基于DNA条形码的广西苦瓜中实蝇幼虫分子鉴定研究*

实蝇是多种热带、亚热带水果和蔬菜的重要害虫,其卵、幼虫、蛹难以通过形态特征进行种类鉴定。DNA条形码是近年来出现的物种分子鉴定技术,能够实现对昆虫非成熟虫态的快速鉴定。本研究利用DNA条形码技术和BOLD系统,选取线粒体DNA细胞色素氧化酶I（COI）基因片段,针对采自于广西南宁地区苦瓜中的实蝇幼虫样品进行了序列测定、比对和分析。结果显示,在所检测的10头实蝇幼虫样品中,有4头为瓜实蝇［Bactrocera cucurbitae (Coquillett)］、6头为南亚果实蝇［Bactrocera tau (Walker)］。     

乌鲁木齐局再次截获桃实蝇

乌鲁木齐局再次截获桃实蝇１９９７年７月１３日在对伊斯兰堡至乌鲁木齐７２２次航班入境旅客携带物实施检疫时，截留１箱芒果（约２０枚），其中有３枚芒果检出１４头实蝇幼虫。经室内饲养１４头实蝇幼虫，７月２５～２６日全部羽化，鉴定为桃实蝇Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ（...     

基于DNA条形码技术的泰国番石榴中实蝇幼虫分子鉴定研究

实蝇是世界重要的检疫性害虫之一,对果蔬生产及其国际贸易具有很大的影响。而以线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位I(mtDNACOI)基因的部分序列作为实蝇的DNA条形码能减少对实蝇成虫形态特征的依赖,可检测其任何虫态的样品,有助于实蝇样品的快速鉴定。本研究采用DNA条形码技术,针对采自泰国四色菊市番石榴烂果中的5头实蝇幼虫进行COI扩增测序,与生命条形码数据库(BOLD)中的序列进行比对并利用PAUP4.0软件构建了其系统进化树。根据序列分析和系统进化关系分析的结果,将5头实蝇幼虫样品鉴定为番石榴实蝇(Bactrocera correctaBezzi),并将本研究获得的2条COI序列在GenBank中注册,GenBank的登录号为HM590450和HM590451。     

广东口岸首次截获入侵果实蝇

2008年10月广州机场出入境检验疫局从印度旅客携带的苹果中检查发现有实蝇幼虫为害.进一步在室内培美羽化出成虫,经广东检验检疫局技术中心植检室专家鉴定为重要的检疫性害虫-入侵果实蝇(Bactrocera invadents Drew et al),为我国口岸首次截获.     

SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇

本文应用SYBRGreen实时荧光PCR技术,建立了SYBRGreen实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇的方法。利用辣椒实蝇mtDNACOI基因序列,筛选出种特异引物lati1/lati2。引物的特异性分别用辣椒实蝇、橘小实蝇、木瓜实蝇、杨桃实蝇、菲律宾实蝇、芒果实蝇、番石榴实蝇、瓜实蝇和南瓜实蝇等9种果实蝇来验证。0.01ng,0.1ng,1ng,10ng,20ng,40ng和100ng等7个不同浓度系列的辣椒实蝇DNA模板用来检测SYBRGreenPCR实时荧光反应的灵敏度,结果表明,SYBRGreenPCR的检测限度达1pg以下,最适模板DNA浓度为1～20ng。成虫、幼虫和蛹等3种不同虫态的辣椒实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性。其平均熔解温度为77.5℃±0.1℃。获得1段长为366bp的特异性目标片段,说明在辣椒实蝇成虫为模板基础上建立的SYBRGreen实时荧光PCR方法适于幼虫、蛹的快速鉴定。     

PCR法检疫鉴定番石榴实蝇

利用mtDNA序列,设计出两对特异性引物,应用定性PCR技术检疫鉴定番石榴实蝇.本方法适用于成虫鉴定和未成熟虫态(卵、幼虫、蛹)的快速检疫鉴定.     

来自越南的芒果感染桔小实蝇

1991年4月29日,越南商人运载2500kg 芒果进入我广西东兴边境贸易点进行贸易。我所驻点检疫人员在检疫时,截获寡鬃实蝇类幼虫38头。经室内饲养羽化成虫进行鉴定为桔小实蝇 Dacus dorsalis Hendel。在芒果上发现该虫属首次。该批芒果来自越南西     

云南昭通蜜柑大实蝇和橘大实蝇的DNA条形码鉴定

蜜柑大实蝇(Bactrocera tsuneonis)和橘大实蝇(Bactrocera minax)属果实蝇属(Bactrocera)大实蝇亚属(Tetradacus),是为害柑橘类作物的两种检疫性实蝇。两种实蝇为近似种,仅成虫可通过形态特征进行鉴定,幼虫等非成虫虫态需采用分子生物学技术才能实现快速、准确的鉴定。本研究对采自云南省昭通市大关县、彝良县和永善县的大实蝇成虫及幼虫样品分别进行了形态鉴定和DNA条形码鉴定。结果表明,通过形态特征的对比以及DNA条形码序列的测定、比对和分析,采自大关县和彝良县的20头成虫样品分别为蜜柑大实蝇和橘大实蝇,采自彝良县和永善县的20头幼虫样品均为橘大实蝇。本研究实现了云南昭通地区两种大实蝇的DNA条形码鉴定,为我国植物检疫相关部门提供实用技术及决策支持。     

γ-射线对菲律宾实蝇的辐照处理

菲律宾实蝇是菲律宾芒果上危害十分严重的检疫性害虫。本文以Co~(60)为辐照源,研究了γ-射线辐照处理对菲律宾实蝇化蛹、羽化、成虫寿命、产卵及卵孵化的影响。试验结果表明,经10～150 Gy剂量γ-射线辐照处理下,菲律宾实蝇老熟幼虫化蛹率未显著变化,但蛹的羽化率随剂量升高而显著降低。受辐照处理的老熟幼虫,羽化出的成虫寿命缩短、产卵量和卵孵化率随处理剂量增高而降低。     

加拿大蓟瘿蝇的鉴定

河北出入境检验检疫局从美国进口大豆中截获两头虫蛹,并对虫蛹进行培养羽化至实蝇成虫。通过对成虫的形态学鉴定和DNA条形码分析,确定该实蝇为加拿大蓟瘿蝇(Urophora cardui),为我国首次截获。本文分析了该实蝇传入我国可能存在的风险,提出应加强口岸检疫,提升鉴定水平等检疫措施。     

杧果小条实蝇分子鉴定

通过对截获于澳门入境旅客携带芒果中的实蝇（SH78）进行线粒体COⅠ、COⅡ和COⅢ基因序列的扩增测序,并与GenBank中相关的序列进行比对,结果表明截获实蝇样品线粒体COⅠ基因序列和柱果小条实蝇Ceratitis cosyra（AY788421）相似性为98.87%;COⅡ基因序列与柱果小条实蝇（C.cosyra） （AY805310）和C.cosyra（AY805311）相似性分别为99.27%和98.11%;COⅢ基因序列和C.cosyra （DQ462338）相似性为89.10%。基于COⅠ和COⅡ序列构建的系统发育树中,截获实蝇样品和杧果小条实蝇最为接近。根据序列分析和系统发育关系分析的结果,将截获的实蝇鉴定为杧果小条实蝇（Ceratitis cosyra）。鉴定结果与形态鉴定结果相同。     

海南三亚崖州湾科技城发现番石榴果实蝇

番石榴果实蝇Bactrocera correcta(Bezzi)严重为害番石榴、莲雾、芒果等果蔬植物,我国将果实蝇属Bactrocera (非中国种)列为进境植物检疫性有害生物。2021年10月至2022年6月,在海南省三亚市崖州湾科技城内连续9个月诱捕到疑似番石榴果实蝇成虫。本研究通过形态特征、DNA条形码和常规PCR等方法,对诱捕到的疑似样品进行了鉴定。鉴定结果表明,诱捕到的实蝇样品为番石榴果实蝇,相关植物检疫机构需进一步加强海南地区番石榴果实蝇的检疫、监测及防控。     

从榴莲蜜上截获三带实蝇

凭祥海关从越南进境旅客携带的榴莲蜜上截获1种实蝇幼虫,利用成虫形态特征和分子特征进行鉴定。结果表明:该虫成虫中胸侧板条伸达肩胛;翅上具有沿bm-cu脉、r-m脉与dm-cu脉以及穿过M脉端部的3条横向条纹;bc室深色;COI基因序列分析表明该实蝇幼虫的序列与GenBank和BOLD Systems中的B. umbrosa序列相似性达99%～100%;基于COI序列的系统发育树分析表明与B. umbrosa聚在同一个分枝上。结合形态和分子鉴定结果,将其鉴定为三带实蝇(Bactrocera umbrosa Fabricius)。这是我国口岸首次从榴莲蜜上截获该虫。     

进口泰国辣椒中检出辣椒实蝇

1994年8月17日,北京某饭店自泰国进口鲜辣椒10公斤。现场检疫发现有蝇类蛀食,进一步剖果共检出幼虫30多头、蛹6头。经室内人工饲养,至8月28日羽化成虫,鉴定为辣椒实蝇。辣椒实蝇为寡鬃实蝇属,在我国进境植物检疫危险性和病虫杂草名录中为二类害虫。现将此虫有关资料介绍如下。学名:bactrocera(Bactrocera)latifrins(Hendel)异名:Chaetodacus latifrons Hendel; Dacus Latifrons(Hendel); D.(strumeta)latifrons(Hendal)中名:辣椒实蝇 宽额寡鬃实蝇 锈腹实蝇     

广东口岸首次截获葡萄腊实蝇

2007年1月和3月广州机场出入境检验检疫局分别截获来自尼日利亚旅客携带的金叶树（Chrysophyllum sp）果实,经实验室检查发现有实蝇幼虫为害,进一步室内培养羽化出成虫,经广东检验检疫技术中心植检室有关专家鉴定为一种重要的检疫性害虫葡萄腊实蝇（Ceratitis （Pardalas-pis） ditissimma （Miuuro））,为全国口岸首次截获。     

几内亚比绍的入侵果实蝇发生特点及综合防治对策

几内亚比绍芒果遭受实蝇的严重危害,以入侵果实蝇为优势种。本文介绍了几内亚比绍的入侵果实蝇的发生危害特点及综合防治对策。     

上海局从入境旅客携带的水果中截获南美按实蝇

2003年4月,上海口岸检疫人员从韩国入境航班的旅客携带的新鲜柿子中截获多头实蝇幼虫,饲养后羽化出成虫,经鉴定为南美按实蝇Anastrepha fraterculus(Wiedemann)见封面］.     

从边贸入境的芒果中截获桔小实蝇和芒果果实象甲

20 0 0年 4月 30日 ,凭祥局检疫人员在浦寨边贸点对自越南边贸入境的 1车芒果抽样剖果检查时 ,截获隐喙象甲成虫、蛹和蛆形幼虫 ,其中有 1只芒果在果肉中发现有 5头蛆形幼虫 ,经室内饲养羽化出成虫 ,鉴定为桔小实蝇Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ(Ｂ .)ｄｏｒｓａｌｉｓ(Ｈｅｎｄｅｌ)。     

^60Co—γ射线辐照芒果实蝇幼虫试验初报

本文报道用~(60)Co-r射线辐照进口水果作为新的检疫处理技术的探讨。初步得出的结果认为,0.15～1.20 kGy剂量的辐照处理,对芒果中的芒果实蝇Dacus occipitalis(Bezzi)老熟幼虫有杀灭效果;未被杀死的幼虫可以化蛹,但不能羽化。幼虫全部死亡或化蛹所需时间随辐照剂量的增大而缩短,最长的需40天,最短的仅需7天。本试验所用的辐照剂量均能满足检疫除害处理的要求。同时,水果营养成分分析表明,经0.60kGy和0.90kGy辐照后水果其总酸度和维生素C与对照相比无明显差异。从杀虫除害效果、卫生安全标准和降低辐照费用等方面考虑,进口芒果检疫除害处理的合理辐照剂量是0.30kGy。     

斑翅果蝇的PCR-RFLP快速鉴定方法

应用PCR-RFLP技术分析斑翅果蝇及其相关种间的差异。选用果蝇COI基因通用引物并通过PCR扩增斑翅果蝇、亚艳丽果蝇等11种15个样品COI基因序列,对PCR产物进行回收和测序,根据测序结果及NCBI上序列比对结果,选用限制性内切酶ApaⅠ和HinfⅠ分别对果蝇COI基因PCR产物进行酶切,酶切产物经琼脂糖电泳分析。结果表明:同时使用ApaⅠ和HinfⅠ酶,可以将斑翅果蝇与其他种相区分。根据果蝇COI基因建立的PCR-RFLP技术可对斑翅果蝇快速、准确进行鉴定。