度。结果表明,３种螟虫蚁螟取食纯合株系ＰＲ１６及分离株系ＰＲ１８、ＰＲ５７或ＰＲ５８中抗性植株中片后,食叶量与对照和分离株系中的非抗性植株相比极显著下降,接虫后第４ｄ的幼虫死亡率高达１００％。该方法评价转ｃｒｙ１／Ａｂ基因水稻对３种螟虫的抗性结果与活化成株测定法评     

由规范残留试验数据推荐农药最大残留限量的方法概述

农药最大残留限量(MRLs)是指农药在食品和饲料中的最高法定容许残留浓度。MRLs的制定可检验食品生产过程中是否严格执行良好农业规范(GAP),对农产品的进出口贸易影响很大,因而,制定MRLs所依据的方法也尤为重要。综述了欧盟、北美自由贸易协定(NAFTA)成员国及经济合作与发展组织(OECD)等管理机构提出的几种基于统计学原理的估算方法,比较并讨论了各方法的优缺点。EU methodⅠ方法目前已在欧盟各国广泛使用,对于相同或相近的数据集,采用该方法可得出一致的评估结果,但该方法建立在残留数据呈正态分布这一假设基础之上,而欧盟却并未对此假设的合理性作出相应的评估和测试;EU methodⅡ方法适用于对任意分布的数据集的MRLs进行评估,涉及到的计算不会受到数据集中高残留数据的影响,该方法建立在将第75百分位数值加倍以确保估算得出的MRLs足够高且不会被超过的原理基础之上,但目前尚未从统计学角度对该原理予以证明;NAFTA对数正态分布方法是在EU methodⅠ基础上的改进方法,也称作"95/99法则",该方法能对所有呈对数正态分布的残留数据第95百分位数的95%置信上限提供无偏估计,但要求田间试验数据集接近对数正态分布,数据集必须具有足够大的样本量以确保能准确评估第99百分位数和第95百分位数的置信上限,且数据集中必须有足够数量的高于检测限的残留数据;目前最新版本的OECD计算器方法不再对数据分布进行讨论,方法的精确度能随着数据集样本量的增加而提高,且能对高百分位数,如至少具有15到20个数据点的数据集的第95百分位数提供十分准确的估算。 目前,OECD工作组正在探索"平均值+4倍标准差"的评估方法,该方法能对呈对数正态分布数据集的第95百分位数进行更好的估计。     

分散固相萃取-气相色谱法测定含油食品中亚胺唑的残留

建立了检测含油类食品(核桃、花生油和干辣椒粉)中亚胺唑残留的分散固相萃取-气相色谱分析方法。样品中的亚胺唑经乙腈提取,N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)和十八烷基键合硅胶吸附剂(C18)混合分散固相萃取净化剂净化,气相色谱法测定,基质标准曲线-外标法定量。结果显示:在0.005~10 mg/L范围内,亚胺唑的色谱峰面积与其质量浓度间呈良好的线性关系,相关系数r > 0.99;定量限为0.05 mg/kg。在0.05、0.1和1 mg/kg添加水平下,亚胺唑在核桃、花生油及干辣椒粉基质中的添加回收率为82%~107%,相对标准偏差为3.0%~6.3%。方法各项性能均能满足对含油食品中亚胺唑残留分析的要求。     

Tissue culture methods for the screening and analysis of putative virus-resistant transgenic potato plants

ABSTRACT Following regeneration, putative virus-resistant transgenic plants are usually transferred from tissue culture to a greenhouse or growth chamber to screen for resistance to infection and disease development using mechanical, graft, or insect vector inoculation methods. To reduce initial screening costs and time, we developed mechanical and graft inoculation methods suitable for tissue culture use. The in vitro methods were validated by comparing them with similar greenhouse screens using putative potato virus Y strain o (PVY degrees ) replicase-mediated resistant regenerants of the potato cultivar Atlantic. Five transgenic lines were tested, with similar results obtained from in vitro and greenhouse experiments. Two of the transgenic lines, A1 and A3, showed the greatest resistance to PVY degrees infection, as indicated by low enzyme-linked immunosorbent assay values and infection rates. In vitro mechanical inoculation methods were also used to infect wild-type tomato and tobacco plants with cucumber mosaic virus and potato virus Y. Potato plants were also infected with the phloem-restricted potato leafroll virus, a low-titer virus, using in vitro graft inoculation methods. These results suggest the potential usefulness of these simple, effective, and economical techniques for screening large numbers of putative virus-resistant plants.     

转基因抗虫玉米对节肢动物多样性影响研究进展

随着基因工程技术的发展，越来越多的转基因抗虫作物进入商业化应用，为农业生产带来诸多惠益的同时，对农田生态环境安全也可能存在潜在的风险，特别是抗虫作物对农田节肢动物多样性的影响一直是研究热点。本文通过对靶标生物和非靶标生物影响研究方法及已有研究结果的总结分析，分析了节肢动物多样性研究方法的局限性，提出了可行性建议，以期为我国抗虫玉米环境安全评价研究提供参考。     

3种转基因成分检测蛋白芯片的研制

为研制一种可同时检测3种转基因成分BTCry1Ac蛋白、植酸酶蛋白、BTCry1Ah蛋白的蛋白芯片。本文将3种转基因成分蛋白质的单克隆抗体点于化学修饰的基片上,对芯片的表面修饰材料、点样缓冲液成分、封闭液种类、标记二抗使用浓度、反应时间进行优化,并对芯片检测的特异性、灵敏度进行测定。结果表明:研制芯片的表面为环氧修饰,使用含0.1%BSA和30%甘油的点样缓冲液和含1%BSA的封闭液,每次反应时间为30min时,有最佳反应结果;其检测灵敏度为:BTCry1Ac蛋白35ng/mL、植酸酶蛋白20ng/mL、BTCry1Ah蛋白30ng/mL,信号稳定;本研究建立的抗体蛋白芯片检测法可同时检测3种转基因蛋白,并具有较高的灵敏性、特异性和可靠性。     

改进的直接组织斑免疫测定法在植物病毒及细菌检测中的应用

 以改进的直接组织斑免疫测定(IDDTB)的直接法,用碱性磷酸酯酶(Ap)或辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体(IgG)检测病组织中的马铃薯X病毒(PVX)、菁花叶病毒(TuMV)和马铃薯青枯细菌均获得了满意的结果。该法明显地比酶联免疫吸附测定(ELISA)和圆点免疫结合测定(DIBA)的试验程序简单、快速和准确可靠,整个检测程序可在1.5~2小时内完成。据推算其检测PVX的灵敏度相当于0.625ng/ml,可检测病叶的最低稀释度相当于1:320。以IDDTB的间接法用Ap标记的羊抗兔IgG或HRP标记的鼠抗免IgG以及兔抗病毒和细菌的多克隆抗体(IgG)检测病组织中的烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)和马铃薯环腐细菌,除耗时比上述直接法稍长外(约3小时),同样获得较满意的结果。两法均适于在田间应用。IDDTB直接法和间接法检测结果的可靠性均由免疫电镜法得到证实。上述免疫反应的结果因底物不同呈现不褪色的蓝色或深紫色,极易同健康叶片呈现的绿色相区别,并可在室温条件下长期保存。     

植物病害管理与生物安全

植物病害管理是一个复杂的系统工程,病害管理过程中采取的一系列措施和方法会对生物安全产生积极或消极作用。本文论述了植物检疫、转基因抗病植物、转基因生防微生物、生物多样性、农业防治、化学防治等与生物安全的关系及在病害管理中应注意的问题,指出病害风险评估和转基因生物风险分析对生物安全具有重要意义。